Triterpenoid pentasiklik paling tersebar luas, umumnya pada tumbuhan berbiji, baik dalam bentuk bebas maupun sebagai glikosida. Sering ditemukan
bentuk nonglikosida sebagai ekskresi dan dalam kutikula sebagai pelindung terhadap air. Salah satu contohnya yang banyak terdapat pada tumbuhan adalah β-
amirin Robinson, 1995.
β-amirin Triterpenoid memiliki beberapa aktivitas fisiologi, antara lain untuk
penyakit diabetes, gangguan menstruasi, patukan ular, gangguan kulit, kerusakan hati dan malaria. Beberapa senyawa menunjukkan aktivitas antibakteri atau
antivirus Robinson, 1995. Senyawa ini merupakan senyawa yang tidak berwarna, berbentuk kristal, bertitik leleh tinggi dan optik aktif, yang umumnya
sukar dicirikan karena tidak mempunyai kereaktifan kimia. Kebanyakan triterpena dan sterol memberikan warna hijau-biru dengan pereaksi Liebermann-Burchard
Harbone, 1987.
2.3 Ekstraksi
Ekstraksi adalah kegiatan penarikan zat aktif yang dapat larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair. Pemilihan pelarut
dan cara ekstraksi yang tepat dapat dipermudah dengan mengetahui terlebih dahulu zat aktif yang dikandung simplisia. Ekstraksi dipengaruhi oleh derajat
Universitas Sumatera Utara
kehalusan serbuk dan perbedaan konsentrasi. Jika hanya dengan mencelupkan serbuk simplisia ke dalam pelarut, maka ekstraksi tidak akan sempurna karena
terjadi kesetimbangan antara larutan zat aktif di luar sel dan larutan zat aktif di dalam sel Depkes, 1986.
Menurut Depkes 2000, ekstraksi dapat dilakukan dengan berbagai cara, salah satunya maserasi. Maserasi adalah proses ekstraksi menggunakan pelarut
dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan. Maserasi dilakukan dengan merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari,
dimana cairan akan berdifusi dengan dinding sel yang mengandung zat aktif. Pengadukan dilakukan untuk menjaga adanya derajat perbedaan konsentrasi
antara larutan di luar sel dan di dalam sel. Larutan yang terpekat didesak keluar dinding sel sampai terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan di luar sel dan
di dalam sel Depkes, 1986. Pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan hasil
maserasi pertama dikenal dengan remaserasi. Selain maserasi, ekstraksi dapat dilakukan dengan perkolasi, serta ekstraksi cara panas, antara lain dengan cara
refluks, sokhlet, digesti, infus dan dekok Depkes, 2000.
2.4 Kromatografi
Kromatografi merupakan suatu teknik pemisahan yang menggunakan fase diam stationary phase dan fase gerak mobile phase. Saat ini, kromatografi
merupakan teknik pemisahan yang paling umum dimanfaatkan untuk melakukan analisis, baik analisis kualitatif maupun kuantitatif, atau preparatif dalam bidang
farmasi Rohman, 2007.
Universitas Sumatera Utara
2.4.1 Kromatografi Lapis Tipis
Penggunaan umum KLT adalah untuk menentukan banyaknya komponen dalam campuran, identifikasi senyawa, memantau proses reaksi, menentukan
efektifitas pemurnian, menentukan kondisi yang sesuai untuk kromatografi kolom, serta untuk memantau kromatografi kolom, melakukan screening sampel untuk
obat Rohman, 2007. Fase diam pada KLT sering disebut penyerap, biasanya dapat melewati
ayakan 250 mesh dengan ukuran partikel lebih kecil dari 63µ m. Gritter, et al., 1991. Banyak penyerap yang telah digunakan, termasuk silika gel dengan
ketebalan sekitar 0,10 sampai 0,25 mm, didukung oleh plat kaca, aluminium atau plastik Wall, 2005.
Permukaan polar dari gugus hidroksi silika gel berfungsi menarik molekul sampel. Lapisan silika gel harus sesedikit mungkin mungkin mengandung air,
sehingga harus diaktifkan dengan pemanasan pada 100 C selama 1-3 jam. Jika
suhu pengaktifan jauh di atas 110 C terjadi dehidrasi yang tak bolak-balik
menyebabkan pemisahan kurang efektif Gritter, et al., 1991. Fase gerak adalah medium angkut, terdiri dari satu atau beberapa pelarut,
yang bergerak di dalam fase diam, yaitu suatu lapisan berpori karena adanya gaya kapiler Stahl, 1985. Pemilihan sistem pelarut yang dipakai didasarkan atas
prinsip like dissolves like, artinya untuk memisahkan sampel yang bersifat nonpolar digunakan sistem pelarut yang bersifat nonpolar juga. Proses
pengembangan akan lebih baik bila ruangan pengembangan tersebut telah jenuh dengan uap sistem pelarut Adnan, 1997.
Universitas Sumatera Utara
Nilai dihitung dengan menggunakan perbandingan sebagaimana
persamaan sebagai berikut:
Nilai maksimum adalah 1, solut bermigrasi dengan kecepatan sama dengan
fase gerak. Nilai minimum adalah 0, dan ini teramati jika solut tertahan pada
posisi titik awal di permukaan fase diam Rohman, 2007. Faktor-faktor yang mempengaruhi harga Rf pada KLT, antara lain:
struktur kimia dari senyawa yang dipisahkan, sifat dari penyerap dan derajat aktivitasnya, tebal dan kerataan lapisan penyerap, derajat kemurnian fase gerak,
derajat kejenuhan uap pengembang pada bejana, jumlah cuplikan dan suhu Sastrohamidjojo, 1991.
2.4.2 Kromatografi Kolom
Penggunaan kolom besar merupakan metode kromatografi untuk pemisahan campuran dalam jumlah besar lebih dari 1 g. Campuran yang akan
dipisahkan berupa pita pada bagian atas kolom penyerap. Fase gerak dialirkan melalui kolom oleh gaya berat atau oleh tekanan. Pita campuran bergerak melalui
kolom dengan laju yang berbeda, memisah, dan dikumpulkan berupa fraksi Gritter, et al., 1991.
Ukuran partikel penyerap untuk kolom dengan gaya tarik bumi biasanya lebih besar daripada untuk KLT, yaitu 63-250 µ m, dapat melewati ayakan mesh
70-230; sedangkan untuk kolom dengan tekanan biasanya lebih kecil daripada untuk KLT Gritter, et al., 1991; Hostettmann, et al., 1995.
Karena memerlukan waktu yang lama dan bahan yang cukup banyak, perlu dipastikan campuran pelarut yang terbaik untuk pemisahan. Masalah ini
Universitas Sumatera Utara
dapat dipecahkan melalui tiga pendekatan, antara lain penelusuran pustaka, penerapan data KLT dan pemakaian elusi landaian Gritter, et al., 1991.
Fraksi kolom yang mengandung senyawa yang sama diperiksa dengan KLT digabungkan, diuapkan dengan tekanan rendah. Jika pelarut dan penyerap
murni, maka fraksi-fraksi pun murni. Namun mungkin masih diperlukan penghabluran ulang atau penyulingan kasar untuk memperoleh senyawa murni
Gritter, et al., 1991.
2.5 Spektoskopi
Spekstroskopi adalah studi mengenai interaksi cahaya dengan atom dan molekul. Radiasi cahaya dan elektromagnetik dapat dianggap menyerupai
gelombang. Creswell, et al., 2005.
2.5.1 Spektrofotometri Ultraviolet
Spektrum ultraviolet merupakan gambaran antara panjang gelombang serapan dan intensitas serapan absorbansi. Panjang gelombang serapan
merupakan ukuran pemisahan tingkatan energi dari orbital-orbital. Intensitas dari berkas cahaya sebanding dengan jumlah foton per detik yang melalui satu satuan
luas penampang Sastrohamidjojo, 1991. Apabila suatu molekul menyerap radiasi ultraviolet, di dalam molekul
tersebut terjadi perpindahan tingkat energi elektron-elektron ikatan di orbital molekul terluar dari tingkat energi terendah ke tingkat energi yang tertinggi. Baik
molekul senyawa organik maupun anorganik dapat menyerap radiasi ultraviolet Noerdin, 1985. Semakin kecil perbedaan energi antara tingkat terendah dan
Universitas Sumatera Utara
tingkat tereksitasi, maka semakin besar panjang gelombang dari serapan Silverstein, et al., 1986.
Serapan transisi n →л terjadi pada panjang gelombang yang panjang dan
intensitas yang rendah Sastrohamidjojo, 1991, membutuhkan energi yang lebih sedikit daripada transisi л →л dan σ→σ Silverstein, et al., 1986.
2.5.2 Spektrofotometri Inframerah
Spektrofotometri inframerah merupakan teknik spektrofotometri tercepat dan termurah yang digunakan dalam kimia organik. Sampel dapat berupa padatan,
cairan atau gas, dan dapat diukur dalam larutan dengan KBr atau minyak mineral. Kemudian spektrum dapat diperoleh hanya dalam beberapa menit dari material
murni parsial dengan tujuan memberikan indikasi bahwa reaksi yang terjadi terjadi seperti yang diinginkan. Cooper, 1980.
Identifikasi senyawa yang tidak diketahui gugus fungsinya dapat diuji struktur inframerahnya, kemudian dideteksi menggunakan data korelasi
Sastrohamidjojo, 1991. Menurut Pavia, et al., 1988, langkah-langkah umum untuk memeriksa pita serapan adalah sebagai berikut:
1. Apakah terdapat gugus karbonil? Gugus C=O memberikan puncak pada
daerah 1820-1660 cm
-1
. Puncak ini biasanya merupakan yang terkuat dengan medium lebar pada spektrum.
2. Jika gugus C=O ada, periksa gugus-gugus berikut. Jika tidak ada, langsung ke
nomor 3. Asam
: Apakah ada O-H? Serapan lebar di daerah 3300-2500 cm
-1
. Biasanya tumpang tindih dengan C-H.
Universitas Sumatera Utara
Amida : Apakah ada N-H? Serapan medium di dekat 3500 cm
-1
, kadang- kadang dengan puncak rangkap.
Ester : Apakah ada C-O? Serapan medium di daerah 1300-1000 cm
-1
. Anhidrida : Mempunyai dua serapan C=O di daerah 1810 dan 1760 cm
-1
. Aldehida : Apakah ada C-H aldehid? Dua serapan lemah di daerah 2850-
2750 cm
-1
yaitu di sebelah kanan serapan C-H. Keton
: Jika kelima kemungkinan di atas tidak ada. 3.
Bila gugus C=O tidak ada. Alkoholfenol: Periksa gugus O-H, merupakan serapan lebar di daerah 3600-
3300 cm
-1
yang diperkuat adanya serapan C-O di daerah 1300- 1000 cm
-1
. Amina : Periksa gugus N-H, yaitu serapan medium di daerah 3500 cm
-1
. Eter
: Periksa gugus C-O serapan O-H tidak ada, yaitu serapan medium di daerah 1300-1000 cm
-1
. 4.
Ikatan rangkap dua danatau cincin aromatik. -
C=C mempunyai serapan lemah di daerah 1650 cm
-1
. -
Serapan medium sampai kuat pada daerah 1650-1450 cm
-1
sering menunjukkan adanya cincin aromatik.
- Buktikan kemungkinan di atas dengan memperhatikan serapan pada
daerah C-H aromatik di sebelah kiri 3000 cm
-1
, sedangkan C-H alifatis terjadi di sebelah kanan daerah tersebut.
5. Ikatan rangkap tiga.
- C
≡N mempunyai serapan medium dan tajam di daerah 2250 cm
-1
.
Universitas Sumatera Utara
- C
≡C mempunyai serapan lemah tapi tajam di daerah 2150 cm
-1
. Periksa juga CH asetilenik di dekat 3300 cm
-1
. 6.
Gugus nitro. Dua serapan kuat di daerah 1600-1500 cm
-1
dan 1390-1300 cm
-1
. 7.
Hidrokarbon. -
Apabila keenam kemungkinan di atas tidak ada. -
Serapan utama di daerah C-H dekat 3000 cm
-1
. -
Spektrum sangat sederhana, hanya terdapat serapan lain di daerah 1450- 1375 cm
-1
.
Universitas Sumatera Utara
BAB III METODE PENELITIAN
Metode penelitian meliputi pengumpulan dan pengolahan bahan tumbuhan, pembuatan ekstrak, analisis fraksi n-heksan yang dilanjutkan isolasi
senyawa triterpenoid menggunakan kromatografi kolom dan KLT preparatif. Isolat yang diperoleh diuji kemurniannya dengan KLT satu arah dan dua arah,
karakterisasi isolat dengan spektrofotometer ultraviolet dan inframerah.
3.1 Alat-alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat-alat gelas laboratorium, blender National, desikator, hairdryer Fransen, neraca digital
Vibra AJ, neraca kasar Home Line, oven listrik Memmert, penangas air Yenaco, penguap vakum putar Haake D1 Fisons, seperangkat alat KLT dan
alat kromatografi kolom, seperangkat alat penetapan kadar air, spektrofotometer inframerah IRPrestige21 Shimadzu, spektrofotometer ultraviolet UV1800
Shimadzu dan tanur.
3.2 Bahan-bahan
