BAB 3 BAHAN DAN METODE PENELITIAN
3.1 Alat-alat
- Neraca analitis Ohauss
- Oven Gallenkamp
- Incubator shaker Vision
- Rotarievaporator Buchi
- Chamber - Syringe
Hamilton - Desikator
- Erlenmeyer Pyrex
- Beaker glass Pyrex
- Pipet tetes - Gelas ukur
Pyrex - Spatula
- Botol vial - Corong pisah
Pyrex - Seperangkat alat Fourier Transform Infrared Spectroscopy
Perkin Elmer - Seperangkat alat Gas Chromatography
Shimadzu - Buret
Pyrex - Statif dan klem
- Cawan porselen - Vortex
- Labu takar Pyrex
Universitas Sumatera Utara
3.2 Bahan-bahan
- Minyak inti sawit PT.SMART
- Gliserol
l
p.a E’merck
- Enzim lipase Candida rugosa
s
p.a E’merck
- Dietil eter
l
p.a E’merck
- KH
2
PO
4s
p.a E’merck
- K
2
HPO
4s
p.a E’merck - Akuades
- N-Methyl-N-trimethylsilyltrifluoroacetamida MSTFA
l
p.a E’merck - Trikaprin
l
p.a E’merck - Tetrahydrofuran THF
l
p.a E’merck - KOH 0,1 N
l
- Indikator phenolftalein
l
- Tert-butanol
l
p.a E’merck
- Alkohol 96
l
p.a E’merck - Asam oksalat
s
p.a E’merck - Gas nitrogen
3.3 Prosedur Penelitian 3.3.1 Pembuatan Larutan Pereaksi
3.3.1.1 Indikator Fenolftalein 1
Sebanyak 1 g indikator fenolftalein ditimbang dan dilarutkan dengan etanol dalam labu takar 100 mL sampai garis tanda.
3.3.1.2 Pembuatan Larutan KOH 0,1 N a. Pembuatan Larutan KOH 0,1 N
Ditimbang 1,4 g KOH dan dimasukkan kedalam labu takar 250 mL, kemudian dilarutkan dengan akuades hingga tanda batas setelah itu dihomogenkan.
Universitas Sumatera Utara
b. Standarisasi Larutan KOH 0,1 N dengan Asam Oksalat
Sebanyak 0,63 g asam oksalat ditimbang dengan teliti BM=126, kemudian dilarutkan ke dalam 100 mL aquades dan dipipet sebanyak 10 mL kemudian
ditambahkan 3 tetes indikator fenolftalein kemudian dititrasi dengan larutan KOH yang akan dstandarisasi hingga warna merah rose. Dilakukan hal yang sama
sebanyak 3 kali. Perhitungan N larutan KOH = g asam oksalat x 2
0,216 x mL KOH
3.3.1.3 Pembuatan Buffer Posfat 0,05 M untuk Posfat
Dipakai rumus : atau
Dimana: [HA] = konsentrasi asam
[A
-
] = konsentrasi garam
7,0 = 7,2 = 7,2
– 7,0 = 0,2
= 1,5849 =
x 100 x 100
x 100
Universitas Sumatera Utara
x 100 x 100
= 61,32 Gram garam = Garam x Molaritas x BM
= 38,68 x 0,05M x 174 gmol = 0,3868 x 0,05M x 174 gmol
= 3,3652 gL Gram Asam = Asam x Molaritas x BM
= 61,32 x 0,05M x 136 gmol = 0,6132 x 0,05M x 136 gmol
= 4,1698 gL Ditimbang 4,1698 g KH
2
PO
4s
dan 3,3652 g K
2
HPO
4s
. Dilarutkan masing- masing kristal dengan sedikit akuades di dalam beaker glass. Dicampurkan larutan
ke dalam labu takar 100 mL. Ditambahkan akuades hingga garis batas lalu dihomogenkan.
3.3.2. Penentuan Kadar Air PKO SNI 01-2891-1992 Cawan kosong dikeringkan dalam oven selama 15 menit. Cawan didinginkan
dalam desikator. Cawan diambil dengan penjepit kemudian cawan kering yang sudah didinginkan ditimbang. Ditimbang sebanyak 2 g sampel pada cawan
tersebut ditimbang lalu dikeringkan pada oven suhu 105˚C selama 3 jam kemudian didinginkan dalam desikator. Penimbangan dilakukan dan diulangi
hingga diperoleh bobot tetapkonstan ≤0,0005 g. Kadar air = [W3-W2 W2-W1] x 100
dimana: W1 = berat cawan kosong g
W2 = berat cawan dan contoh kering sebelum dikeringkan g W3 = berat cawan dan contoh sesudah dikeringkan g
Universitas Sumatera Utara
3.3.3. Penentuan Kadar Asam Lemak Bebas ALB pada minyak inti sawit Ketaren, 1986
Pengukuran kadar ALB dilakukan dengan metode titrimetri. Sebanyak 5 g minyak inti sawit dimasukkan ke dalam erlenmeyer kemudian ditambahkan 10 ml alkohol
96. Gelas Erlenmeyer ditutup dengan plastik dan diikat dengan karet lalu dipanaskan hingga mendidih. Sebanyak 3 tetes indikator phenolftalein
ditambahkan lalu dititrasi dengan larutan KOH 0,1 N hingga terjadi perubahan warna menjadi merah lembayung. Volume KOH yang terpakai kemudian dicatat.
Perhitungan ALB :
ALB = V. N. BM x 100 G.1000
Di mana : V = Volume KOH 0,1N mL N = Normalitas KOH 0,1N molL
BM =Berat molekul asam laurat gmol G = berat sampel minyak inti sawit g
3.3.4. Gliserolisis minyak inti sawit
Dimasukkan 6,98 gr minyak inti sawit ke dalam gelas Erlenmeyer lalu ditambahkan 7 mL buffer fosfat pH 7 dan ditambahkan 3,02 gr gliserol.
Kemudian ditambahkan 7 mL tert-butanol. Selanjutnya ditambahkan enzim lipase Candida rugosa sebanyak 0,1 gr. Diinkubasi di dalam incubator shaker pada
suhu 40
o
C dengan kecepatan 350 rpm selama 4 jam. Hasil gliserolisis dimasukkan kedalam corong pisah kemudian diekstraksi dengan dietil eter lalu didiamkan
hingga terbentuk 2 lapisan. Diambil lapisan atas yang mengandung gliserolat lalu diuapkan dengan rotarievaporator sehingga diperoleh gliserolat. Dilakukan
percobaan yang sama dengan waktu reaksi hingga 36 jam dengan variasi waktu 4 jam.
Universitas Sumatera Utara
Konversi gliserolat dianalisa berdasarkan nilai absorbansi gugus –OH dari
monogliserida dan digliserida pada spektroskopi FT-IR. Gliserolat dengan nilai absorbansi tertinggi dianalisa lebih lanjut dengan kromatografi lapis tipis dan
kromatografi gas untuk mengetahui kadar mono- dan digliserida.
3.3.5 Analisis Gliserolat dengan Kromatografi Gas AOCS, 1995
Sampel ditimbang sebanyak 0,05 g kemudian ditambahkan 100 µl MSTFA dan 100 µl trikaprin lalu campuran divortex hingga homogen. Setelah itu ditambahkan
0,1 ml THF dan 1 ml n-heptana lalu didiamkan. Campuran diinjeksikan ke dalam alat kromatografi gas dilengkapi dengan detektor ionisasi nyala. Kolom yang
digunakan adalah kolom kapiler DB-5HT 5-phenyl-methyl polysiloxane 6 m x 0,32 mm. Suhu detektor dan injektor 350˚C dan digunakan model split injector
200 : 1. Suhu oven diprogram dari 160 sampai 350˚C pada 30˚Cmin dan ditahan
pada 350˚C selama 25 menit. Nitrogen digunakan sebagai gas pembawa dengan
kecepatan alir 200 mlmenit. Waktu proses 30 menit dan sampel diinjeksikan 1µl secara manual. Untuk mendapatkan persentase senyawa yang dianalisa, dilakukan
dengan cara menghitung area masing-masing senyawa dari kromatogram yang didapatkan
Universitas Sumatera Utara
Hasil Cawan porselen
Minyak inti sawit
3.4 Bagan Penelitian 3.4.1 Penentuan kadar Air PKO
dikeringkan dalam oven selama 15 menit
didinginkan dalam desikator
ditimbang 2
g minyak
inti sawit
menggunakan neraca analitis ke dalam cawan porselin
dikeringkan dengan suhu oven 105°C selama 3 jam
didinginkan dalam desikator ditimbang
diulangi penimbangan hingga diperoleh bobot konstan
Universitas Sumatera Utara
Hasil
3.4.2. Analisa kadar asam lemak bebas minyak inti sawit
Minyak inti sawit
ditimbang sebanyak 5 g dimasukkan ke dalam erlenmeyer
ditambahkan 10 ml alkohol 96 ditutup dengan plastik dan diikat dengan karet
dipanaskan hingga mendidih ditambahkan 3 tetes indikator phenolftalein
dititrasi dengan KOH 0,1 N hingga terjadi perubahan warna menjadi merah lembayung
dicatat KOH 0,1 N yang terpakai dilakukan perlakuan yang sama sebanyak 3
kali
Universitas Sumatera Utara
6,98 gram Minyak inti sawit
Lapisan atasdietil eter, MG, DG, TG
Lapisan bawahenzim, pelarut, buffer, gliserol
Destilat dietil eter
GliserolatMG, DG, TG
Analisa FT-IR Analisa GC
3.4.3. Gliserolisis minyak inti sawit
dimasukkan ke dalam Erlenmeyer ditambahkan 7 mL buffer fosfat pH 7
ditambahkan 3,02 gram gliserol ditambahkan 7 mL tert-butanol
ditambahkan 0,1 gram enzim lipase Candida rugosa
diinkubasi di dalam incubator shaker pada suhu 40°C dengan kecepatan
shaker 350 rpm selama 4 jam
dimasukkan ke dalam corong pisah ditambahkan dietil eter
diekstraksi hingga
terbentuk dua
lapisan
diuapkan dengan rotarievaporator
Dilakukan percobaan yang sama hingga waktu reaksi 36 jam dengan variasi 4 jam.
Universitas Sumatera Utara
Gliserolat
3.4.4 Analisis Gliserolat dengan Kromatografi Gas
ditimbang sebanyak 0,05 g dengan neraca analitis
ditambahkan 100 µl MSTFA ditambahkan 100 µl trikaprin
dihomogenkan dengan alat vortex ditambahkan 0,1 ml THF
ditambahkan 1 ml n-heptana diatur suhu injektor dan detektor 350°C
diatur suhu oven dari 160 sampai 350°C pada 30°Cmin
ditahan pada 350°C selama 25 menit diinjeksikan sampel 1 µl secara manual
dihitung area masing-masing senyawa dari kromatogram
hasil
Dilakukan analisa yang sama hingga gliserolat waktu reaksi 36 jam dengan variasi 4 jam.
Universitas Sumatera Utara
BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1. Hasil Penelitian
A. Analisa FT-IR Hasil Gliserolisis Minyak Inti Sawit
Gliserolisis minyak inti sawit menggunakan enzim lipase dari Candida rugosa menghasilkan larutan yang mengandung campuran monogliserida, digliserida, dan
ester. Waktu reaksi optimum gliserolisis dapat diketahui dengan cara gliserolat terlebih dahulu dianalisa dengan spektroskopi FT-IR untuk mengetahui secara
kualitatif absorbansi gugus –OH dari campuran monogliserida dan digliserida
pada gliserolat setiap waktu yang telah ditentukan. Tabel4.1.Data absorbansi gugus
–OH dari campuran monogliserida dan digliserida.
Waktu reaksi jam Hasil
4 Ada
8 Ada
12 Ada
16 Ada
20 Ada
24 Ada
28 Tidak Ada
32 Tidak Ada
36 Tidak Ada
Hasil analisa dengan FT-IR menunjukkan bahwa substrat telah banyak terkonversi menjadi campuran monogliserida dan digliserida pada waktu reaksi 4
Universitas Sumatera Utara
Kategori