16 mitokondria, ekstraseluler SOD EC-SOD dan besi-SOD Fe-SOD yang hanya
ditemukan pada tumbuhan Putra, 2014. Enzim SOD terdapat dalam semua organisme aerob dan sebagian besar
berada dalam tingkat subseluler intraseluler. Organisme aerob selalu membutuhkan oksigen untuk hidupnya, namun dalam setiap aktivitasnya dapat
menimbulkan senyawa oksigen reaktif atau ROS. SOD merupakan enzim antioksidan pencegah, yang merupakan suatu antioksidan metalloenzim. SOD
berefek sangat kuat dan merupakan pertahanan tubuh pertama dalam menghadapi serangan radikal bebas. SOD adalah enzim antioksidan intraseluler utama yang
dapat digunakan untuk menetralisir aktivitas O
2 -
Putra, 2014.
2.5 Penentuan Aktivitas Antioksidan Dengan Metode DPPH
Pada tahun 1922, Goldschmidt dan Renn menemukan senyawa berwarna ungu radikal bebas stabil DPPH, yang sekarang digunakan sebagai reagen
kolorimetri untuk proses redoks. DPPH sangat berguna dalam berbagai penyelidikan seperti inhibisi atau radikal polimerisasi kimia, penentuan sifat
antioksidan amina, fenol atau senyawa alami vitamin, ekstrak tumbuh-tumbuhan, obat obat-obatan dan untuk menghambat reaksi homolitik. DPPH berwarna
sangat ungu seperti KMnO
4
dan bentuk tereduksinya yaitu 1,1-difenil-2- picrylhydrazine
DPPH-H yang berwarna oranye-kuning. DPPH tidak larut dalam air Ionita, 2005.
2.5.1 DPPH
DPPH merupakan singkatan umum untuk senyawa kimia organik yaitu 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil
. DPPH adalah bubuk kristal berwarna gelap terdiri dari molekul radikal bebas yang stabil. DPPH mempunyai berat molekul 394.32
Universitas Sumatera Utara
17 dengan rumus molekul C
18
H
12
N
5
O
6
, larut dalam air. Penyimpanan dalam wadah tertutup baik pada suhu -20°C Molyneux, 2004.
Gambar 2.1 Rumus Bangun DPPH Molyneux, 2004
DPPH merupakan radikal bebas yang stabil pada suhu kamar. Prinsip metode pemerangkapan radikal bebas DPPH, yaitu elektron ganjil pada molekul
DPPH memberikan serapan maksimum pada panjang gelombang 516 nm. Interaksi antioksidan dengan DPPH baik secara transfer elektron atau radikal
hidrogen pada DPPH akan menetralkan karakter radikal bebas dari DPPH Molyneux, 2004. Warna ungu larutan DPPH akan berubah menjadi kuning
lemah apabila elektron ganjil tersebut berpasangan dengan atom hidrogen yang dari senyawa antioksidan Prakash, 2001. Reaksi radikal bebas DPPH dengan
antioksidan dapat dilihat pada gambar 2.2 berikut:
Gambar 2.2 Reaksi radikal bebas DPPH dengan antioksidan Prakash, 2001
Universitas Sumatera Utara
18
2.5.2 Pelarut
Metode DPPH akan bekerja dengan baik menggunakan pelarut metanol atau etanol karena kedua pelarut ini tidak mempengaruhi dalam reaksi antara
sampel uji sebagai antioksidan dengan DPPH sebagai radikal bebas Molyneux, 2004.
2.5.3 Pengukuran panjang gelombang
