Variabel Penelitian Batasan Penelitian

- Permukaan gelas benda dibersihkan dengan alkohol. - Bakteri diambil sebanyak satu ose diletakkan di permukaan gelas benda dan dicampur dengan tinta cina. - Gelas benda yang lain diletakkan dalam posisi miring sekitar 45° terhadap gelas benda yang pertama. - Gelas benda yang miring digoreskan terhadap gelas benda yang pertama secara merata. - Preparat apusan bakteri dikeringanginkan kemudian dilakukan pengamatan di bawah mikroskop dengan perbesaran kuat dengan bantuan minyak imersi Alexander et.al., 2003. f. Pengecatan Gram Pengecatan Gram dilakukan untuk mengetahui sifat gram dari bakteri. Langkahnya yakni: - Gelas benda dibersihkan dengan alkohol dan dikeringkan di atas api bunsen sampai kering - Satu ose bakteri diambil secara aseptis dan diratakan seluas 1 cm pada gelas benda kemudian difiksasi bakteri ditetesi dengan akuades dan dilewatkan di atas api bunsen. - Objek yang telah difiksasi ditetesi kristal violet pada permukaan lapisan bakteri dan didiamkan selama 1 menit. Hasil pengecatan kristal violet dicuci bersih dengan air mengalir dan dikeringanginkan. - Objek yang sudah kering ditetesi iodine dan didiamkan selama 1 menit, kemudian dicuci dengan air mengalir dan dikeringanginkan. - Proses dekolorisasi dilakukan pada objek dengan cara ditetesi alkohol dan didiamkan selama 30 detik lalu dicuci dengan air mengalir dan dikeringanginkan. - Objek ditetesi dengan safranin dan didiamkan selama 45 detik, kemudian dicuci dengan air mengalir dan dikeringanginkan. - Objek diamati menggunakan mikroskop dengan bantuan minyak imersi. - Bakteri dengan gram positif berwarna ungu sesuai dengan pewarna awal yakni kristal violet sedangkan bakteri gram negatif berwarna merah sesuai dengan pewarna akhir yakni safranin Irianto, 2006. g. Penyiapan Mikroorganisme Uji Penyiapan mikroorganisme untuk uji aktivitas antibakteri berupa suspensi bakteri dengan pengeceran 10 -4 . Langkahnya sebagai berikut: - Satu ose bakteri diambil kemudian dimasukkan dalam tabung reaksi berisi 10 ml akuades steril kemudian dihomogenkan menggunakan vortex mixer. - 1 ml suspensi bakteri uji diambil dari tabung pertama dan dimasukkan dalam tabung kedua yang berisi 9 ml akuades steril. - Langkah pertama dan kedua dilakukan hingga tabung yang keempat pengenceran 10 -4 . - Hasil pengenceran diambil 0,1 ml dan diteteskan pada media kultur kemudian diratakan dengan batang Drigalski secara aseptis.