Lampiran 3. Prosedur Analisis Mikrobiologi a.
TPC Total Plate Count SNI 2008
Sampel MP-ASI sebanyak 25 g ditimbang, kemudian masukkan dalam wadah steril. Pindahkan 1 ml suspensi pengenceran 10
-1
tersebut dengan pipet steril ke dalam laruten 9 ml BPW untuk mendapatkan
pengenceran 10
-2
. Buat pengenceran 10
-3
, 10
-4
, 10
-5
dan seterusnya dengan cara yang sama seperti pada butir a, sesuai kebutuhan. Selanjutnya
masukkan sebanyak 1 ml suspensi dari setiap pengenceran ke dalam cawan petri secara duplo. Tambahkan 15ml sampai dengan 20ml PCA yang
sudah didinginkan hingga temperatur 45 C
± 1 C pada masing-masing
cawan yang sudah berisi suspensi. Supaya larutan contoh dan media PCA tercampur seluruhnya, lakukan pemutaran cawan ke depan dan ke
belakang atau membentuk angka delapan dan diamkan sampai padat. Inkubasikan pada temperatur 34
C sampai dengan 36
C selama 24 jam sampai dengan 48 jam dengan meletakkan cawan pada posisi terbalik.
Hitung jumlah koloni pada setiap seri pengenceran kecuali cawan petri yang berisi koloni menyebar. Pilih cawan yang mempunyai jumlah koloni
sampai dengan 250. Jumlah koloni
Total mikroba kolonig = {1 x n
1
+ 0,1 x n
2
} x FP Keterangan :
n
1
= jumlah cawan pengenceran pertama n
2
= jumlah cawan pengenceran kedua FP
= pengenceran pertama pada cawan yang dihitung
b. MPN Koliform SNI 2008
Timbang sampel sebanyak 25 g kemudian masukkan ke dalam wadah steril. Pindahkan 1 ml larutan pengenceran 10
-1
tersebut dengan pipet steril ke dalam larutan 9 ml BPW 0,1 untuk mendapatkan pengenceran 10
-2
. Dengan cara yang sama seperti di atas dibuat pengenceran 10
-3
. Pipet
masing-masing 1 ml dari setiap pengenceran ke dalam 3 seri tabung LSTB yang berisi tabung Durham. Inkubasi pada temperatus 35
C selama 24 jam sampai dengan 48 jam. Perhatikan adanya gas yang terbentuk di dalam
tabung Durham. Hasil uji dinyatakan positif apabila terbentuk gas. Banyaknya koliform yang terdapat dalam contoh uji diinterpretasikan
dengan mencocokkan kombinasi jumlah tabung yang memperlihatkan hasil positif, berdasarkan tabel nilai MPN. Kombinasi yang diambil,
dimulai dari pengenceran tertinggi yang masih menghasilkan semua tabung positif, sedangkan pada pengenceran berikutnya terdapat tabung
yang negatif. Kombinasi yang diambil terdiri dari tiga pengenceran. Nilai MPN contoh dihitung sebagai berikut:
MPN contoh = x faktor pengenceran yang di tengah
c. Escherichia coli SNI 2008
Pengujian dilakukan dengan uji pendugaan, uji peneguhan dan isolasi-identifikasi melalui uji biokimia Indole, methyl red, Voges-
Proskauer dan Citrate IMViC. Timbang sampel sebanyak 25g kemudian masukkan ke dalam wadah steril. Pindahkan 1 ml larutan pengenceran 10
-1
tersebut dengan pipet steril ke dalam laruten 9 ml BPW 0,1 untuk mendapatkan pengenceran 10
-2
. Dengan cara yang sama seperti di atas di buat pengenceran 10
-3
. Pipet masing-masing 1 ml dari setiap pengenceran ke dalam 3 seri tabung LSTB yang berisi tabung Durham. Inkubasi pada
temperatur 35 C
selama 24 jam sampai dengan 48 jam. Perhatikan adanya gas yang terbentuk di dalam tabung Durham. Hasil uji dinyatakan positif
apabila terbentuk gas. Pengujian harus selalu disertai dengan menggunakan kontrol positif. Pindahkan biakan positif dengan
menggunakan jarum inokulasi dari setiap tabung LSTB ke dalam tabung ECB yang berisi tabung Durham. Inkubasikan ECB pada temperatur
45,5 C selama ± 2 jam, jika hasilnya negatif inkubasikan kembali selama
48 jam ± 2 jam. Perhatikan adanya gas yang terbentuk di dalam tabung Durham. Hasil uji dinyatakan positif apabila terbentuk gas. Selanjutnya
gunakan tabel MPN untuk menentukan nilai MPN berdasarkan jumlah
tabung ECB yang positif mengandung gas di dalam tabung Durham sebagai jumlah E.coli per mililiter atau per gram. Jumlah E.coli dinyatakan
berdasarkan hasil MPN, isolasi-identifikasi, dan uji biokimia.
d. Salmonella spp SNI 2008
