Penetapan Kadar Campuran Rifampisin dan Isoniazid dalam Sediaan Tablet Secara Spektrofotometri Ultraviolet dengan Metode Panjang Gelombang Berganda

No. Reg : DKL1031608509A1

Expired Date : Juli 2017

Komposisi : Rifampisin .…………... 450 mg Isoniazid .…………... 300 mg

Gambar 3.1 Spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu 1800)

V1 x N1 = V2 x N2

V1 x 12 N = 1000 mL x 0,1 N

V1 =

12

N

N

1

,

0

mL

1000

x

= 8,3 mL

diambil 5 mL

dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 mL

Larutan rifampisin 50 μg/mL (LIB II)

6 μg/mL 12 μg/mL

15 μg/mL

18 μg/mL diambil 1,2 mL

dilarutkan dan

dicukupkan dengan

HCl

diambil 2,4 mL

dilarutkan dan dicukupkan

dengan HCl

diambil 3 mL

dilarutkan dan dicukupkan

dengan HCl

diambil 1,8 mL

dilarutkan dan dicukupkan dengan HCl diambil 3,6 mL dilarutkan dan dicukupkan dengan HCl ditimbang 10mg

dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 mL

Larutan rifampisin 1000 μg/mL (LIB I)

diambil 2,7 mL

dilarutkan dan dicukupkan

diambil 5 mL

dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 mL

Larutan isoniazid 50 μg/mL (LIB II)

5 μg/mL 10 μg/mL

12,5 μg/mL

7,5 μg/mL

15 μg/mL diambil 1 mL

dilarutkan dan

dicukupkan dengan

HCl

diambil 2 mL

dilarutkan dan dicukupkan

dengan HCl

diambil 2,5 mL

dilarutkan dan dicukupkan

dengan HCl

d l

diambil 1,5 mL

dilarutkan dan dicukupkan dengan HCl diambil 3 mL dilarutkan dan dicukupkan dengan HCl diukur serapan maksimum

pada λ 200-400 nm

Serapan Maksimum

ditimbang 10mg

dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 mL

Larutan isoniazid 1000 μg/mL (LIB I)

diambil 2,2 mL

dilarutkan dan dicukupkan

dengan HCl

Isoniazid 5,0μg/mL

Rifampisin 7,5 μg/mL

diukur serapan dari masing-masing rifampisin

dan isoniazid panjang gelombang 200 - 400 nm

ditumpang tindihkan

ditentukan 5 titik panjang panjang gelombang

analisis

diambil panjang gelombang dari spektrum

serapan komponen mulai memberikan

serapan sampai hamper tidak memberikan serapan.

kedua larutan dicampurkan ke dalam labu tentukur 10 mL dicukupkan dengan HCL 0,1 N. Diambil dari larutan tersebut 0,5 mL dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 mL dicukupkan dengan HCL 0,1 N

Larutan diukur pada lima panjang gelombang yang telah ditentukan

Lakukan replikasi sebanyak 6 kali

Isoniazid 10 mg

Rifampisin 10 mg

Dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 mL

Dilarutkan dan dicukupkan

dengan HCL 0,1 N

Larutan Rifampisin

1000 µg/mL

Dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 mL

Dilarutkan dan dicukupkan

dengan HCL 0,1 N

Larutan Isoniazid

1000 µg/mL

ditimbang

digerus dalam lumpang sampai halus dan homogen

ditimbang setara 50 mg rifampisin

dihitung kesetaraan isoniazid yang terkandung

didalamnya (penimbangan dilakukan sebanyak 6 kali pengulangan)

dimasukkan kedalam labu tentukur 50 mL dicukupkan dengan HCl 0,1N sampai garis tanda

dibantu pelarutannya dengan sonikator selama 20 menit

disaring

dibuang ± 10 mL filtrat pertama filtrat selanjutnya ditampung dipipet 1,5 mL

dimasukkan kedalam labu tentukur 10 mL dicukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda dipipet 0,5 mL

dimasukkan kedalam labu tentukur 10 mL

dicukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda diukur pada 5 titik λ

=

- _x

=

- _x

=

- _x

=

- _x

=

- _x

=

Keterangan : C1 = kadar Rifampisin

Kadar Rifampisin : V1 x C1 = V2 x C2 1,5 x 1000 = 10 x C2

X = 150 µg/mL (kadar awal) V2 x C2 = V3 x C3

0,5 x 150 = 10 x C3

X = 7,50 µg/mL (kadar akhir)

Kadar Isoniazid : V1 x C1 = V2 x C2

1,0 x 1060 = 10 x C2

X = 106 µg/mL (kadar awal) V2 x C2 = V3 x C3

0,5 x 106 = 10 x C3

X = 5,30 µg/mL (kadar akhir) Keterangan:

V = mL C = µg/mL Replikasi II

Kadar Rifampisin : V1 x C1 = V2 x C2 1,5 x 1062 = 10 x C2

X = 159,3 µg/mL (kadar awal) V2 x C2 = V3 x C3

0,5 x 159,3 = 10 x C3

X = 7,97 µg/mL (kadar akhir) Kadar Isoniazid : V1 x C1 = V2 x C2

1,0 x 1052 = 10 x C2

X = 105,2 µg/mL (kadar awal) V2 x C2 = V3 x C3

0,5 x 105,2 = 10 x C3

Replikasi III

Kadar Rifampisin : V1 x C1 = V2 x C2 1,5 x 1065 = 10 x C2

X = 159,7 µg/mL (kadar awal) V2 x C2 = V3 x C3

0,5 x 159,7 = 10 x C3

X = 7,99 µg/mL (kadar akhir) Kadar Isoniazid : V1 x C1 = V2 x C2

1,0 x 1010 = 10 x C2

X = 101,0 µg/mL (kadar awal) V2 x C2 = V3 x C3

0,5 x 101,0 = 10 x C3

X = 5,05 µg/mL (kadar akhir) Keterangan:

V = mL C = µg/mL Replikasi IV

Kadar Rifampisin : V1 x C1 = V2 x C2 1,5 x 1056 = 10 x C2

X = 158,4 µg/mL (kadar awal) V2 x C2 = V3 x C3

0,5 x 158,4 = 10 x C3

X = 7,92 µg/mL (kadar akhir) Kadar Isoniazid : V1 x C1 = V2 x C2

1,0 x 1008 = 10 x C2

X = 100,8 µg/mL (kadar awal) V2 x C2 = V3 x C3

0,5 x 100,8 = 10 x C3

C = µg/mL Replikasi V

Kadar Rifampisin : V1 x C1 = V2 x C2 1,5 x 1142 = 10 x C2

X = 171,3 µg/mL (kadar awal) V2 x C2 = V3 x C3

0,5 x 171,3 = 10 x C3

X = 8,57 µg/mL (kadar akhir) Kadar Isoniazid : V1 x C1 = V2 x C2

1,0 x 1030 = 10 x C2

X = 103,0 µg/mL (kadar awal) V2 x C2 = V3 x C3

0,5 x 103,0 = 10 x C3

X = 5,15 µg/mL (kadar akhir) Keterangan:

V = mL C = µg/mL Replikasi VI

Kadar Rifampisin : V1 x C1 = V2 x C2 1,5 x 1029 = 10 x C2

X = 154,3 µg/mL (kadar awal) V2 x C2 = V3 x C3

0,5 x 154,3 = 10 x C3

X = 7,72 µg/mL (kadar akhir) Kadar Isoniazid : V1 x C1 = V2 x C2

1,0 x 1012 = 10 x C2

Pengulangan rifampisin (mg)

isoniazid (mg)

rifampsin (µg/mL)

isoniazid (µg/mL)

1 10,0 10,60 7,50 5,30

2 10,62 10,52 7,97 5,26

3 10,65 10,10 7,99 5,05

4 10,56 10,08 7,92 5,04

5 11,42 10,30 5,15

No. Konsentrasi (μg/mL) (X) Absorbansi (Y)

1. 0,0000 0,00000

2. 6,0000 0,14207

3. 9,0000 0,21659

4. 12,0000 0,30078

5. 15,0000 0,39561

6. 18,0000 0,44356

Perhitungan Persamaan Garis Regresi

No. X Y XY X2` Y2

1. 0,00000 0,00000 0,0000 0,0000 0

2. 6,00000 0,14207 0,85242 36,0000 0,02018388

3. 9,00000 0,21659 1,94931 81,0000 0,04691123

4. 12,00000 0,30078 3,60936 144,0000 0,09046861 5. 15,00000 0,39561 5,93415 225,0000 0,15650727 6. 18,00000 0,44356 7,98408 324,0000 0,19674547

ΣX = 60

= 10

ΣY = 1,49861 = 0,2498

ΣXY = 20,3293

ΣX2 = 810,0000

Σ Y2 = 0,51081647

0,02544

-0,0047 Maka, persamaan garis regresinya adalah

=

= 0,9980

Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan rifampisin pada panjang gelombang 215,00 nm adalah 0,9980.

No. Konsentrasi (μg/mL) (X) Absorbansi (Y)

1. 0,0000 0,00000

2. 6,0000 0,16347

3. 9,0000 0,23586

4. 12,0000 0,33188

5. 15,0000 0,44412

6. 18,0000 0,49872

Perhitungan Persamaan Garis Regresi

No. X Y XY X2` Y2

1. 0,00000 0,00000 0,0000 0,0000 0

2. 6,00000 0,16347 0,98082 36,0000 0,02672244

3. 9,00000 0,23586 2,12274 81,0000 0,05562994

4. 12,00000 0,33188 3,98256 144,0000 0,11014433 5. 15,00000 0,44412 6,6618 225,0000 0,19724257 6. 18,00000 0,49872 8,97696 324,0000 0,24872164

ΣX = 60

= 10

ΣY = 1,67405 = 0,2790

ΣXY = 22,7249

ΣX2 = 810,0000

Σ Y2 = 0,63846093

0,02850

-0,0060

=

= 0,9975

Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan rifampisin pada panjang gelombang 225,00 nm adalah 0,9975.

No. Konsentrasi (μg/mL) (X) Absorbansi (Y)

1. 0,0000 0,00000

2. 6,0000 0,16655

3. 9,0000 0,23371

4. 12,0000 0,33019

5. 15,0000 0,4449

6. 18,0000 0,49858

Perhitungan Persamaan Garis Regresi

No. X Y XY X2` Y2

1. 0,00000 0,00000 0,0000 0,0000 0

2. 6,00000 0,16655 0,9993 36,0000 0,0277389

3. 9,00000 0,23371 2,10339 81,0000 0,05462036

4. 12,00000 0,33019 3,96228 144,0000 0,10902544

5. 15,00000 0,4449 6,6735 225,0000 0,19793601

6. 18,00000 0,49858 8,97444 324,0000 0,24858202

ΣX = 60

= 10

ΣY = 1,67393 = 0,2790

ΣXY = 22,7129

ΣX2 = 810,0000

Σ Y2 = 0,63790273

0,02845

-0,0055 Maka, persamaan garis regresinya adalah

=

= 0,9972

Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan rifampisin pada panjang gelombang 232,00 nm adalah 0,9972.

No. Konsentrasi (μg/mL) (X) Absorbansi (Y)

1. 0,0000 0,00000

2. 6,0000 0,14554

3. 9,0000 0,20213

4. 12,0000 0,28771

5. 15,0000 0,38926

6. 18,0000 0,43784

Perhitungan Persamaan Garis Regresi

No. X Y XY X2` Y2

1. 0,00000 0 0,0000 0,0000 0

2. 6,00000 0,14554 0,87324 36,0000 0,02118189

3. 9,00000 0,20213 1,81917 81,0000 0,04085654

4. 12,00000 0,28771 3,45252 144,0000 0,08277704 5. 15,00000 0,38926 5,8389 225,0000 0,15152335 6. 18,00000 0,43784 7,88112 324,0000 0,19170387

ΣX = 60

= 10

ΣY = 1,46248 = 0,2437

ΣXY = 19,8650

ΣX2 = 810,0000

Σ Y2 = 0,48804269

0,02850

-0,0058 Maka, persamaan garis regresinya adalah

=

= 0,9969

Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan rifampisin pada panjang gelombang 250,00 nm adalah 0,9969.

1. 0,00000 0,00000

2. 5,00000 0,14562

3. 7,50000 0,20129

4. 10,00000 0,29032

5. 12,50000 0,39637

6. 15,00000 0,44996

Perhitungan Persamaan Garis Regresi

No. X Y XY X2 Y2

1. 0,00000 0 0,0000 0,0000 0

2. 5,00000 0,14562 0,87372 36,0000 0,02120518

3. 7,500000 0,20129 1,81161 81,0000 0,04051766 4. 10,00000 0,29032 3,48384 144,0000 0,0842857 5. 12,50000 0,39637 5,94555 225,0000 0,15710918

6. 15,00000 0,44996 8,09928 324,0000 0,202464

ΣX = 60

= 10

ΣY = 1,48356

= 0,2473

ΣXY = 20,2140 ΣX2 = 810,0000 ΣY2 = 0,50558173

= = 0,9964

Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan rifampisin pada panjang gelombang 267,00 nm adalah 0,9964.

1. 0,0000 0,00000

2. 5,0000 0,24441

3. 7,5000 0,3685

4. 10,0000 0,50411

5. 12,5000 0,60127

6. 15,0000 0,73853

Perhitungan Persamaan Garis Regresi

No. X Y XY X2` Y2

1. 0 0 0,0000 0,0000 0

2. 5 0,24441 1,22205 25,0000 0,05973625

3. 7,5 0,3685 2,76375 56,2500 0,13579225

4. 10 0,50411 5,0411 100,0000 0,25412689

5. 12,5 0,60127 7,515875 156,2500 0,36152561

6. 15 0,73853 11,07795 225,0000 0,54542656

ΣX = 50

= 8,333333

ΣY = 2,45682 = 0,4095

ΣXY = 27,6207

ΣX2 = 562,5000

Σ Y2 = 1,35660756

0,04901

0,0011

=

= 0,9995

Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan isoniazid pada panjang gelombang 215,00 nm adalah 0,9995.

1. 0 0,00000

2. 5,0 0,15952

3. 7,5 0,23969

4. 10,0 0,32890

5. 12,5 0,38758

6. 15,0 0,47607

Perhitungan Persamaan Garis Regresi

No. X Y XY X2` Y2

1. 0 0 0,0000 0,0000 0

2. 5,0 0,15952 0,7976 25,0000 0,02544663

3. 7,5 0,23969 1,797675 56,2500 0,0574513

4. 10,0 0,3289 3,289 100,0000 0,10817521

5. 12,5 0,38758 4,84475 156,2500 0,15021826

6. 15,0 0,47607 7,14105 225,0000 0,22664264

ΣX = 50

= 8,333333

ΣY = 1,59176 = 0,2653

ΣXY = 17,8701

ΣX2 = 562,5000

Σ Y2 = 0,56793404

0,03158

0,0021

=

= 0,9993

Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan isoniazid pada panjang gelombang 225,00 nm adalah 0,9993.

1. 0,0000 0,00000

2. 5,0000 0,11219

3. 7,5000 0,16707

4. 10,0000 0,23027

5. 12,5000 0,27069

6. 15,0000 0,33221

Perhitungan Persamaan Garis Regresi

No. X Y XY X2` Y2

1. 0 0 0,0000 0,0000 0

2. 5 0,11219 0,56095 25,0000 0,0125866

3. 7,5 0,16707 1,253025 56,2500 0,02791238

4. 10 0,23027 2,3027 100,0000 0,05302427

5. 12,5 0,27069 3,383625 156,2500 0,07327308

6. 15 0,33221 4,98315 225,0000 0,11036348

ΣX = 50

= 8,333333

ΣY = 1,11243 = 0,1854

ΣXY = 12,4835

ΣX2 = 562,5000

Σ Y2 = 0,27715981

0,02203

0,0018

=

= 0,9992

Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan isoniazid pada panjang gelombang 232,00 nm adalah 0,9992.

1. 0 0,00000

2. 5,0 0,14694

3. 7,5 0,21873

4. 10,0 0,30012

5. 12,5 0,35790

6. 15,0 0,43916

Perhitungan Persamaan Garis Regresi

No. X Y XY X2` Y2

1. 0 0 0,0000 0,0000 0

2. 5,0 0,14694 0,7347 25,0000 0,02159136

3. 7,5 0,21873 1,640475 56,2500 0,04784281

4. 10,0 0,30012 3,0012 100,0000 0,09007201

5. 12,5 0,3579 4,47375 156,2500 0,12809241

6. 15,0 0,43916 6,5874 225,0000 0,19286151

ΣX = 50

= 8,333333

ΣY = 1,46285 = 0,2438

ΣXY = 16,4375

ΣX2 = 562,5000

Σ Y2 = 0,48046011

0,02912

0,0011 Maka, persamaan garis regresinya adalah

=

= 0,9995

Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan isoniazid pada panjang gelombang 250,00 nm adalah 0,9995.

1. 0 0,00000

2. 5,0 0,22101

3. 7,5 0,33251

4. 10,0 0,45386

5. 12,5 0,54596

6. 15,0 0,67052

Perhitungan Persamaan Garis Regresi

No. X Y XY X2` Y2

1. 0 0 0,0000 0,0000 0

2. 5,0 0,22101 1,10505 25,0000 0,04884542

3. 7,5 0,33251 2,493825 56,2500 0,1105629

4. 10,0 0,45386 4,5386 100,0000 0,2059889

5. 12,5 0,54596 6,8245 156,2500 0,29807232

6. 15,0 0,67052 10,0578 225,0000 0,44959707

ΣX = 50

= 8,333333

ΣY = 2,22386 = 0,3706

ΣXY = 25,0198

ΣX2 = 562,5000

Σ Y2 = 1,11306661

0,04449

-0,00011 Maka, persamaan garis regresinya adalah

=

= 0,9997

Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan isoniazid pada panjang gelombang 267,00 nm adalah 0,9997.

2 Replikasi II 0,1099 0,3346

3 Replikasi III 0,11 0,3343

4 Replikasi IV 0,1097 0,3334

5 Replikasi V 0,1107 0,3364

215 225 232 250 267 1 Replikasi I 0,40197 0,34361 0,3073 0,31409 0,37708 2 Replikasi II 0,40821 0,35019 0,31481 0,32102 0,38568 3 Replikasi III 0,38505 0,33034 0,29519 0,29787 0,35617 4 Replikasi IV 0,40219 0,34966 0,31451 0,31971 0,38179 5 Replikasi V 0,40517 0,35447 0,31903 0,32303 0,38544 6 Replikasi VI 0,38149 0,33221 0,29894 0,30425 0,36253

1 Replikasi I 0,43123 0,36763 0,32648 0,34244 0,41310 2 Replikasi II 0,45973 0,38947 0,34435 0,36523 0,44736 3 Replikasi III 0,42984 0,36949 0,33020 0,34659 0,41907 4 Replikasi IV 0,47713 0,40317 0,35748 0,37488 0,45644 5 Replikasi V 0,43123 0,36763 0,32648 0,34244 0,41310 6 Replikasi VI 0,42982 0,37041 0,32999 0,34518 0,41708

Replikasi I Rifampisin = x 100.21% = 97,58 %

Isoniazid = x 101.85% = 97,85%

Replikasi II Rifampisin = x 100.21% = 97,78%

Isoniazid = x 101.85% = 98,54%

Replikasi III Rifampisin = x 100.21% = 97,54%

Isoniazid = x 101.85% = 97,72%

Replikasi IV Rifampisin = x 100.21% = 97,18%

Isoniazid = x 101.85% = 97,92%

Replikasi V Rifampisin = x 100,21% = 97,07%

Isoniazid = x 101,85% = 98,17%

Replikasi VI Rifampisin = x 100,21% = 97,31%

Isoniazid = x 101,85% = 97,85%

Rata – rata akurasi dari perhitungan matriks Rifampisin = 97,41 %

No. X

Kadar (%) X - (X - )

2

1. 97,58 0,17 0,0289

2. 97,78 0,37 0,1369

3. 97,54 0,13 0,0169

4. 97,18 -0,23 0,0529

5. 97,07 -0,34 0,1156

6. 97,31 -0,1 0,01

= 97,41 (X - )2= 0,3612

SD = = = = 0,2687

Pada interval kepercayaan 95% dengan nilai α = 0,05; dk = 6-1= 5, Diperoleh ttabel= (1 – ½ α); dk

= (1 – 0,025); 5 = 0,975; 5 = 2,57 t hitung =

t hitung 1 = = 1,5496 (diterima)

t hitung 2 = = 3,3728 (ditolak)

t hitung 3 = = 1,1850 (diterima)

t hitung 4 = = 2,0966 (diterima)

t hitung 5 = = 3,0993 (ditolak)

Dari data di atas t hitung 2 tidak diterima karena t hitung ≤ t tabel dan t hitung ≥ -t tabel , maka t hitung yang digunakan adalah:

No. X

Kadar (%) X - (X - )

2

1. 97,58 0,18 0,0324

2. 97,54 0,14 0,0196

3. 97,18 -0,22 0,0484

4. 97,31 -0,09 0,0081

= 97,40 (X - )2 = 0,1085

SD = = = = 0,1901

Uji statistik pada taraf kepercayaan 95% maka nilai α = 0,05 ; dk = n-1 = 4-1 = 3 Diperoleh ttabel= (1 – ½ α); dk

= (1 – 0,025); 3 = 0,975; 3 = 3,18

Dasar penerimaan data jika t hitung≤ t tabel dan t hitung≥ -t tabel. t hitung =

t hitung 1 = = (diterima)

t hitung 2 = = (diterima)

t hitung 3 = = (diterima)

t hitung 4 = = (diterima)

No. X Kadar (%)

X - (X - )2

1. 97,85 -0,15 0,0225

2. 98,54 0,54 0,2916

3. 97,72 -0,28 0,0784

4. 97,92 -0,08 0,0064

5. 98,17 0,17 0,0289

6. 97,85 -0,15 0,0225

= 98,00 (X - )2 = 0,4503

SD = = = = 0,3

Uji statistik pada taraf kepercayaan 95% maka nilai α = 0,05 ; dk = n-1 = 6-1 = 5 Diperoleh ttabel= (1 – ½ α); dk

= (1 – 0,025); 5 = 0,975; 5 = 2,57

Dasar penerimaan data jika t hitung≤ t tabel dan t hitung≥ -t tabel. t hitung =

t hitung 1 = = (diterima)

t hitung 2 = = (ditolak)

t hitung 3 = = (diterima)

Kadar (%) X - (X - )

1. 97,85 -0,05 0,0025

2. 97,72 -0,18 0,0324

3. 97,92 0,02 0,0004

4. 98,17 0,27 0,0729

5. 97,85 -0,05 0,0025

= 97,90 (X - )2 = 0,1107

SD = = = = 0,1663

Uji statistik pada taraf kepercayaan 95% maka nilai α = 0,05 ; dk = n-1 = 5-1 = 4 Diperoleh ttabel= (1 – ½ α); dk

= (1 – 0,025); 4 = 0,975; 4 = 2,78

Dasar penerimaan data jika t hitung ≤ t tabel dan t hitung ≥ -t tabel. t hitung =

t hitung 1 = = (diterima)

t hitung 2 = = (diterima)

t hitung 3 = = (diterima)

t hitung 4 = = (ditolak)

t hitung 5 = = (diterima)

Dari data di atas t hitung 4 tidak diterima karena t hitung ≤ t tabel dan t hitung ≥ -t tabel , maka t hitung yang digunakan adalah:

1. 97,85 0,02 0,0004

2. 97,72 -0,11 0,0121

3. 97,92 0,07 0,0049

4. 97,85 -0,02 0,0004

= 97,83 (X - )2 = 0,0178

SD = = = = 0,077

Uji statistik pada taraf kepercayaan 95% maka nilai α = 0,05 ; dk = n-1 = 4-1 = 3 Diperoleh ttabel= (1 – ½ α); dk

= (1 – 0,025); 3 = 0,975; 3 = 3,18

Dasar penerimaan data jika t hitung≤ ttabel dan t hitung≥ -t tabel. t hitung =

t hitung 1 = = (diterima)

t hitung 2 = = (diterima)

t hitung 3 = = (diterima)

t hitung 4 = = (diterima)

Semua data diterima, maka kadar c sebenarnya untuk α = 0,05; n =4 adalah:

μ = ± ttabel x

1 97,58 97,85

2 - -

3 97,54 97,72

4 97,18 97,92

5 - -

6 97,31 97,85

= 97,40 = 97,83

SD = 0,1901 SD = 0,077

% KV = x 100%

%KV Rifampisin = X 100% = 0,1951%

Berat 20 tablet = 19,741 g

Ditimbang serbuk sampel setara dengan 50 mg rifampisin, maka jumlah sampel yang ditimbang adalah :

x

1 x 19,741 g = 0,10967 g

Kemudian dihitung kesetaraan isoniazid yang terkandung dalam 0,10967 g sampel ini.

x

2 x (20 x 300 mg) = 33,36 mg

Dilarutkan serbuk sampel dengan HCl 0,l N dalam labu tentukur 50 mL sampai garis tanda. Larutan kemudian dibantu pelarutannya dengan pengaduk ultrasonik selama 20 menit. Larutan tersebut kemudian disaring, lebih kurang 10 mL filtrat pertama dibuang. Filtrat selanjutnya ditampung.

Konsentrasi rifampisin x 1000 μg = 1000 μg/mL

Konsentrasi isoniazid x 1000 μg = 667,2 μg/mL

Kemudian dari larutan filtrat ini, dipipet 0,15 mL, dimasukkan kedalam labu tentukur 10 mL lalu dicukupkan dengan HCl 0,1 N hingga garis tanda.

Konsentrasi rifampisin sampel = = 15,0 μg/mL

Konsentrasi rifampisin sampel = = 7,5μg/mL

nm.

205.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.60000

0.40000

0.20000

0.00000 -0.07472

nm.

205.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.60000

0.40000

0.20000

0.00000 -0.07472

nm.

205.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.81995

0.60000

0.40000

0.20000

0.00000 -0.07472

nm.

205.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.40000

0.20000

0.00000 -0.06365

nm.

205.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.60000

0.40000

0.20000

0.00000 -0.06365

nm.

205.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.40000

0.20000

0.00000 -0.06365

Gelombang Berganda. Skripsi. Yogyakarta: Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. Halaman 2, 23-26.

Benetton, S. A., E. R. M Kedor-Hackmann, M. I. R. M Santoro, dan V. M Borges. (1998). Visible Spectrophotometric and First-Derivative UV Spectrophotometric Determination of Rifampicin and Isonazid in Pharmaceutical Preparations. Elsevier Science B. V. 47(3) : 639-643.

Dachriyanus. (2004). Analisis Struktur Senyawa Organik Secara Spektroskopi. Padang: Andalas University Press. Halaman. 5-7.

Day, R.A., dan Underwood, A.L. (1998). Quantitative Analysis Sixtth Edition. Penerjemah: Sopyan, I. (2002). Analisis Kimia Kuantitatif Edisi Ke Enam. Jakarta: Penerbit Erlangga. Halaman 419.

Ditjen POM. (1979). Farmakope Indonesia edisi III. Departemen Kesehatan RI: Jakarta. Halaman 320, 560.

Ditjen BKAK. (2014). Farmakope Indonesia edisi V. Departemen Kesehatan RI: Jakarta. Halaman 1098, 1100.

Ermer, J., dan McB. Miller, J. H.. (2005). Method Validation in Pharmaceutical Analysis, A Guide to Best Practice. Weinheim: Wiley-Vch Verlag GmbH & Co. KGaA. Halaman 16.

Harmita. (2004). Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya. Majalah Ilmu Kefarmasian. I(3). Halaman 117-128.

Hastia, F. (2010). Penetapan Kadar Rifampisin dan Isoniazid dalam Sediaan Tablet Secara Multikomponen dengan Metode Spektrofotometri Ultraviolet. Skripsi. Medan: Fakultas Farmasi, Universitas Sumatera Utara. Halaman 25-28

Istiantoro, Y. H., dan Setiabudy, R. (2012). Tuberkulostatik dan Leprostatik dalam Farmakologi dan Terapi. Edisi Kelima. Jakarta: Departemen

1142, 1534.

Mulja, M., Hanwar, D., 2003, Prinsip-Prinsip cara Berlaboratorium yang Baik (Good Laboratory Practice), Majalah Farmasi Erlangga, vol,III, No. 2 Rohman, A. (2007). Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar.

Halaman 235-236.

Satiadarma, K., Mulja, M., Tjahjono, D.H., Kartasasmita, R.E. (2004). Asas Pengembangan Prosedur Analisis. Edisi Pertama. Surabaya: Airlangga University Press. Halaman 49, 87 - 93.

Sweetman, S. C. (2009). Martindale The Extra Pharmacopoeia. 36th Edition. London: Pharmaceutical Press. Halaman 195, 325-326.

Tatarczak, M., Jolanta, F., dan Halina, S. (2005). High-Performance Liquid-Chromatographic Determination of Rifampicin in Complex Pharmaceutical Preparation and in Serum Mycobacterium Tuberculosis-Infected Patients. Acta Poliniae Pharmaceutica – Drug Research. 62 : 251-256

Tan, T. H. dan Rahardja, K. (2013). Obat-Obat Penting Khasiat, Penggunaan, dan Efek-Efek Sampingnya. Edisi Keenam. Cetakan Ketiga. Jakarta: PT. Elex Media Komputindo. Halaman 92-94.

USP 30-NF 25. (2007). The 30th Revision of The United States Pharmacopeia and the 25th edition Of The National Formulary : The Offical Compendia Of Standards. Halaman 2412, 3128.

3.1Jenis Penelitian

Penelitian yang dilakukan termasuk jenis penelitian eksperimental, dilakukan secara spektrofotometri ultraviolet dengan metode panjang gelombang berganda terhadap analisa campuran dua zat aktif, yaitu rifampisin dan isoniazid pada sediaan tablet.

3.2 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilakukan pada bulan Oktober sampai dengan November 2015 Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara. 3.3 Alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah spektrofotometer UV-Visible (dapat dilihat pada Lampiran 3 halaman 45), Personal Computer (PC) yang dilengkapi software UV Probe 2.42 (UV-1800 Shimadzu), neraca analitik (Mettler Toledo), kuvet, kertas saring, bola karet, spatula, alat-alat gelas dan alat-alat lainnya yang diperlukan dalam penyiapan sampel.

3.4 Bahan

Bahan yang digunakan adalah HCl 0,1 N, isoniazid BPFI, rifampisin ARS, Rimactazid® (PT. Sandoz). Sertifikat pengujian isoniazid BPFI dan rifampisin ARS dapat dilihat pada Lampiran 57 dan 58 halaman 99 dan 100.

3.5 Pengambilan Sampel

sediaan dan daftar spesifikasi sediaan tablet dapat dilihat pada Lampiran 1 dan 2 halaman 43 dan 44.

3.6 Prosedur Penelitian 3.6.1 Pembuatan Pelarut

Diencerkan 8,3 mL HCl 37% dengan 1 liter akuades (Ditjen POM, 1979). Perhitungan pembuatan pereaksi dapat dilihat pada Lampiran 4 halaman 46. 3.6.2 Pembuatan Larutan Induk Baku Rifampisin

Ditimbang dengan seksama 50,0 mg baku pembanding rifampisin ARS kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 50,0 mL, dilarutkan dengan HCl 0,1 N hingga larut, dicukupkan volume dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi 1000 μg/mL (LIB I). Dari larutan LIB I dipipet 5,0 mL dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 mL, dicukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi 50,0 μg/mL (LIB II). Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 5 halaman 47.

3.6.3 Pembuatan Larutan Induk Baku Isoniazid

Ditimbang dengan seksama 50,0 mg baku pembanding isoniazid BPFI kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 50,0 mL, dilarutkan dengan HCl 0,1 N hingga larut, dicukupkan volume dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi 1000 μg/mL (LIB I). Dari larutan LIB I dipipet 5,0 mL dimasukkan ke dalam labu tentukur 100,0 mL, dicukupkan dengan HCl 0,1 N

3.6.4 Penentuan Spektrum Serapan Maksimum Rifampisin

Diambil sebanyak 2,7 mL dari LIB II rifampisin (konsentrasi = 50,0 μg/mL) kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 10,0 mL untuk kemudian dilarutkan dengan HCl 0,1 N. Selanjutnya larutan diencerkan dengan pelarut yang sama hingga garis tanda, lalu dikocok sampai homogen untuk memperoleh larutan rifampisin dengan konsentrasi 13,5 μg/mL. Diukur serapannya pada panjang gelombang 200-400 nm. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 5 halaman 47.

3.6.5 Penentuan Spektrum Serapan Maksimum Isoniazid

Diambil sebanyak 2,2 mL dari LIB II isoniazid (konsentrasi = 50,0 μg/mL) kemudian dimasukan ke dalam labu tentukur 10,0 mL untuk diencerkan dengan pelarut HCl 0,1 N hingga garis tanda, lalu dikocok sampai homogen untuk memperoleh larutan dengan konsentrasi 11,0 μg/mL. Diukur serapannya pada panjang gelombang 200-400 nm. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 6 halaman 48.

3.6.6 Pembuatan Larutan Standar Rifampisin

Diambil sebanyak 1,2 mL; 1,8 mL; 2,4 mL; 3,0 mL; dan 3,6 mL dari LIB II rifampisin. Kemudian masing-masing dimasukkan ke dalam 5 labu tentukur 10,0 mL. Dilarutkan dengan pelarut HCl 0,1 N. Kemudian dicukupkan dengan pelarut yang sama untuk membuat larutan standar dengan konsentrasi 6,0 μg/mL; 9,0 µg/mL, 12,0 μg/mL; 15,0 µg/mL; dan 18,0 μg/mL. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 5 halaman 47.

6 halaman 48.

3.6.8 Penentuan Spektrum Serapan

Larutan standar rifampisin konsentrasi 6,0 μg/mL; 9,0 µg/mL, 12,0

μg/mL; 15,0 µg/mL; dan 18,0 μg/mL dan larutan standar isoniazid dengan

konsentrasi 5,0 μg/mL; 7,5 µg/mL, 10,0 μg/mL; 12,5 µg/mL; dan 15,0 μg/mL yang masing-masing telah dibuat enam kali perulangan, diukur serapannya pada panjang gelombang 200-400 nm.

3.6.9 Penentuan Panjang Gelombang Analisis

Dibuat larutan rifampisin dengan konsentrasi 7,5 μg/mL, larutan isoniazid dengan konsentrasi 5,0 μg/mL. Kemudian kedua larutan ini diukur serapannya pada panjang gelombang 200–400 nm. Selanjutnya spektrum serapan dari masing-masing komponen di tumpang tindihkan, pembacaan spektrum ini dilakukan pada rentang panjang gelombang 215-350 nm, karena pada rentang panjang gelombang ini rifampisin dan isoniazid tumpang tindih secara keseluruhan. Kemudian dicari 5 titik sebagai panjang gelombang yang akan digunakan, pemilihan panjang gelombang diambil dari spektrum serapan komponen mulai memberikan serapan sampai hampir tidak memberikan serapan.

3.6.10 Penentuan Serapan

Larutan baku isoniazid dan rifampisin yang telah dibuat, diukur absorbansinya pada multi panjang gelombang yang telah ditentukan. Serapan kedua senyawa ditentukan dengan menggunakan metode regresi linear yang dioperasikan pada data konsentrasi dan absorbansi masing-masing senyawa pada setiap panjang gelombang pengukuran.

mL), sedangkan b adalah konstanta.

3.6.11 Penentuan kadar baku campuran rifampisin dan isoniazid

Ditimbang dengan seksama 10,0 mg baku pembanding rifampisin ARS kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 10,0 mL, dilarutkan dengan HCl 0,1 N hingga larut, dicukupkan volume dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi 1000 μg/mL (LIB I). Kemudian ditimbang dengan seksama 10,0 mg baku pembanding isoniazid BPFI kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 10,0 mL, dilarutkan dengan HCl 0,1 N hingga larut, dicukupkan volume dengan HCl 0,1N sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi 1000 μg/mL (LIB I). Dari larutan rifampisin LIB I dipipet 1,5 mL dimasukkan ke dalam labu tentukur 10,0 mL (labu A), dan dari larutan isoniazid LIB I dipipet 1 mL dimasukkan ke dalam labu A, dicukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi 150,0 μg/mL dan 100,0 μg/mL (labu A). Kemudian dari labu A dipipet 0,5 ml dimasukkan kedalam labu tentukur 10,0 mL dilarutkan dengan HCl 0,1 N hingga larut, dicukupkan volume dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda, sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi 7,5 μg/mL dan 5,0 μg/mL (labu B). Selanjutnya diukur absorbansinya pada 5 panjang gelombang yang telah ditetapkan. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 8 halaman

didalamnya, penimbangan dilakukan sebanyak enam kali pengulangan. Dimasukkan ke dalam labu tentukur 50,0 mL dan dicukupkan dengan pelarut HCl 0,1 N sampai garis tanda. Dibantu pelarutannya menggunakan sonikator selama 20 menit, lalu disaring (± 10,0 mL filtrat pertama dibuang, filtrat selanjutnya ditampung). Kemudian dipipet 0,15 mL larutan filtrat, dimasukkan kedalam labu tentukur 10,0 mL, lalu dicukupkan dengan HCl 0,1 N hingga garis tanda. Kemudian dipipet 5,0 mL larutan filtrat, dimasukkan kedalam labu tentukur 10,0 mL, lalu dicukupkan dengan HCl 0,1 N hingga garis tanda. Selanjutnya diukur absorbansinya pada panjang gelombang yang telah ditetapkan. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 9 halaman 51.

3.6.13 Perhitungan kadar rifampisin dan isoniazid dalam campuran.

Perhitungan kadar masing-masing komponen dalam campuran dilakukan atas dasar absorbansi campuran (Ac) dan serapan tiap komponen pada multi panjang gelombang yang telah diketahui dari hasil pengukuran dengan menggunakan persamaan matriks:

[c] = [[a] x [a1]]-1 x [a] x Ac] Keterangan :

[c] : kadar komponen dari campuran

[a] : matriks serapan senyawa penyusun campuran

[a1] : transpose matriks serapan senyawa penyusun campuran [[a] X [a1]]-1 : invers matriks kali transpose matriks serapan senyawa

penyusun campuran Ac : nilai serapan sampel

validitas metode yang digunakan dalam penelitian, berikut parameter yang diukur: a. Akurasi

Nilai akurasi dihitung dari hasil matriks kadar yang terukur atau kadar hasil dibandingkan dengan kadar yang sebenarnya dikalikan 100,0%. Akurasi dikatakan baik jika berada dalam rentang 90,0-110,0%.

Akurasi dari hasil matriks = (Ditjen BKAK, 2014)

b. Uji Presisi

Menurut Ermer dan McB. Miller (2005), penentuan presisi berdasarkan harga koefisian variasi (KV) atau Coefficient of variation (CV). Jika KV lebih kecil dari 2% maka dinilai mempunyai presisi yang baik. Koefisien variasi (KV) diperoleh dengan rumus:

KV = %

c. Analisis Data Penetapan Kadar Secara Statistik

Data perhitungan kadar rifampisin dan isoniazid dianalisis secara statistik dengan menggunakan uji TTabel distribusi t dapat dilihat pada Lampiran 40 halaman 82.

Menurut Sudjana (2005), Rumus yang digunakan adalah :

( )

Xi-X 2

dengan nilai α = 0,005.

Keterangan :

SD : standard deviation / simpangan baku Xi : kadar dalam satu perlakuan

X : Kadar rata-rata dalam satu sampel (mg/100g) n : jumlah ulangan

α : tingkat kepercayaan

Untuk menghitung kadar rifampisin dan isoniazid sebenarnya dalam sampel secara statistik dapat digunakan rumus :

µ = X ± (t(α/2, dk) x SD / √n ) Keterangan :

SD : standard deviation / simpangan baku

X : Kadar rata-rata dalam satu sampel n : jumlah perlakuan

4.1 Hasil Penentuan Spektrum Serapan Maksimum

Penentuan spektrum serapan maksimum dilakukan pada panjang gelombang 200–400 nm. Pengukuran rifampisin pada konsentrasi 13,5 μg/mL,

sedangkan untuk isoniazid pada konsentrasi 11,0 μg/mL. Berdasarkan hasil

penelitian, diperoleh panjang gelombang maksimum rifampisin pada 266,0 nm dan isoniazid pada 232,40 nm. Spektrum serapan maksimum rifampisin konsentrasi 13,5 μg/mL dan isoniazid konsentrasi 11,0 μg/mL masing-masing dapat dilihat pada Gambar 4.1 dan 4.2.

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.55416

0.40000

0.20000

0.00000

-0.20000

-0.43119

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s. 0.00000

-0.50000 -0.59030

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.20000

0.00000 -0.04785

nm.

210.00 250.00 300.00 350.00

A

b

s.

0.20000

0.00000 -0.04406

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.05000

0.00000 -0.00977

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.05000

0.00000 -0.00977

232, 250, dan 267 nm.

Dalam penelitian ini penentuan harga serapan dilakukan dengan mengoperasikan data serapan pada tiap panjang gelombang terhadap konsentrasi larutan dalam persamaan regresi linear yang analog dengan persamaan dalam hukum Beer. Persamaan regresi linear adalah :

Y = aX + b

Pada persamaan regresi linear tersebut, Y menunjukkan serapan (A), a menunjukkan serapan, X adalah konsentrasi (c) dalam mg /100mL, sedangkan b adalah konstanta.

Hasil pengamatan nilai serapan rifampisin dan isoniazid dapat dilihat pada Table I-XII :

Table 1. Data perhitungan serapan Rifampisin Replikasi I Konsentrasi

µg/mL

λ1 λ2 λ3 λ4 λ5

215 nm 225 nm 232 nm 250 nm 267 nm 6 0,16646 0,18946 0,19171 0,1671 0,16803 9 0,22662 0,25102 0,24555 0,21117 0,21261 12 0,34728 0,38638 0,38762 0,33311 0,33849 15 0,36959 0,40588 0,40402 0,35272 0,35774 18 0,45207 0,50789 0,50779 0,44296 0,44966 a = 0,02508 a=0,02789 a=0,02783 a=0,02426 a=0,02466 b = 0,0095 b=0,0211 b=0,0111 b=0,0086 b=0,0078 r = 0,9929 r = 0,9921 r =0,9909 r =0,992 r=0,9918

12 0,33454 0,37157 0,36853 0,30763 0,30689 15 0,3646 0,39448 0,39086 0,34092 0,3458 18 0,44374 0,49902 0,49953 0,43689 0,44438

a=0,02468 a=0,02733 a=0,02723 a=0,02369 a=0,02407 b=0,0076 b=0,0088 b=0,0078 b=0,0043 b=0,0026 r=0,9951 r=0,9937 r=0,9931 r=0,9952 r=0,9959 Table 3. Data perhitungan serapan Rifampisin Replikasi III

Konsentrasi µg/mL

λ1 λ2 λ3 λ4 λ5

215 nm 225 nm 232 nm 250 nm 267 nm 6 0,14731 0,16853 0,17134 0,14965 0,15084 9 0,22102 0,24371 0,24218 0,20986 0,20973 12 0,29848 0,33144 0,33024 0,28768 0,28973 15 0,38906 0,40346 0,39138 0,34109 0,34243 18 0,48563 0,54163 0,5413 0,47641 0,48751

a=-0,02675 a=0,02903 a=0,02867 a=0,02516 a=0,02561 b=0,0106 b=-0,0088 b=-0,0073 b=-0,0075 b=-0,0094 r=0,9981 r=0,9957 r=0,9935 r=0,9925 r=0,9905 Table 4. Data perhitungan serapan Rifampisin Replikasi IV

Konsentrasi µg/mL

λ1 λ2 λ3 λ4 λ5

215 nm 225 nm 232 nm 250 nm 267 nm 6 0,15841 0,18044 0,18256 0,15897 0,15958 9 0,24941 0,27817 0,27495 0,24192 0,25259 12 0,27141 0,30409 0,30431 0,26625 0,26993 15 0,38523 0,43255 0,43335 0,37865 0,38418 18 0,47991 0,5237 0,50917 0,44003 0,4556

a=0,02583 a=0,02838 a=0,02783 a=0,02413 a=0,02483 b=-0,0009 b=0,0027 b=0,0058 b=0,0063 b=0,0053 r =0,9929 r=0,9938 r=0,9944 r=0,9942 r=0,9932

9 0,25036 0,28012 0,27624 0,23099 0,23104 12 0,26686 0,29691 0,2961 0,258 0,26057 15 0,39502 0,44317 0,44369 0,38661 0,39388 18 0,42521 0,47739 0,47702 0,41599 0,4226

a=0,02334 a=0,02613 a=0,0261 a=0,02283 a=0,02326 b=0,0211 b=0,0241 b=0,024 b=0,0183 b=0,017 r=0,9845 r=0,9834 r=0,983 r=0,9845 r=0,9846 Table 6. Data perhitungan serapan Rifampisin Replikasi VI

Konsentrasi µg/mL

λ1 λ2 λ3 λ4 λ5

215 nm 225 nm 232 nm 250 nm 267 nm 6 0,14207 0,16347 0,16655 0,14554 0,14562 9 0,21659 0,23586 0,23371 0,20213 0,20129 12 0,30078 0,33188 0,33019 0,28771 0,29032 15 0,39561 0,44412 0,4449 0,38926 0,39637 18 0,44356 0,49872 0,49858 0,43784 0,44996

a =0,02544 a=0,0285 a=0,02845 a=0,02495 a=0,02561 b=-0,0047 b=-0,006 b=-0,0055 b=-0,0058 b=-0,0089 r=0,998 r=0,9975 r=0,9972 r=0,9969 r=0,9964 Table 7. Data perhitungan serapan Isoniazid Replikasi I

Konsentrasi µg/mL

λ1 λ2 λ3 λ4 λ5

215 nm 225 nm 232 nm 250 nm 267 nm 5 0,22186 0,14761 0,10837 0,14104 0,21015 7.5 0,31453 0,20818 0,14889 0,19532 0,29613 10 0,42584 0,28113 0,20196 0,26422 0,40007 12.5 0,5357 0,36035 0,26305 0,33576 0,49838 15 0,63231 0,41876 0,30171 0,39297 0,5959

a=0,04221 a=0,02809 a=0,02029 a=0,02624 a=0,03956 b=0,0033 b=0,0019 b=0,0016 b=0,0029 b=0,0038 r=0,9997 r=0,9994 r=0,9988 r=0,9994 r=0,9998

10 0,41942 0,27595 0,19747 0,26126 0,39782 12.5 0,53344 0,35674 0,25934 0,33415 0,4983

15 0,63474 0,42091 0,30345 0,39417 0,59679 a=0,04203 a=0,02783 a=0,02005 a=0,02615 a=0,03952 b=0,0087 b=0,009 b=0,0076 b=0,0051 b=0,0055 r=0,9988 r=0,9955 r=0,9941 r=0,9993 r=0,9998 Table 9. Data perhitungan serapan Isoniazid Replikasi III

Konsentrasi µg/mL

λ1 λ2 λ3 λ4 λ5

215 nm 225 nm 232 nm 250 nm 267 nm 5 0,21942 0,14485 0,10591 0,13939 0,20863 7.5 0,34364 0,24084 0,17566 0,20778 0,30854 10 0,41876 0,27482 0,19709 0,26114 0,39626 12.5 0,55115 0,38057 0,27788 0,33752 0,50559 15 0,62983 0,41813 0,30209 0,39211 0,59305

a=0,04235 a=0,02844 a=0,02058 a=0,02618 a=0,03955 b=0,0076 b=0,0062 b=0,005 b=0,0048 b=0,0048 r=0,9982 r=0,9944 r=0,9931 r=0,9992 r=0,9996 Table 10. Data perhitungan serapan Isoniazid Replikasi IV

Konsentrasi µg/mL

λ1 λ2 λ3 λ4 λ5

215 nm 225 nm 232 nm 250 nm 267 nm 5 0,24492 0,15807 0,10996 0,14684 0,2248 7.5 0,32177 0,21367 0,15379 0,19994 0,30127

10 0,42405 0,27921 0,20095 0,26377 0,39803 12.5 0,5508 0,37947 0,27617 0,33562 0,50554 15 0,63386 0,42042 0,30447 0,39545 0,59923

a =0,04212 a=0,02842 a=0,02071 a=0,02618 a=0,03953 b=0,0115 b=0,005 b=0,0016 b=0,0054 b=0,0088 r=0,998 r=0,9968 r=0,9968 r=0,9991 r=0,9989

7.5 0,37089 0,23978 0,16731 0,22096 0,33687 10 0,50379 0,32826 0,22915 0,29841 0,45175 12.5 0,55068 0,37948 0,27666 0,33667 0,50552 15 0,62635 0,41336 0,29853 0,39076 0,59355

a=0,04195 a=0,02829 a=0,02056 a=0,02615 a=0,03953 b=0,0365 b=0,019 b=0,0099 b=0,0153 b=0,0238 r=0,9885 r=0,991 r=0,9936 r=0,9943 r=0,9941 Table 12. Data perhitungan serapan Isoniazid Replikasi VI

Konsentrasi µg/mL

λ1 λ2 λ3 λ4 λ5

215 nm 225 nm 232 nm 250 nm 267 nm 5 0,24441 0,15952 0,11219 0,14694 0,22101 7.5 0,3685 0,23969 0,16707 0,21873 0,33251 10 0,50411 0,3289 0,23027 0,30012 0,45386 12.5 0,60127 0,38758 0,27069 0,3579 0,54596 15 0,73853 0,47607 0,33221 0,43916 0,67052

a =0,04901 a=0,03158 a=0,02203 a=0,02912 a=0,04449 b =0,0011 b=0,0021 b=0,0018 b=0,0011 b=-0,0001 r =0,9995 r =0,9993 r =0,9992 r =0,9995 r =0,9997 Nilai serapan (a) yang dipakai adalah nilai serapan dari rifampisin pada pengulangan VI dan isoniazid pada pengulangan VI . Pemilihan nilai serapan ini (a) dapat ditentukan berdasarkan harga r hitung. Nilai r hitung dibandingkan dengan nilai r tabel dengan taraf kepercayaan 95% dengan df 4 yaitu 0,8114. Berdasarkan data tersebut terlihat bahwa nilai r hitung rifampisin dan isoniazid pada pengulangan VI lebih besar dari nilai r tabel. Ini berarti bahwa persamaan tersebut mempunyai linearitas yang baik, karena nilai r hitung berkisar dengan nilai -1≤ r ≤ 1 (Rohman, 2007).

nm.

210.00 250.00 300.00 350.00

A

b

s.

0.20000

0.00000 -0.04406

Tabel 13. Kadar dan Koefisien Variasi (%KV) rifampisin dalam sampel sediaan Tablet Rimactazid ®

Berdasarkan Tabel 13 diatas, kadar rifampisin dan isoniazid pada sediaan Tablet Rimactazid ® memenuhi persyaratan menurut WHO (2006) yaitu untuk sediaan tablet rifampisin dan sediaan tablet isoniazid yaitu tidak kurang dari 90,0% dan tidak lebih dari 110,0% dari jumlah yang tertera pada etiket.

Akurasi dari perhitungan matriks digunakan untuk menentukan akurasi suatu metode analisis sedangkan koefisien variasi (%KV) digunakan untuk menentukan presisi suatu metode analisis. Akurasi suatu metode analisis untuk bahan obat dengan kadar kecil dikategorikan baik apabila nilai range akurasinya antara 90-107%, sedangkan suatu metode analisis dikatakan mempunyai presisi

No Sampel

Rifampisin Isoniazid

Kadar terukur

(μg/mL )

Kadar teoritis (μg/mL) Akurasi hasil matriks (%) Kadar terukur (μg/mL ) Kadar teoritis (μg/mL ) Akurasi hasil matriks (%)

1 7,3032 7,50 97,58 5,092248 5,30 97,85

2 7,7770 7,97 97,78 5,089451 5,26 98,54

3 7,7772 7,99 97,54 4,84531 5,05 97,72

4 7,6809 7,92 97,18 4,84594 5,04 97,92

5 8,3015 97,07 4,9642 5,15 98,17

6 7,5018 7,72 97,31 4,867329 5,06 97,85

Rata-rata dari akurasil hasil

matriks 97,41

Rata-rata dari akurasi

hasil matriks 98,00

isoniazid pada sediaan tablet Rimactazid ®dapat dilihat pada lampiran 40 halaman 82.

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan penelitian yang dilakukan, maka dapat disimpulkan:

a. Metode penetapan kadar campuran Rifampisin dan Isoniazid secara spektrofotometri UV dengan metode panjang gelombang berganda dapat digunakan.

b. Kadar rifampisin dan isoniazid dalam sediaan sampel tablet Rimactazid® memenuhi persyaratan yang tercantum dalam WHO (2006) dengan persentase kadar (97,40 ± 0,30)% untuk rifampisin dan (97,83 ± 0,12) % untuk isoniazid 5.2 Saran

Disarankan agar dilakukan penelitian lebih lanjut pada penetapan kadar campuran rifampisin dan isoniazid dengan menggunakan metode lain seperti spektrofotometri dengan metode rasio spektra.

2.1.1 Rifampisin

Menurut Ditjen BKAK (2014) dan Sweetman (2009), uraian tentang rifampisin adalah sebagai berikut :

Rumus struktur :

Gambar 2.1 Struktur Rifampisin

Nama Kimia : 5, 6, 9, 17, 19, 21-Heksahidroksi-23-metoksi-2, 4, 12, 16, 18, 20, 22-heptametil-8 [N-(4-metil-1-piperazinil) formimidoil]-2, 7-(epoksipentadeka [1, 11, 13] trienimino) nafto [2, 1-b] furan-1, 11-(2H)-dion-21-asetat.

Rumus Molekul : C43H58N4O12 Berat Molekul : 822,95

Pemerian : Serbuk hablur, cokelat merah.

Kelarutan : Sangat sukar larut dalam air; mudah larut dalam kloroform; larut dalam etil asetat dan dalam methanol.

berbagai kuman Gram-positif dan Gram-negatif (Istiantoro dan Setiabudy, 2012). Rifampisin adalah kelompok antimikobakterial dan digunakan untuk pengobatan berbagai jenis infeksi. Sering digunakan dalam bentuk kombinasi dengan antibakterial lainnya untuk menghindari resistensi dan untuk pengobatan tuberkulosis (Sweetman, 2009).

Efek samping dari penggunaan rifampisin adalah gangguan saluran cerna (anoreksia, diare, mual dan muntah), gangguan darah (trombositopenia, eosinofilia, leukopenia dan anemia), gangguan saraf (sakit kepala), udema dan perubahan warna pada urin, feses, keringat, air liur, dahak, air mata dan cairan tubuh lainnya menjadi jingga hingga merah (Sweetman, 2009).

2.1.2 Isoniazid

Menurut Ditjen BKAK (2014) dan Sweetman (2009), uraian tentang isoniazid adalah sebagai berikut :

Rumus Struktur :

dan cahaya.

Kelarutan : Mudah larut dalam air; agak sukar larut dalam etanol; sukar larut dalam kloroform dan eter.

Isoniazid adalah turunan hidrazida dan merupakan obat utama dalam pengobatan penyakit tuberkulosis. Sering digunakan dalam bentuk kombinasi (Sweetman, 2009). Efek utamanya adalah menghambat biosintesis asam mikolat (mycolic acid) yang merupakan unsur penting dinding sel mikobakterium (Istiantoro dan Setiabudy, 2012).

Efek samping dari penggunaan isoniazid adalah gangguan hati (mual, muntah dan lelah), gangguan darah (anemia, agranulositosis, trombositopenia dan eosinofilia), hipersensesitivitas (eritema) dan efek samping lainnya (konstipasi dan retensi urin) (Sweetman, 2009).

2.2. Spektrofotometri

Spektrofotometri adalah metode pengukuran yang didasarkan pada interaksi cahaya dengan materi. Suatu alat yang mengukur panjang gelombang dan intensitas sinar ultraviolet – visible yang diserap oleh sampel disebut spektrofotometer ultraviolet – visible. Ultraviolet berada pada panjang gelombang 200 – 400 nm, sedangkan visible berada pada rentang panjang gelombang 400 – 800 nm ( Dachriyanus, 2004 ).

Spektrofotometer merupakan penggabungan dari dua fungsi alat yang terdiri dari spektrofotometer yang menghasilkan sinar dari spektrum dengan

homogen, suatu bagian dari cahaya yang ada akan dipantulkan, sebagian diserap medium, dan sisanya ditransmisikan atau diteruskan (Dachriyanus, 2004 ).

Jika suatu molekul sederhana dikenakan radiasi elektromagnetik maka molekul tersebut akan menyerap radiasi elektromagnetik. Interaksi antara molekul dengan radiasi elektromagnetik ini akan meningkatkan energi dari tingkat dasar ke tingkat tereksitasi. Apabila pada molekul yang sederhana tadi hanya terjadi transisi elektronik pada satu macam gugus yang terdapat pada molekul, maka hanya akan terjadi satu absorpsi yang merupakan pita spektrum. Terjadinya dua atau lebih pita spektrum diberikan oleh molekul dengan struktur yang lebih kompleks karena terjadi beberapa transisi sehingga mempunyai lebih dari satu panjang gelombang (Rohman, 2007).

Spektrum elektron suatu molekul adalah hasil transisi antara dua tingkat energi elektron pada molekul tersebut. Radiasi ultraviolet diabsorpsi oleh molekul organik aromatik, molekul yang mengandung elektron-π terkonjugasi atau atom yang mengandung elektron-n, menyebabkan transisi elektron di orbit terluarnya dari tingkat energi elektron dasar ke tingkat energi tereksitasi lebih tinggi. Besarnya absorbansi radiasi tersebut berbanding dengan banyaknya molekul analit yang mengabsorpsi dan dapat digunakan untuk analisis kuantitatif (Satiadarma, dkk., 2004).

Menurut Rohman (2007), unsur - unsur terpenting suatu spektrofotometer adalah sebagai berikut:

1. Sumber-sumber lampu: lampu deutrium digunakan untuk daerah UV pada panjang gelombang dari 190 - 350 nm, sementara lampu halogen kuarsa atau lampu tungsten digunakan untuk daerah visibel pada panjang gelombang antara 350 - 900 nm.

2. Monokromotor: digunakan untuk memperoleh sumber sinar yang monokromatis. Alatnya berupa prisma untuk mengarahkan sinar monokromatis yang diinginkan dari hasil penguraian.

3. Kuvet (sel): digunakan sebagai wadah sampel untuk menaruh cairan ke dalam berkas cahaya spektrofotometer. Kuvet itu haruslah meneruskan energi radiasi dalam daerah spektrum yang diinginkan. Pada pengukuran di daerah sinar tampak, kuvet dapat digunakan, tetapi untuk pengukuran pada daerah ultraviolet kita harus menggunakan sel kuarsa karena gelas tidak tembus cahaya pada daerah ini. Kuvet tampak dan ultraviolet yang khas mempunyai ketebalan 1 cm.

4. Detektor: Peranan detektor penerima adalah memberikan respon terhadap cahaya pada berbagai panjang gelombang.

2.4. Hukum Lambert-Beer

Menurut Hukum Lambert, serapan berbanding lurus terhadap ketebalan sel yang disinari. Sedangkan menurut Beer, serapan berbanding lurus dengan

dan ketebalan sel, hukum Lambert-Beer menyatakan bahwa intensitas yang diteruskan oleh larutan zat penyerap berbanding lurus dengan tebal dan konsentrasi larutan (Rohman, 2007).

Menurut Rohman (2007), hukum Lambert-Beer umumnya dikenal dengan persamaan sebagai berikut:

A = a.b.c Dimana: A = absorbansi

a = absorptivitas b = tebal kuvet (cm) c = konsentrasi

Absorptivitas (a) merupakan suatu konstanta yang tidak tergantung pada konsentrasi, tebal kuvet dan intensitas radiasi yang mengenai larutan sampel. Absorptivitas tergantung pada suhu, pelarut, struktur molekul dan panjang gelombang radiasi (Rohman, 2007).

2.5. Analisis Multikomponen dengan Spektrofotometri Ultraviolet

Analisis kuantitatif campuran dua komponen merupakan teknik pengembangan analisis kuantitatif komponen tunggal. Prinsip pelaksanaanya adalah mencari absorban atau beda absorban tiap-tiap komponen yang memberikan korelasi yang linier terhadap konsentrasi, sehingga akan dapat

Spektra tidak tumpang tindih, atau sekurangnya dimungkinkan untuk menemukan suatu panjang gelombang dimana X menyerap dan Y tidak, serta panjang gelombang serupa untuk mengukur Y. Situasi kemungkinan I dapat dilihat pada gambar 4. Konstituen X dan Y semata-mata diukur masing-masing pada panjang gelombang λ1 dan λ2. X Y absorban λ1 λ2. Spektra absorpsi senyawa X dan Y (tidak ada tumpang tindih pada dua panjang gelombang yang digunakan)

2. Kemungkinan II

Tumpang tindih satu-cara darispektra: seperti ditunjukkan pada gambar 5, Y tidak mengganggu pengukuran X pada λ1, tetapi X memang menyerap cukup banyak bersama-sama Y pada λ2. Pendekatan soal ini pada prinsipnya sederhana. Konsentrasi X ditetapkan langsung dari absorbansi larutan pada λ1. Kemudian

dari absorbansi terukur larutan pada λ2 sehingga akan diperoleh absorbansi yang disebabkan oleh Y; konsentrasi Y kemudian dapat diukur dengan cara yang umum. Spektra kemungkinan dua dapat dilihat pada gambar dibawah ini:

3. Kemungkinan III

Tumpang tindih dua cara dari spektra : bila tidak dapat ditemukan panjang gelombang ini:

Spectra saling dimana X atau Y menyerap secara eksklusif. Seperti yang ditunjukkan gambar dibawah tumpang tindih dari dua komponen X dan Y. pada absorbansi maksimum dari komponen X pada λ1. Komponen Y juga mempunyai absorbansi tersendiri. Demikian juga pada absorbansi maksimum senyawa Y pada λ2. Komponen X juga mempunyai absorbansi tersendiri. Spectrum serapan dari

tersebut akan sulit terpenuhi. Untuk mengatasi hal tersebut, telah diperkenalkan analisis multikomponen menggunakan prinsip persamaan regresi berganda (multiple regression) melalui perhitungan matriks dengan metode pengamatan beberapa panjang gelombang (multiple wavelength ) (Andrianto, 2009).

Pengukuran tersebut akan valid jika pengukuran serapan dilakukan pada multi panjang gelombang dengan jumlah melebihi komponen dan dikenal dengan istilah over-determained system (Andrianto, 2009).

2.6. Validasi Metode Analisis

Validasi metode analisis adalah suatu tindakan penilaian terhadap parameter tertentu pada prosedur penetapan yang dipakai, untuk membuktikan bahwa parameter tersebut memenuhi persyaratan untuk penggunaannya (Harmita, 2004).

Validasi metode analisis dilakukan dengan uji laboratorium, dengan demikian dapat ditunjukkan bahwa karakteristik kinerjanya telah memenuhi persyaratan untuk diterapkan dalam analisis senyawa atau sediaan yang bersangkutan (Satiadarma, dkk., 2004). Parameter analisis yang ditentukan pada validasi adalah akurasi, presisi, limit deteksi, limit kuantitasi, kelinieran, dan rentang (Rohman, 2007).

2.6.1. Akurasi

Akurasi (kecermatan) adalah ukuran yang menunjukkan derajat kedekatan hasil analisis dengan kadar analit sebenarnya. Rentang nilai % akurasi analit yang

(Ditjen BKAK,2014) 2.6.2. Presisi

Presisi adalah derajat kesesuaian di antara masing-masing hasil uji, jika prosedur analisis ditetapkan berulang kali pada sejumlah cuplikan yang diambil dari satu sampel homogen. Presisi dinyatakan sebagai deviasi standar atau deviasi standar relatif (Harmita, 2004; Satiadarma, dkk., 2004).

Parameter-parameter seperti simpangan baku (SB), simpangan baku relatif, dan derajat kepercayaan haruslah dikalkulasi untuk mendapatkan tingkat presisi tertentu. Nilai simpangan baku relatif dinyatakan memenuhi persyaratan jika < 2% (Ermer dan McB. Miller, 2005). Dimana menurut Ermer dan McB. Miller (2005) rumus simpangan baku relatif adalah:

Simpangan baku relatif = ×100%

X SB

2.6.3. Linearitas

Linieritas menunjukkan kemampuan suatu metode analisis untuk memperoleh hasil pengujian yang sesuai dengan kisaran konsentrasi analit tertentu. Hal ini dapat dilakukan dengan cara membuat kurva kalibrasi dari beberapa set larutan baku yang telah diketahui konsentrasinya. Persamaan garis yang digunakan pada kurva kalibrasi diperoleh dari persamaan Y = aX + b.

2.6.4. Rentang

Rentang adalah konsentrasi terendah dan tertinggi yang mana suatu metode analitik menunjukkan akurasi, presisi dan linieritas yang cukup. Rentang suatu prosedur dapat divalidasi lewat pembuktian bahwa prosedur analitik tersebut mampu memberikan presisi, akurasi dan linieritas yang dapat diterima ketika digunakan untuk menganalisi

1.1 Latar Belakang

Penetapan kadar rifampisin dan isoniazid dalam bentuk tunggal dapat ditetapkan dengan metode spektrofotometri ultraviolet, rifampisin memiliki serapan maksimum dalam larutan asam pada panjang gelombang 231 nm, sedangkan isoniazid pada panjang gelombang 266 nm (Moffat, dkk., 2005).

Penetapan kadar bahan baku rifampisin dan isoniazid juga dapat dilakukan dengan metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT). Penetapan kadar untuk sediaan tablet rifampisin tidak tercantum, sedangkan monografi untuk sediaan tablet isoniazid sama seperti bahan baku (Ditjen BKAK, 2014; USP 30-NF 25, 2007). Untuk uji identifikasi tablet yang mengandung kombinasi rifampisin dan isoniazid dapat dilakukan dengan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) (WHO, 2006).

Persyaratan kadar untuk sediaan tablet kombinasi rifampisin dan isoniazid tercantum dalam World Health Organization (WHO) (2006), yaitu mengandung tidak kurang dari 90% dan tidak lebih dari 110% dari jumlah rifampisin dan isoniazid yang tertera pada etiket.

Beberapa penelitian mengenai penetapan kadar rifampisin dan isoniazid telah banyak dilakukan sebelumnya, antara lain dengan metode spektrofotometri

sinar tampak untuk penetapan kadar rifampisin, dilakukan pada panjang gelombang 475 nm dalam larutan buffer pH 7,4, sedangkan untuk penetapan kadar isoniazid dilakukan menggunakan metode spektrofotometri derivatif pada derivat pertama dengan panjang gelombang 257 nm, menggunakan pelarut HCl 0,012 M. Hasil penelitian diperoleh kadar rifampisin dan isoniazid masing-masing adalah 99,03% dan 100,01%.

Penelitian lainnya dilakukan oleh Tatarczak (2005), yaitu penggunaan metode KCKT dalam penetapan kadar rifampisin dalam sediaan kapsul yang mengandung kombinasi rifampisin dan isoniazid. Penelitian dilakukan menggunakan fase gerak air-metanol, kolom Zorbax C18 (250 mm x 4,6 mm), dengan laju alir 1 ml/menit, dan detektor ultraviolet pada 333,6 nm. Waktu retensi rifampisin adalah 12,86 menit. Hasil penelitian diperoleh jumlah kandungan rata-rata rifampisin dalam kapsul adalah 300,47 mg.

Penetapan kadar rifampisin dan isoniazid dengan metode elektroanalisis dilakukan menggunakan enam sampel, yang terdiri dari 4 sampel sediaan kapsul, dan 2 sampel sediaan tablet. Pelarut yang digunakan adalah buffer Mcllvaine pH 7,0 (sodium monofosfat 0,2 mol/L dan asam sitrat 0,1 mol/L). Dari penelitian tersebut, diperoleh hasil bahwa dari keenam sampel yang diuji, hanya satu sampel yang kadar rifampisinnya tidak memenuhi syarat (Leandro, dkk., 2009).

secara multikomponen, dengan pelarut HCl 0,1 N. Diperoleh kadar rifampisin dan isoniazid masing-masing adalah (100,73 ± 0,23)% dan (98,96 ± 0,30)%.

Nuna (2015), telah melakukan penelitian penetapan kadar rifampisin dan isoniazid dalam sediaan tablet dengan menggunakan spektrofotometri derivatif dengan zero crossing dengan pelarut HCl 0,1 N. Diperoleh kadar rifampisin adalah (100,51 ± 4,43)% dan kadar isoniazid adalah (99,7 ± 1,52)%.

Metode spektrofotometri ultraviolet digunakan untuk menganalisis senyawa tunggal, dengan adanya modifikasi metode spektrofotometri ultraviolet ini maka dapat digunakan untuk analisis multikomponen dalam rangka pengawasan mutu dengan memodifikasi tersebut maka penetapan kadar campuran rifampisin dan isoniazid dapat ditetapkan secara bersama-sama tanpa harus dipisahkan dan dengan waktu yang singkat dengan alat dan biaya yang relatif lebih murah (Andrianto, 2009).

Metode penetapan kadar yang dapat dikembangkan adalah metode analisis multikomponen yang lebih praktis secara spektrofotometri ultraviolet dengan prinsip persamaan regresi melalui perhitungan matriks dengan metode pengamatan pada panjang gelombang berganda. Rifampisin dan Isoniazid memiliki panjang gelombang yang berdekatan yaitu rifampisin memiliki panjang

memberikan serapan sampai hampir tidak memberikan serapan,dimana serapan memenuhi hukum Lambert Beer yaitu 0,2 – 0,6. Penentuan panjang gelombang analisis dengan memilih lima panjang gelombang secara variable bebas. Pada metode panjang gelombang berganda tidak diperlukan proses pemisahan komponen zat aktif karena kadar rifampisin dan isoniazid dapat ditetapkan secara bersama-sama (Andrianto, 2009).

Berdasarkan hal tersebut, dalam penelitian ini akan dilakukan penetapan kadar campuran rifampisin dan isoniazid pada sediaan tablet dengan metode spektrofotometri UV secara panjang gelombang berganda.

1.2. Perumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang di atas, maka dibuat perumusan masalah sebagai berikut:

a. apakah metode spektrofotometri UV dengan cara penentuan panjang gelombang berganda dapat digunakan untuk menetapkan kadar campuran rifampisin dan isoniazid?

b. apakah kadar rifampisin dan isoniazid dalam sediaan tablet yang ditentukan dengan spektrofotometri UV dengan metode panjang gelombang berganda memenuhi persyaratan yang tercantum pada WHO (2006) ?

berikut:

a. metode spektrofotometri UV dengan cara penentuan panjang gelombang berganda dapat digunakan untuk menetapkan kadar campuran rifampisin dan isoniazid.

b. kadar rifampisin dan isoniazid dalam sediaan tablet yang ditentukan dengan metode spektrofotometri UV dengan cara penentuan panjang gelombang berganda memenuhi persyaratan yang tercantum dalam WHO (2006). 1. 4. Tujuan Penelitian

Tujuan dilakukannya penelitian ini adalah:

a. untuk mengetahui apakah metode penetapan kadar campuran rifampisin dan isoniazid secara spektrofotometri UV dengan metode panjang gelombang berganda dapat digunakan.

b. untuk mengetahui apakah kadar secara penetapan kadar campuran rifampisin dan isoniazid secara spektrofotometri UV dengan metode panjang gelombang berganda memenuhi persyaratan yang tercantum dalam WHO (2006).

1.5 Manfaat Penelitian

ABSTRAK

Obat yang digunakan untuk penyakit tuberkulosis digolongkan atas dua kelompok, yaitu obat primer dan obat sekunder. Rifampisin dan isoniazid termasuk kedalam kelompok obat primer. Tablet kombinasi rifampisin dan isoniazid merupakan salah satu sediaan obat kombinasi dalam pengobatan tuberkulosis. Tujuan penelitian ini adalah untuk menetapkan kadar rifampisin dan isoniazid dalam sediaan tablet yang beredar di pasaran secara spektrofotometri ultraviolet dengan metode panjang gelombang berganda.

Penelitian ini dilakukan dengan pengambilan sampel secara purposif. Penetapan kadar rifampisin dan isoniazid secara spektrofotometri ultraviolet dengan metode panjang gelombang berganda. Tahapan yang dilakukan dengan menentukan spekrum serapan, menentukan lima panjang gelombang analisis, menentukan nilai serapan (a), kemudian menghitung kadar dengan menggunakan perhitungan matriks.

Dari hasil penelitian diperoleh kadar campuran rifampisin dan isoniazid pada tablet Rimactazid® menggunakan pelarut HCl 0,1 N adalah sebesar (97,40 ± 0,30)% dengan KV = 0,1951% untuk rifampisin, dan (97,83 ± 0,12)%, dengan nilai KV = 0,0787 % untuk isoniazid.

Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa kadar campuran rifampisin dan isoniazid dalam sediaan tablet yang diteliti memenuhi persyaratan tablet menurut WHO (2006), yaitu mengandung rifampisin dan isoniazid tidak kurang dari 90% dan tidak lebih dari 110% dari jumlah yang tertera pada etiket. Serta memenuhi persyaratan akurasi dan presisi, sehingga dapat disimpulkan bahwa metode spektrofotometri dengan panjang gelombang berganda dapat digunakan untuk melakukan penetapan kadar campuran rifampisin dan isoniazid dalam sediaan tablet.

Kata kunci: Rifampisin, Isoniazid, Tablet, Spektrofotometri Ultraviolet, Panjang Gelombang Berganda

51.1 Replikasi 5 ... 93

52.1 Replikasi 1 ... 94

52.2 Replikasi 2 ... 94

53.1 Replikasi 3 ... 95

53.2 Replikasi 4 ... 95

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

1 Data Perhitungan Serapan Rifampisin Pengulangan I ... 32

2 Data Perhitungan Serapan Rifampisin Pengulangan II .... 33

3 Data Perhitungan Serapan Rifampisin Pengulangan III ... 33

4 Data Perhitungan Serapan Rifampisin Pengulangan IV ... 33

5 Data Perhitungan Serapan Rifampisin Pengulangan V .... 34

6 Data Perhitungan Serapan Rifampisin Pengulangan VI ... 34

7 Data Perhitungan Serapan Isoniazid Pengulangan I ... 34

8 Data Perhitungan Serapan Isoniazid Pengulangan II ... 35

9 Data Perhitungan Serapan Isoniazid Pengulangan III ... 35

10 Data Perhitungan Serapan Isoniazid Pengulangan IV ... 35

11 Data Perhitungan Serapan Isoniazid Pengulangan V ... 36

12 Data Perhitungan Serapan Isoniazid Pengulangan VI ... 36

13 Data Kadar dan Koefisien Variasi Rifampisin dan Isoniazid dalam Sediaan Tablet Rimactazid® ... 38

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1 Sampel Tablet Rimactazid® ... 43

2 Komposisi Tablet Rimactazid® ... 44

3 Gambar Alat ... 45

4 Perhitungan Pembuatan HCl 0,1 N ... 46

5 Bagan Alir Pembuatan Larutan Baku Rifampisin ... 47

6 Bagan Alir Pembuatan Larutan Baku Isoniazid ... 48

7 Bagan Alir Penentuan Panjang Gelombang Analisis ... 49

8 Bagan Alir Pembuatan Larutan Baku Campuran ... 50

9 Bagan Alir Pembuatan Kadar Sampel ... 51

10 Data Perhitungan Kadar Rifampisin dan Isoniazid ... 52

11 Data Perhitungan Kadar Teoritis Baku Rifampisin dan Isoniazid ... 53

12 Data Perhitungan Kadar Teoritis Baku Rifampisin dan Isoniazid (lanjutan)... 54

13 Data Perhitungan Kadar Teoritis Baku Rifampisin dan Isoniazid (lanjutan)... 55

14 Data Perhitungan Kadar Teoritis Baku Rifampisin dan Isoniazid (lanjutan)... 56

15 Data Penimbangan Baku Serta Kadar Teoritis... 57

16 Data Kalibrasi Replikasi VI dari Rifampisin baku ARS, Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi ... 58

17 Data Kalibrasi Replikasi VI dari Rifampisin baku ARS, Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi (lanjutan) ... 59

18 Data Kalibrasi Replikasi VI dari Rifampisin baku ARS, Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi ... 60

19 Data Kalibrasi Replikasi VI dari Rifampisin baku ARS,

Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi (lanjutan) ... 61 20 Data Kalibrasi Replikasi VI dari Rifampisin baku ARS,

Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi ... 62 21 Data Kalibrasi Replikasi VI dari Rifampisin baku ARS,

Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi (lanjutan) ... 63 22 Data Kalibrasi Replikasi VI dari Rifampisin baku ARS,

Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi ... 64 23 Data Kalibrasi Replikasi VI dari Rifampisin baku ARS,

Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi (lanjutan) ... 65 24 Data Kalibrasi Replikasi VI dari Rifampisin baku ARS,

Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi ... 66 25 Data Kalibrasi Replikasi VI dari Rifampisin baku ARS,

Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi (lanjutan) ... 67 26 Data Kalibrasi Isoniazid, Persamaan Regresi dan

Koefisien Korelasi ... 68 27 Data Kalibrasi Isoniazid, Persamaan Regresi dan

Koefisien Korelasi (lanjutan) ... 69 28 Data Kalibrasi Isoniazid, Persamaan Regresi dan

Koefisien Korelasi ... 70 29 Data Kalibrasi Isoniazid, Persamaan Regresi dan

Koefisien Korelasi (lanjutan) ... 71 30 Data Kalibrasi Isoniazid, Persamaan Regresi dan

Koefisien Korelasi ... 72 31 Data Kalibrasi Isoniazid, Persamaan Regresi dan

Koefisien Korelasi (lanjutan) ... 73 32 Data Kalibrasi Isoniazid, Persamaan Regresi dan

Koefisien Korelasi ... 74 33 Data Kalibrasi Isoniazid, Persamaan Regresi dan

Koefisien Korelasi (lanjutan) ... 75 34 Data Kalibrasi Isoniazid, Persamaan Regresi dan

35 Data Kalibrasi Isoniazid, Persamaan Regresi dan

Koefisien Korelasi (lanjutan) ... 77

36 Data Penimbangan Sampel ... 78

37 Data Serapan Larutan Sampel ... 79

38 Data Serapan Larutan campuran Baku ... 80

39 Perhitungan Akurasi dari Matriks dan % CV ... 81

40 Perhitungan Statistik Kadar Rifampisin dan Isoniazid ... 82

41 Perhitungan Statistik Kadar Rifampisin dan Isoniazid (lanjutan) ... 83

42 Perhitungan Statistik Kadar Rifampisin dan Isoniazid (lanjutan) ... 84

43 Perhitungan Statistik Kadar Rifampisin dan Isoniazid (lanjutan) ... 85

44 Perhitungan Statistik Kadar Rifampisin dan Isoniazid (lanjutan) ... 86

45 Perhitungan Statistik Kadar Rifampisin dan Isoniazid (lanjutan) ... 87

46 Perhitungan %KV ... 88

47 Contoh Perhitungan Kadar Rifampisin dan Isoniazid dalam Sediaan Tablet ... 89

48 Contoh Perhitungan Kadar Rifampisin dan Isoniazid dalam Sediaan Tablet (lanjutan)... 90

49 Spectrum Serapan dari Larutan Standar Rifampisin ... 91

50 Spectrum Serapan dari Larutan Standar Rifampisin (lanjutan) ... 92

51 Spectrum Serapan dari Larutan Standar Rifampisin (lanjutan) ... 93 52 Spectrum Serapan dari Larutan Standar Isoniazid

53 Spectrum Serapan dari Larutan Standar Isoniazid

(lanjutan) ... 95

54 Spectrum Serapan dari Larutan Standar Isoniazid (lanjutan) ... 96

55 Daftar Nilai Distribusi r ... 97

56 Daftar Nilai Distribusi t ... 98

57 Sertifikat Pengujian Rifampisin ... 99