Sifat toksik ini diketahui dari nilai LC
50
yaitu 75,94 ppm. Menurut Meyer dan Ferrigni 1982, Suatu senyawa dinyatakan mempunyai potensi toksisitas jika
mempunyai harga LC
50
kurang dari 1000 ppm. Sundari et al., 2007 menyatakan bahwa LC
50
Lethal Concentration 50 merupakan konsentrasi zat yang menyebabkan terjadinya kematian pada 50 hewan percobaan yaitu larva
Artemia salina Leach. Sifat toksik dari bunga kecombrang diperkirakan oleh
kandungan senyawa yang ada di dalam sampel tersebut Hasil analisa statistika anova satu-arah menunjukkan bahwa nilai F
hitung
masing-masing konsentrasi ekstrak air bunga kecombrang terhadap larva uji lebih besar daripada F
tabel
0,05 lampiran 7. Artinya bahwa ekstrak air bunga kecombrang terhadap perlakuan yang diberikan terdapat pengaruh yang sangat
signifikan. Hal ini menyebabkan adanya hubungan antara variasi konsentrasi ekstrak air bunga kecombrang dengan matinya hewan uji Artemia salina Leach.
4.3. Uji Antioksidan
Metoda yang digunakan dalam pengujian aktivitas antioksidan adalah metoda serapan radikal DPPH karena merupakan metoda yang sederhana, mudah,
dan menggunakan sampel dalam jumlah yang sedikit dengan waktu yang singkat Hanani, 2005. Aktivitas antioksidan dari ekstrak air bunga kecombrang ini
dinyatakan dalam persentase inhibisinya terhadap radikal DPPH. Persentase inhibisi ini didapatkan dari perbedaan serapan antara absorban DPPH dengan
absorban sampel yang diukur dengan spektrofotometer UV-Vis.
Pada pengujian aktivitas antioksidan ekstrak air bunga kecombrang ini terlebih dahulu membuat kurva kalibrasi dengan menggunakan BHA. Kurva hasil
kalibrasi dapat dilihat pada Gambar 9.
Gambar 9. Kurva kalibrasi pengujian aktivitas antioksidan menggunakan standar BHA
Pembuatan kurva kalibrasi dengan standar BHA ini berguna untuk
membantu keakuratan data yang diperoleh dalam uji antioksidan ekstrak air bunga kecombrang. Dari pemeriksaan larutan standar BHA didapatkan kurva kalibrasi
dengan persamaan regresi linier. Nilai koefisien korelasi r yang didapatkan pada kurva kalibrasi BHA adalah 0,917. Nilai r yang mendekati 1 membuktikan bahwa
persamaan regresi tersebut adalah linier. Uji aktivitas antioksidan ekstrak air bunga kecombrang dihasilkan nilai
absorbansi yang selalu menurun seiring dengan naiknya konsentrasi sampel. Berdasarkan hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak air bunga kecombrang
menunjukkan bahwa, semakin tinggi konsentrasi sampel maka peluruhan warna ungu violet DPPH dalam metanol semakin tinggi yang mengakibatkan turunnya
nilai absorbansi pada tiap naiknya konsentrasi. Menurut Zuhra et al., 2008 bahwa aktivitas antioksidan diukur sebagai penurunan serapan larutan DPPH
akibat adanya penambahan sampel. Aktivitas diukur dengan menghitung jumlah pengurangan intensitas warna ungu DPPH yang sebanding dengan pengurangan
konsentrasi larutan DPPH. Perendaman tersebut dihasilkan oleh bereaksinya molekul Difenil Pikril Hidrazil dengan atom Hidrogen yang dilepaskan satu
molekul komponen sampel, pelepasan satu molekul sampel akan membentuk senyawa Difenil Pikril Hidrazin dan menyebabkan terjadinya peluruhan warna
DPPH dari ungu ke kuning. Reaksi reduksi DPPH dapat dilihat pada Gambar 10.
Gambar 10. Reduksi DPPH dari senyawa peredam radikal bebas Prakash et al, 2001.
Penurunan nilai absorbansi DPPH mempunyai arti bahwa telah terjadinya penangkapan radikal DPPH oleh sampel. Adanya aktivitas antioksidan dari
sampel mengakibatkan perubahan warna pada larutan DPPH dalam metanol yang semula berwarna violet pekat menjadi kuning pucat Permana, 2003. Peluruhan
warna ungu violet dapat dilihat pada Gambar 11.
30 ppm 50 ppm
0 ppm 10 ppm
Gambar 11. Peluruhan warna DPPH oleh ekstrak air bunga kecombrang Dari data pengukuran nilai absorbansi dapat dianalisis pengaruh konsentrasi
sampel dengan persentasi inhibisi, dimana peningkatan sebanding dengan bertambahnya konsentrasi. Kemudian ditentukan persamaan regresi dan untuk
selanjutnya dari persamaan diplotkan aktivitas 50 sehingga diperoleh harga konsentrasi efektif IC
50
. Besarnya aktivitas antioksidan ditandai dengan nilai IC
50
, yaitu konsentrasi larutan sampel yang dibutuhkan untuk menghambat 50 radikal bebas DPPH. Hasil pengujian aktivitas antioksidan ekstrak air bunga
kecombrang dapat dilihat pada Tabel 4. Tabel 4. Persentase inhibisi dan nilai IC
50
aktivitas antioksidan ekstrak air bunga kecombrang
Konsentrasi Absorban Inhibisi IC
50
ppm 0 0,8907 0
10 0,6518 26,8216
30 0,4281 51,9367
50 0,4125 53,6881
61.65
Pada Tabel 5 dapat dilihat adanya penurunan nilai absorbansi DPPH yang diberikan sampel disetiap kenaikan konsentrasi. Penurunan nilai absorbansi DPPH
mempunyai arti bahwa telah terjadi penangkapan radikal DPPH oleh sampel. Dengan penangkapan radikal tersebut mengakibatkan ikatan rangakap diazo pada
DPPH berkurang sehingga terjadi penurunan absorbansi. Uji aktivitas antioksidan ekstrak air bunga kecombrang menggunakan metode DPPH terhadap ekstrak
metanol pada konsentrasi 0, 18, 36 dan 54 ppm diperoleh IC
50
sebesar 61.65 ppm. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak tersebut mempunyai aktivitas antioksidan
yang kuat, karena mempunyai IC
50
kurang dari 200 ppm. Menurut Blois, 1958 dalam
Hanani et al., 2005 menyatakan bahwa suatu bahan memiliki antioksidan kuat jika mempunyai IC
50
200 ppm. Aktivitas antioksidan dapat diketahui dari nilai persen inhibisi, naiknya
pesen inhibisi dipengaruhi oleh menurunnya nilai absorbansi yang dihasilkan oleh sampel. Penurunan nilai absorbansi disebabkan oleh tingginya konsentrasi sampel.
Hal ini dapat disimpulkan bahwa semakin tinggi konsentrasi sampel maka semakin kecil nilai absorbansi sehingga mengakibatkan persen inhibisi semakin
tinggi. Aktivitas antioksidan dapat dilihat pada Gambar 12.
Gambar 12. Kurva aktivitas antioksidan ekstrak air bunga kecombrang
Nilai IC
50
ekstrak air bunga kecombrang sebesar 61.65 ppm menunjukkan bahwa bunga kecombrang memiliki aktivitas antioksidan yang kuat sehingga baik
untuk pangan fungsional. Apabila dibandingkan dengan ekstrak metanol buah tomat Andayani et al., 2008 yang mempunyai LC
50
sebesar sebesar 44.06 µgml dan ekstrak eter belimbing wuluh Kuncahyo dan Sunardi, 2007 yang
mempunyai IC
50
dan 50.36 ppm aktivitas antioksidan ekstrak air bunga kecombrang relatif rendah. Jika dibandingkan dengan aktivitas vitamin C dan
BHT yang mempunyai IC
50
sebesar 3,45 dan 3,81 mgml, aktivitas antioksidan ekstrak air bunga kecombrang masih lebih rendah. Hal ini dikarenakan sampel
yang diujikan masih berupa ekstrak kasar crude, sehingga masih ada kemungkinan senyawa murni yang dikandung memiliki aktivitas perendaman
radikal bebas lebih kuat dibandingkan ekstraknya. Aktivitas antioksidan ekstrak air bunga kecombrang lebih kuat
dibandingkan ekstrak air dan etanol dari daun salam dan herba kumis kucing. Aktivitas antioksidan dari tanaman tersebut menunjukkan nilai LC
50
masing- masing sebesar 2174,23 ppm ekstrak etanol daun salam, 114,55 ppm ekstrak
etanol herba kumis kucing, 1700,11 ppm ekstrak air daun salam, dan 344,39 ppm ekstrak air herba kumis kucing Muflihat, 2008.
4.4. Uji Antibakteri
