2. Mencit tampak sakit, tidak bergerak aktif Adapun klasifikasi galur ilmiah dari mencit Mus Muskulus:
Klasifikasi ilmiah Kerajaan:
Animalia Filum: Chordata
Kelas: Mammalia
Ordo: Rodentia
Famili: Muridae
Upafamili: Murinae
Genus: Mus
Spesies: M. Musculus
Tabel 4.1. Amori, G. 1996
4.4. Besar Sampel
Besar sampel yang digunakan pada penelitian ini berdasarkan rumus Federer 1963 dalam Wahyuni 2008:
- t = kelompok perlakuan tiga kelompok - n = jumlah sampel tiap kelompok
Banyaknya sampel pada penelitian ini adalah : t-1 n-1 ≥ 15
2n-2 ≥ 15
n ≥ 9
Dari hasil perhitungan di atas, dibutuhkan jumlah sampel sebanyak 9 ekor mencit pada tiap perlakuan sehingga total jumlah sampel yang dibutuhkan adalah
sebanyak 27 ekor mencit dengan perincian sebagai berikut : 1. K = kelompok kontrol yang diberikan air putih sebanyak 9 ekor mencit
selama 8 minggu. 2. P1 = kelompok perlakuan Pb asetat 100mgkgBBhari sebanyak 9 ekor
mencit selama 8 minggu 3. P2 = kelompok perlakuan Pb asetat 100mgkgBBhari dan madu 0,4 ml
20 grBBhari sebanyak 9 ekor selama 8 minggu. t-1 n-1
≥ 15
Universitas Sumatera Utara
4.5. Pelaksanaan penelitian 4.5.1. Penentuan Dosis Plumbum dan Dosis Madu
Pada penelitian ini dosis Pb asetat yang diberikan adalah 100 mgkg BB hari Anggraini, 2008. Pb asetat yang digunakan dalam bentuk serbuk kemudian
dilarutkan dengan aquades kemudian dimasukkan langsung ke lambung mencit dengan menggunakan jarum gavage peroral.
Madu yang digunakan dalam penelitian ini adalah madu murni produksi High-Desert USA, dengan nama dagang “`Clover Honey“, yaitu madu yang
nektarnya berasal dari bunga Clover, merupakan madu murni tanpa dilakukan pemrosesan, yang masih mengandung Bee Pollen, dan Royal Jelly. Dosis madu
yang diberikan adalah 0,04 ml20 grBBhari yang kemudian diencerkan dengan aquadest menjadi volume 0,2 ml, merujuk pada penelitian sebelumnya oleh Dewi
2010. Penggunaan madu untuk pencegahan penyakit pada manusia adalah 1-2
kalihari 1 sendok makan Suranto,2007. Dosis dikonversikan dengan tabel konversi Ngatidjan sehingga ditemukan dosis yang sesuai untuk mencit Mus
musculus. Perhitungan dosis madu menurut Dewi 2010 :
Dosis mencit setara dengan dosis untuk manusia yaitu 15 ml. Nilai konversi x 15 ml = 0.0026 x 15 ml madu = 0.04 ml madu.
Madu kemudian diencerkan dengan perbandingan madu dan aquadest adalah 1:5 sehingga madu yang akan disondekan untuk mencit dengan berat badan 20 gram
adalah 0.2 ml.
4.5.2. Pengumpulan dan Pemeliharaan Hewan percobaan
Mencit yang digunakan untuk penelitian adalah mencit jantan, umur 8-11 minggu, sehat dengan berat badan 25-35 gr. Kandang percobaan dibersihkan
setiap hari untuk mencegah infeksi yang dapat terjadi akibat kotoran mencit tersebut dan mencit dapat tetap sehat. Kandang ditempatkan dalam suhu kamar
dan cahaya menggunakan sinar matahari tidak langsung. Makanan hewan
Universitas Sumatera Utara
percobaan diberikan berupa pellet dan jagung halus. Makanan dan minuman diberikan secukupnya dalam wadah terpisah dan diganti setiap hari. Plumbum
asetat dan madu diberikan pada mencit dengan menggunakan jarum gavage per oral.
4.5.3. Persiapan Hewan percobaan
Setiap kelompok hewan percobaan dipersiapkan dalam kandang yang terpisah dan disiapkan untuk beradaptasi selama satu minggu sebelum dilakukan
penelitian. Sebelum perlakuan setiap mencit ditimbang berat badannya terlebih dahulu dan diamati kesehatan fisiknya gerakannya, berat badan, makan dan
minum. Bila terdapat mencit yang sakit pada saat berdaptasi maka mencit diganti yang baru dengan kriteria yang sama dan diambil secara acak Anggraini, 2008.
4.5.4. Perlakuan Hewan percobaan
Setelah persiapan selesai maka hewan percobaan kelompok I, kelompok II, dan kelompok III diberikan perlakuan sebagai berikut :
Setelah 8 minggu, hewan percobaan diaspirasi sedikit darah dari vena ekor mencit dan dijadikan sampel darah. Kemudian, sampel darah tersebut langsung
dibuat menjadi sediaan hapusan.
4.5.5. Pembuatan Sediaan Hapusan Darah
Pemeriksaan hapusan darah dilakukan dengan metode Giemsa Gandasoebrata, 1992.
a. Alat dan Bahan
Alat yang digunakan: gelas objek, kaca pendorong untuk membuat hapusan darah
Bahan yang digunakan: Sampel darah dan reagensia Giemsa dari P.T. Merek, aquadest serta metanol.
b. Cara kerja:
Universitas Sumatera Utara
Letakkan satu tetes kecil darah pada 2-3 mm dari ujung kaca objek. Letakkan kaca penghapus dengan sudut 30-45
terhadap kaca objek di depan tetesan darah. Tarik kaca penghapus ke belakang hingga menyeluruh tetesan darah,
tunggu hingga darah menyebar pada sudut tersebut. Dengan gerakan yang cepat dorong kaca penghapus hingga terbentuk hapusan darah sepanjang 3-4
cm pada kaca objek. Biarkan hapusan darah mengering diudara lalu warnai dengan pewarnaan Giemsa.
c. Cara pemeriksaan Hapusan Darah
Preparat diobservasi di bawah mikroskop dengan pembesaran okuler 10 kali dan objektif 100 kali, mempergunakan minyak emersidicari untuk
menghitung gambaran eritrosit basophilic stipling berhubungan dengan degradasi ribosom dan RNA yang berakibat penyatuan dan pengendapan
ribosom yang bersifat basofilik yang tampak secara zig zag per lapangan pandang dalam 1000 eritrosit Soebroganda, 1992.
4.6. Analisa Data
