35
MSS, Minimalt Salt Sugar Agar MSSA, agar bakto, larutan fisiologis NaCl 0.85, sukrosa 0,1 , yeast ekstrak, Flourescein Diacetate FDA, aseton pa,
KH
2
PO
4
pa, alumunium foil, aquadest, alkohol 70, benzen, heksana, dietil eter, serbuk KBr kering.
Tabel 6. Komposisi Medium
Nama medium
Agar g
MS ml
Ekstrak Ragi
g Sukrosa
g Serbuk
Batubara g
Keterangan
MSSA 1,5 200 0,2 1
2 Peremajaan
Kultur Spora MSS
- 600
0,6 g 0,6 g
1,5 g 30 ml
Biosolubilisasi
3.3. Prosedur Kerja
3.3.1. Persiapan dan Sterilisasi Alat
Alat – alat gelas yang akan digunakan dibersihkan terlebih dahulu. Alat- alat yang telah dibersihkan, disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121
o
C selama 15 menit. Peralatan yang tidak tahan panas disterilkan dengan menggunakan
alkohol 70 Waluyo, 2008.
3.3.2. Persiapan Serbuk Batubara
Batubara digerus dengan mortal secara aseptik di dalam LAFC hingga berukuran kecil. Batubara yang telah digerus, disaring menggunakan penyaring
dengan ukuran 100 mesh dan diayak sampai halus. Sampel batubara yang sudah halus disterilisasi menggunakan autoklaf Selvi dan Banerje, 1982.
36
3.3.3. Pembuatan Medium Minimal Salt MS
Medium MSS dibuat dengan cara menimbang sebanyak 0,52 g MgSO
4
.7H
2
O ; 0,003 g ZnSO
4
.7H
2
O ; 5 g KH
2
PO
4
; 0,005 g FeSO
4
, dan 1 g NH
4
SO
4
. Bahan-bahan tersebut dilarutkan dengan 1 liter aquades. Campuran tersebut dilarutkan sampai homogen Silva et al, 2007.
3.3.4. Pembuatan Medium Minimal Salt + Sugar + Agar MSSA
Medium MSSA dibuat dengan sebanyak 100 ml MS, ditambahkan batubara 1 2 g dan dimasukan ke dalam Erlenmeyer 1, ditutup dengan
alumunium foil , kemudian 100 ml aquadest dimasukan ke dalam Erlenmeyer 2
yang berbeda lalu ditambahkan 1,5 g agar, 1 g sukrosa, dan 0,2 g ekstrak ragi setelah itu dipanaskan dan ditutup dengan alumunium foil. Kedua Erlenmeyer
diautoklaf dengan tekanan 1 atm, suhu 121
o
C selama 15 menit. Kedua larutan yang berada di Erlenmeyer berbeda tersebut dicampur, dihomogenkan, dan
dituang ke dalam cawan petri yang telah diautoklaf.
3.3.5. Peremajaan Kultur Spora Kapang
Empat jenis Kultur kapang hasil isolasi dari tanah pertambangan diambil menggunakan ose steril, kemudian diinokulasi ke dalam 4 cawan petri yang berisi
15 ml medium MSSA. Medium MSSA direkatkan menggunakan parafilm dan diberi label sesuai kode isolatnya. Cawan petri yang berisi kultur kapang tersebut
diinkubasi pada suhu ruang 5-7 hari sampai kapang menghasilkan spora.
3.3.6. Kultur Inokulum Spora
