14
3.4.2. Pembuatan Media
Media yang digunakan adalah media dasar MS Murashige dan Skoog, 1962 dengan penambahan ZPT 2,4-D. Tahap awal pembuatan media adalah pembuatan
larutan stok terlebih dahulu yaitu hara makro, mikro, iron, dan vitamin. Unsur- unsur lain ditimbang sesuai kebutuhan seperti sukrosa dan agar. Pembuatan media
sebanyak 1000 ml.
Larutan MS dibuat dengan cara memasukkan hara makro, mikro, iron, vitamin, sukrosa, ZPT ke dalam beaker glass lalu ditambahkan akuades sehingga
volumenya menjadi 500 ml. Larutan dibagi dalam 5 beaker glass dan masing- masing berisi 100 ml, setiap bagian ditambahkan ZPT berupa 2,4-D sesuai dengan
konsentrasi untuk masing-masing perlakuan, kemudian ditambahkan dengan akuades sehingga volumenya menjadi 200 ml. pH diatur sebesar 5,8 dengan cara
menambahkan HCl 0,1 N atau NaOH 0,1 N. Dimasukkan Bacto agar 10 gl pada masing-masing perlakuan, lalu dipanaskan hingga mendidih dan dituang ke dalam
botol kultur yang telah diberi label sesuai banyaknya ulangan. Botol kultur yang telah berisi media ditutup dengan aluminium foil dan plastik, diikat dengan karet
gelang, disterilisasi dalam autoklaf bertekanan 15 psi pada suhu 121 C selama 30
menit kemudian disimpan dalam ruang kultur lebih kurang selama 1 minggu sebelum digunakan.
3.4.3. Sterilisasi Eksplan
Eksplan berupa apical bud kelapa sawit dibersihkan dengan air mengalir dan direndam dalam detergen selama
+
10 menit, kemudian dibilas dengan akuades steril hingga bersih. Eksplan dishaker dalam larutan fungisida 0,2 yang
diberi 200 µl tween 80
®
selama 30 menit. Selanjutnya dibilas dengan akuades
steril. Eksplan direndam dalam larutan antibiotik Betadine
®
selama 10 menit dan dibilas dengan akuades steril. Bahan tanaman dimasukkan ke dalam larutan Na-
hipoklorit 1,0 selama 5 menit dan dibilas dengan akuades steril. Tahap selanjutnya bahan tanaman direndam dalam larutan HgCl
2
0,1 selama 30 menit, dan dibilas tiga kali dengan akuades steril masing-masing 5 menit. Eksplan steril
dikeringkan di atas cawan petri steril yang berisi kertas saring. Eksplan siap ditanam Zulkarnain, 2009.
Universitas Sumatera Utara
15
3.4.4. Induksi Kalus