3.3 Pembuatan Media
3.3.1 Pembuatan Media PCA
Komposisi: PCA 2,35 g
Aquadest 100 ml
Timbang PCA sebanyak 2,35 g dan dimasukkan ke dalam erlenmeyer 100 ml. Dilarutkan dengan 100 ml aquades, lalu di homogenkan. Dipanaskan sambil
diaduk hingga larutan mendidih dan terlarut sempurna. Ditutup dengan aluminium foil. Disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121
o
C selama 20 menit.
3.3.2 Pembuatan Media NaCl 9
Komposisi: Natrium klorida 9 g
Air suling 100 ml
Natrium klorida ditimbang sebanyak 0,9 g lalu dilarutkan dengan air suling steril sedikit demi sedikit dalam erlenmeyer 100 ml sampai larut sempurna,
disterilkan di autoklaf pada suhu 121
o
C selama 15 menit Sonnenwirth, 1980.
3.4 Prosedur
3.4.1 Sterilisasi Alat
Alat – alat yang digunakan disterilkan terlebih dahulu sebelum dipakau. Alat – alat gelas disterilkan didalam oven pada suhu 170
C selama 1 jam. Media disterilkan di autoklaf pada suhu 121
C selama 15 menit Lay, 1992.
3.4.2 Pengenceran
Disetrilkan seluruh alat dan bahan yang digunakan. Dilakukan pengenceran 10
-1
menggunakan media pengencer NaCl. Diisi tabung reaksi 10
-1
menggunakan media NaCl sebanyak 9 ml tutup menggunakan pendopol. Disterilkan media tersebut
didalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121 C diamkan sampai dingin kemudian
dipipet 1 ml sampel air sungai belawan masukkan kedalam pengenceran 10
-1
lalu homogenkan. Kemudian pipet 0,1 ml dari pengenceran 10
-1
masukkan kedalam 10
-1
lalu dihomogenkan.
3.4.3 Pengujian sampel
Persiapan dan homogenisasi dilakukan dan dibuat tingkat pengenceran menggunakan larutan pengencer NaCl. Sebanyak 1 ml dipipet dari pengenceran 10
-1
ke dalam cawan petri steril kemudian tuangkan 15 ml media PCA yang masih cair dengan suhu 45±1 ke dalam masing-masing cawan petri. Goyangkan cawan petri
dengan hati-hati putar dan goyang ke depan, ke belakang, ke kanan dan ke kiri sehingga contoh pembenihan tercampur merata dan memadat. Biarkan sampai
campuran dalam cawan petri memadat. Masukkan semua cawan petri dengan posisi terbalik ke dalam inkubator pada suhu 37 selama 24 jam. Jika memungkinkan
inkubasi dilakukan dalam udara yang diperkaya dengan CO
2
dalam suatu jar anaerob. Catat pertumbuhan koloni pada setiap cawan petri yang mengandung 25 koloni
sampai dengan 250 koloni setelah 24 jam.
Kategori