Efek Ekstrak Etanol Buah Inggir-Inggir (Solanum Sanitwongsei Craib.) Terhadap Parameter Biokimia Pada Tikus Jantan Yang Diinduksi Nacl 2,5% Dan Metilprednisolon

Lampiran 4. Simplisia buah inggir-inggir

a

b

Keterangan: a. simplisia buah inggir-inggir

Lampiran 5. Gambar mikroskopik serbuk simplisia buah inggir-inggir (Solanum sanitwongsei Craib.)

Keterangan:

1. Parenkim sekat lokuli 2. Epidermis kulit biji 3. Serabut sklerenkim 4. Epikarpium

Lampiran 6. Gambar hewan percobaan

Keterangan

1. Tikus jantan saat penimbangan BB

Lampiran 7.Bagan alur penelitian

24 ekor tikus jantan

Kontrol : Na CMC 0,5%

(6 ekor)

EEBI :

• Dosis 50 mg/kg BB (6 ekor)

EEBI :

• Dosis 100 mg/kg BB (6 ekor)

EEBI :

• Dosis 150 mg/kg BB (6 ekor)

diberikan induksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon selama 14 hari secara per oral

diberikan Na CMC 0,5%, EEBI dosis 50 mg/kg BB, 100 mg/kg BB dan 150 mg/kg BB selama 7 hari secara per oral

didislokasi leher tikus pada hari ke 22 diambil darah tikus jantan melalui jantung, dan diambil organ hati, ginjal dan jantung Darah Hati Ginjal jantung dilakukan pengamatan makroskopik disentrifuge Serum diukur ALT,AST,Ureum,Kreatinin ,Total kolesterol,Trigliserida,HDL ,LDL,VLDL dan Glukosa

Lampiran 8. Perhitungan kadar air serbuk simplisia buah inggir-inggir

% Kadar Air = x 100%

1. % Kadar Air = x100% = 7,99 %

2. % Kadar Air = x100% = 3,99 %

3. % Kadar Air = x100% = 3,99 %

% Kadar Air Rata-Rata = = 5,32 %

No Berat Sampel (g) Volume Air (ml)

1. 5,002 0,4

2. 5,002 0,2

Lampiran 9. Perhitungan penetapan kadar sari larut dalam air serbuk simplisia buah inggir-inggir

1. % Kadar sari larut air = x x100% = 22,55%

2. % Kadar sari larut air = x x100% = 23,06%

3. % Kadar sari larut air = x x100% = 21,73%

% Kadar sari larut air rata-rata = 22,44%

No Berat sampel (g) Berat sari (g)

1. 5,0030 0,2257

2. 5,0002 0,2307

3. 5,0004 0,2174

Lampiran 10. Perhitungan penetapan kadar sari larut dalam etanol serbuk simplisia buah inggir-inggir

No. Berat sampel (g) Berat sari (g)

1. 5,0008 0,167

2. 5,0091 0,1666

3. 5,0019 0,1625

1. % Kadar sari larut dalam etanol = 100% = 16,63 %

2. % Kadar sari larut dalam etanol = 100% = 16,62 %

3. % Kadar sari larut dalam etanol = 100% = 16,24 %

% Kadar rata-rata = 16,49%

Lampiran 11. Perhitungan penetapan kadar abu total serbuk simplisia buah inggir- inggir

1. % Kadar abu total = 100% = 2,85%

2. % Kadar abu total = 100% = 4,08%

3. % Kadar abu total = 100% = 4,46%

% Kadar rata-rata = 100% = 3,79%

No. Berat sampel (g) Berat abu (g)

1. 2,0022 0,0572

2. 2,0103 0,0821

3. 2,0031 0,0894

Lampiran 12. Perhitungan penetapan kadar abu tidak larut dalam asam simplisia buah inggir-inggir

No. Berat sampel (g) Berat abu (g)

1. 2,0022 0,0132

2. 2,0103 0,0236

3. 2,0031 0,0124

1. % Kadar abu tidak larut dalam asam = 100% = 0,65%

2. % Kadar abu tidak larut dalam asam = 100% = 1,17%

3. % Kadar abu tidak larut dalam asam = 100% = 0,61%

% Kadar rata-rata=

= 0,81%

Lampiran 13. Volume maksimum sesuai jalur pemberian dan konversi dosis

1. Tabel volume maksimum larutan sediaan uji yang dapat diberikan pada hewan uji (Ritschel, 1974)

Jenis hewan uji

Volume maksimal (ml) sesuai jalur pemberian

i.v i.m i.p s.c p.o

Mencit (20-30 g) 0,5 0,05 1 0,5-1 1 Tikus (100 g) 0,1 0,1 2-5 2-5 5,0 Hamster (50 g) - 0,1 1-2 2,5 2,5

Marmut (250 g) - 0,25 2-5 5 10

Merpati (300 g) 2 0,5 2 2 10

Kelinci (2,5 kg) 5-10, 0,5 10-20 5-10 20

Kucing (3 kg) 1 10-20 5-10 50

Anjing (5 kg) 5-10 10-20

5 20-30 10 100

2. Tabel konversi dosis antara jenis hewan dengan manusia (Laurence, dkk., 2008) Mencit 20 g Tikus 200 g Marmut 400 g Kelinci 1,2 kg Kera 4 kg Anjing 12 kg Manusia 70 kg Mencit

20g 1,0 7,0 12,25 27,8 64,1 124,2 387,9 Tikus

200g 0,14 1,0 1,74 3,9 9,2 17,8 56,0

Marmut

400 g 0,08 0,57 1,0 2,25 5,2 10,2 31,5

Kelinci

1,2 kg 0,04 0,25 0,44 1,0 2,4 4,5 14,2

Kera

4 kg 0,016 0,11 0,19 0,42 1,0 1,9 6,1

Anjing

12 kg 0,008 0,06 0,10 0,22 0,52 1,0 3,1 Manusia

Lampiran 14. Contoh perhitungan dosis kontrol CMC Na 0,5% - Pembuatan CMC 0,5%

= 500 mg/ 100 ml = 5 mg/ml

- Perhitungan CMC Na 0.5% pada tikus 150 g = x 150 g

Volume yang diberikan = 0.75 ml

Lampiran 15. Contoh perhitungan dosis metilprednisolon 1,5 mg/kg bb bb tikus = 150 gram

Konsentrasi metilprednisolon = 0,1% = 1 mg/ml Untuk bb 150 g = x 1,5 mg/kg bb

= 0,225 mg

metilprednisolon yang diberikan = 0,225 ml

Lampiran 16. Contoh perhitungan dosis NaCl 2,5% bb - Pembuatan NaCl 2,5%

= 2500 mg/ 100 ml = 25 mg/ml

- Perhitungan NaCl 2,5% pada tikus 150 g = x 150 g

Volume yang diberikan = 3,75

Lampiran 17. Perhitungan volume pemberian EEBI dosis 50 mg/kg bb, 100 mg/kg bb dan 150 mg/kg bb

1. EEBI dosis 50 mg/kg bb

Mis: Berat badan tikus = 182,9 g

Dosis pemberian = = 9,14 mg

Konsentrasi ekstrak = 9,14 mg/ml

Volume pemberian = x 10 ml = 1,8 ml.

2. EEBI dosis 100 mg/kg bb

Mis: Berat badan tikus = 179,3 g

Dosis pemberian = = 17,93 mg

Konsentrasi ekstrak = 17,93 mg/ml

Volume pemberian = x 10 ml = 1,7 ml.

3. EEBI dosis 150 mg/kg bb

Mis: berat badan tikus = 189,2 g

Dosis pemberian = = 28,38 mg

Konsentrasi ekstrak = 28,38 mg/ml

Lampiran 18. Data pengukuran parameter profil hati

Perlakuan Nomor

Tikus

AST U/L

ALT U/L CMC Na 0,5 (Kontrol)

14 217 106

16 387 344

18 319 105

21 168 122

22 376 470

23 411 113

Rata-rata ± SD 313±99,32 210±157.83

EEBI 50 mg/kg BB

2 624 338

3 327 175

5 661 362

8 342 470

9 505 429

10 502 367

Rata-rata ± SD 493.5±138.54 356.83±101.55

EEBI 100 mg/kg BB

1 623 186

7 241 149

11 633 2331

12 351 333

13 587 245

17 1443 404

Rata-rata ± SD 646.33±422.01 258.33±94.66

EEBI 150 mg/kg BB

4 275 83

6 120 61

15 161 19

19 394 379

20 625 131

24 419 340

Lampiran 19. Data pengukuran parameter profil ginjal

Perlakuan Nomor

Tikus

Ureum mg/dL

Kreatinin mg/dL CMC Na 0,5 (Kontrol)

14 33.8 0.39

16 36.6 0.53

18 37.0 0.44

21 40.0 0.49

22 37.4 0.46

23 33.6 0.57

Rata-rata ± SD 36.4±2.41 0,48±0.06

EEBI 50 mg/kg BB

2 40.7 0.55

3 39.6 0.38

5 38.2 0.49

8 34.5 0.53

9 34.9 0.50

10 39.6 0.66

Rata-rata ± SD 37.92±2.62 0.52±0.09

EEBI 100 mg/kg BB

1 35.4 0.45

7 35.4 0.46

11 34.0 0.58

12 38.6 0.88

13 36.1 0.68

17 37.7 0.65

Rata-rata ± SD 36.2±1.68 0.62±0.16

EEBI 150 mg/kg BB

4 35.4 0.59

6 35.1 0.94

15 28.2 0.65

19 39.8 0.39

20 35.0 0.66

24 33.2 0.59

Lampiran 20. Data pengukuran parameter profil lipid

Perlakuan Nomor Tikus Total Kolesterol mg/dL Trigliserida mg/dL HDL mg/dL

LDL mg/dL VLDL mg/dL.

CMC Na 0,5 (Kontrol)

14 221 63 37 145.40 12.6 16 383 165 66 284 33 18 233 115.0 43 167 23 21 311 135.5 62 221.90 27.1 22 280 92.8 51 210.44 18.56 23 299 84.0 59 223.20 16.8 Rata-rata ±

SD

287.83±58.7 4

109.22±37.09 53±11.36 208.66±48.5 9

21.84±7.42

EEBI 50 mg/kg BB

2 188 79.6 48 124.08 15.92 3 220 108.3 79 119.34 21.66 5 211 106.5 53 136.70 21.3 8 215 58.4 57 144.92 11.68 9 215 114.4 61 131.12 22.88 10 220 176.6 106 78.68 35.32 Rata-rata ±

SD

211.5±12.01 107.3±40.03 67.33±21. 71 122.47±23.2 9 21.46±8.01 EEBI 100 mg/kg BB

1 176 104.1 73 82.18 20.82 7 169 38.9 61 100.22 7.78 11 184 195.3 82 62.40 39.6 12 169 117.5 47 98.50 23.5 13 186 81.6 104 65.68 16.32 17 171 85.9 62 91.82 17.18 Rata-rata ±

SD

175.83±7.57 103.88±52.13 71.5±19.8 5

83.47±16.36 20.87±10.62

EEBI 150 mg/kg BB

4 141 113.3 71 47.34 22.66 6 169 118.2 143 2.36 23,64 15 129 21.1 57 67.78 4.22 19 129 66.3 43 72.74 13.26 20 146 74.1 73 58.18 14.82 24 150 102.7 115 14.46 20.54 Rata-rata±SD 144±14.99 82.62±36.70 83.66±37.

79

Lampiran 21. Data pengukuran parameter profil gula darah

Perlakuan Nomor

Tikus

Glukosa mg/dL CMC Na 0,5 (Kontrol)

14 147

16 169

18 151

21 166

22 158

23 160

Rata-rata ± SD 158.50±8.45

EEBI 50 mg/kg BB

2 140

3 147

5 140

8 144

9 144

10 147

Rata-rata ± SD 143.67±3.14

EEBI 100 mg/kg BB

1 137

7 135

11 137

12 134

13 137

17 136

Rata-rata ± SD 136±1.26

EEBI 150 mg/kg BB

4 124

6 134

15 116

19 110

20 124

24 130

Lampiran 23. Hasil analisis statistik

Descriptives

N Mean Std. Dev S. Error

95% Confidence Interval for Mean

Min Max

Low Bound Up Bound

AST Kontrol CMC Na 0,5% 6 313,0000 99,32371 40,54874 208,7662 417,2338 168,00 411,00

EEBI 50 mg/kg BB 6 493,5000 138,53916 56,55838 348,1121 638,8879 327,00 661,00

EEBI 100 mg/kg BB 6 646,3333 422,00411 172,28246 203,4672 1089,1995 241,00 1443,00

EEBI 150 mg/kg BB 6 332,3333 186,91995 76,30975 136,1729 528,4938 120,00 625,00

Total 24 446,2917 267,71294 54,64667 333,2464 559,3369 120,00 1443,00

ALT Kontrol CMC Na 0,5% 6 210,0000 157,82902 64,43343 44,3686 375,6314 105,00 470,00

EEBI 50 mg/kg BB 6 356,8333 101,55081 41,45794 250,2623 463,4044 175,00 470,00

EEBI 100 mg/kg BB 6 258,3333 94,65657 38,64338 158,9974 357,6693 149,00 404,00

EEBI 150 mg/kg BB 6 168,8333 152,54169 62,27488 8,7506 328,9160 19,00 379,00

Total 24 248,5000 140,68590 28,71739 189,0936 307,9064 19,00 470,00

UREU M

Kontrol CMC Na 0,5% 6 36,4000 2,40666 ,98251 33,8744 38,9256 33,60 40,00

EEBI 50 mg/kg BB 6 37,9167 2,61795 1,06877 35,1693 40,6640 34,50 40,70

EEBI 100 mg/kg BB 6 36,2000 1,68167 ,68654 34,4352 37,9648 34,00 38,60

EEBI 150 mg/kg BB 6 34,4500 3,76497 1,53704 30,4989 38,4011 28,20 39,80

Total 24 36,2417 2,83225 ,57813 35,0457 37,4376 28,20 40,70

KREAT ININ

Kontrol CMC Na 0,5% 6 ,4800 ,06450 ,02633 ,4123 ,5477 ,39 ,57

EEBI 50 mg/kg BB 6 ,5183 ,09109 ,03719 ,4227 ,6139 ,38 ,66

EEBI 100 mg/kg BB 6 ,6167 ,16008 ,06535 ,4487 ,7847 ,45 ,88

EEBI 150 mg/kg BB 6 ,6367 ,17773 ,07256 ,4502 ,8232 ,39 ,94

Total 24 ,5629 ,14011 ,02860 ,5038 ,6221 ,38 ,94

TK Kontrol CMC Na 0,5% 6 287,8333 58,74152 23,98113 226,1879 349,4788 221,00 383,00

EEBI 50 mg/kg BB 6 211,5000 12,01249 4,90408 198,8937 224,1063 188,00 220,00

EEBI 100 mg/kg BB 6 175,8333 7,57408 3,09210 167,8848 183,7818 169,00 186,00

EEBI 150 mg/kg BB 6 144,0000 14,99333 6,12100 128,2655 159,7345 129,00 169,00

Total 24 204,7917 61,93824 12,64309 178,6374 230,9459 129,00 383,00

TG Kontrol CMC Na 0,5% 6 109,2167 37,08749 15,14090 70,2957 148,1376 63,00 165,00

EEBI 50 mg/kg BB 6 107,3000 40,03259 16,34324 65,2884 149,3116 58,40 176,60

EEBI 100 mg/kg BB 6 103,8833 52,12533 21,28008 49,1812 158,5855 38,90 195,30

EEBI 150 mg/kg BB 6 82,6167 36,69891 14,98227 44,1035 121,1298 21,10 118,20

Total 24 100,7542 40,60899 8,28928 83,6065 117,9018 21,10 195,30

HDL Kontrol CMC Na 0,5% 6 53,0000 11,36662 4,64040 41,0715 64,9285 37,00 66,00

EEBI 100 mg/kg BB 6 71,5000 19,84691 8,10247 50,6719 92,3281 47,00 104,00

EEBI 150 mg/kg BB 6 83,6667 37,79242 15,42869 44,0060 123,3274 43,00 143,00

Total 24 68,8750 25,53312 5,21193 58,0933 79,6567 37,00 143,00

LDL Kontrol CMC Na 0,5% 6 208,6567 48,58678 19,83547 157,6680 259,6454 145,40 284,00

EEBI 50 mg/kg BB 6 122,4733 23,28635 9,50661 98,0358 146,9109 78,68 144,92

EEBI 100 mg/kg BB 6 83,4667 16,36019 6,67902 66,2977 100,6356 62,40 100,22

EEBI 150 mg/kg BB 6 43,8100 29,01720 11,84622 13,3583 74,2617 2,36 72,74

Total 24 114,6017 68,96686 14,07780 85,4795 143,7238 2,36 284,00

VLDL Kontrol CMC Na 0,5% 6 21,8433 7,41750 3,02818 14,0591 29,6275 12,60 33,00

EEBI 50 mg/kg BB 6 21,4600 8,00652 3,26865 13,0577 29,8623 11,68 35,32

EEBI 100 mg/kg BB 6 20,8667 10,61507 4,33359 9,7268 32,0065 7,78 39,60

EEBI 150 mg/kg BB 6 16,5233 7,33978 2,99645 8,8207 24,2260 4,22 23,64

Total 24 20,1733 8,17702 1,66913 16,7205 23,6262 4,22 39,60

GLUKO SA

Kontrol CMC Na 0,5% 6 158,5000 8,45577 3,45205 149,6262 167,3738 147,00 169,00

EEBI 50 mg/kg BB 6 143,6667 3,14113 1,28236 140,3703 146,9631 140,00 147,00

EEBI 100 mg/kg BB 6 136,0000 1,26491 ,51640 134,6726 137,3274 134,00 137,00

EEBI 150 mg/kg BB 6 124,6667 9,93311 4,05518 114,2425 135,0908 110,00 134,00

Tests of Normality

Kelompok Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk Statistic df Sig. Statistic df Sig.

AST

dimens ion1

Kontrol ,237 6 ,200* ,886 6 ,295 EEBI 50 ,196 6 ,200* ,902 6 ,385 EEBI 100 ,346 6 ,124 ,821 6 ,091

EEBI 150 ,155 6 ,200* ,951 6 ,749 ALT

dimens ion1

Kontrol ,378 6 ,080 ,734 6 ,014 EEBI 50 ,260 6 ,200* ,902 6 ,386 EEBI 100 ,223 6 ,200* ,950 6 ,739 EEBI 150 ,265 6 ,200* ,848 6 ,150 ureum

dimens ion1

Kontrol ,200 6 ,200* ,920 6 ,503 EEBI 50 ,240 6 ,200* ,860 6 ,190 EEBI 100 ,190 6 ,200* ,950 6 ,740 EEBI 150 ,234 6 ,200* ,922 6 ,522 kreatini

n

dimens ion1

Kontrol ,122 6 ,200* ,992 6 ,994 EEBI 50 ,211 6 ,200* ,960 6 ,817 EEBI 100 ,180 6 ,200* ,926 6 ,548 EEBI 150 ,281 6 ,150 ,907 6 ,420 total_k

olester

ol dimens ion1

Kontrol ,180 6 ,200* ,946 6 ,705 EEBI 50 ,317 6 ,060 ,740 6 ,016 EEBI 100 ,238 6 ,200* ,847 6 ,148 EEBI 150 ,178 6 ,200* ,914 6 ,464 trigliser

ida

dimens ion1

Kontrol ,171 6 ,200* ,978 6 ,939 EEBI 50 ,263 6 ,200* ,921 6 ,516 EEBI 100 ,230 6 ,200* ,927 6 ,560 EEBI 150 ,208 6 ,200* ,907 6 ,417 HDL

dimens ion1

Kontrol ,201 6 ,200* ,943 6 ,686 EEBI 50 ,281 6 ,149 ,857 6 ,179 EEBI 100 ,184 6 ,200* ,961 6 ,831 EEBI 150 ,278 6 ,163 ,913 6 ,458 LDL

dimens ion1

Kontrol ,216 6 ,200* ,950 6 ,742 EEBI 50 ,280 6 ,155 ,853 6 ,166 EEBI 100 ,195 6 ,200* ,883 6 ,284 EEBI 150 ,215 6 ,200* ,889 6 ,313 VLDL

dimens ion1

Kontrol ,171 6 ,200* ,978 6 ,939 EEBI 50 ,263 6 ,200* ,921 6 ,516 EEBI 100 ,235 6 ,200* ,922 6 ,523

EEBI 150 ,208 6 ,200* ,907 6 ,417 glukosa

dimens ion1

Kontrol ,146 6 ,200* ,961 6 ,825 EEBI 50 ,212 6 ,200* ,847 6 ,150 EEBI 100 ,285 6 ,138 ,831 6 ,110

ANOVA

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

AST Between Groups 437990,792 3 145996,931 2,412 ,097

Within Groups 1210424,167 20 60521,208

Total 1648414,958 23

ALT Between Groups 117971,000 3 39323,667 2,332 ,105 Within Groups 337257,000 20 16862,850

Total 455228,000 23

UREUM Between Groups 36,255 3 12,085 1,630 ,214 Within Groups 148,243 20 7,412

Total 184,498 23

KREATININ Between Groups ,103 3 ,034 1,974 ,150 Within Groups ,348 20 ,017

Total ,451 23

T.KOLESTER OL

Between Groups 68850,792 3 22950,264 23,678 ,000 Within Groups 19385,167 20 969,258

Total 88235,958 23 TRIGLISERID

A

Between Groups 2719,335 3 906,445 ,515 ,677 Within Groups 35209,745 20 1760,487

Total 37929,080 23

HDL Between Groups 2880,458 3 960,153 1,585 ,224 Within Groups 12114,167 20 605,708

Total 14994,625 23

LDL Between Groups 89334,927 3 29778,309 29,685 ,000 Within Groups 20062,915 20 1003,146

Total 109397,842 23

VLDL Between Groups 109,486 3 36,495 ,511 ,679 Within Groups 1428,379 20 71,419

Total 1537,865 23

GLUKOSA Between Groups 3628,792 3 1209,597 26,638 ,000

Within Groups 908,167 20 45,408

Homogeneous Subsets AST

Perlakuan

N

Subset for alpha = 0.05 1

Tukey HSDa Kontrol CMC Na 0,5% 6 313,0000

EEBI 150 mg/kg BB 6 332,3333

EEBI 50 mg/kg BB 6 493,5000

EEBI 100 mg/kg BB 6 646,3333

Sig. ,121

ALT Perlakuan

N

Subset for alpha = 0.05 1

Tukey HSDa EEBI 150 mg/kg BB 6 168,8333

Kontrol CMC Na 0,5% 6 210,0000

EEBI 100 mg/kg BB 6 258,3333

EEBI 50 mg/kg BB 6 356,8333

Sig. ,089

UREUM Perlakuan

N

Subset for alpha = 0.05 1

Tukey HSDa EEBI 150 mg/kg BB 6 34,4500

EEBI 100 mg/kg BB 6 36,2000

Kontrol CMC Na 0,5% 6 36,4000

EEBI 50 mg/kg BB 6 37,9167

Sig. ,156

KREATININ Perlakuan

N

Subset for alpha = 0.05 1

Tukey HSDa Kontrol CMC Na 0,5% 6 ,4800

EEBI 50 mg/kg BB 6 ,5183

EEBI 100 mg/kg BB 6 ,6167

EEBI 150 mg/kg BB 6 ,6367

KREATININ Perlakuan

N

Subset for alpha = 0.05 1

Tukey HSDa Kontrol CMC Na 0,5% 6 ,4800

EEBI 50 mg/kg BB 6 ,5183

EEBI 100 mg/kg BB 6 ,6167

EEBI 150 mg/kg BB 6 ,6367

Sig. ,202

TOTAL KOLESTEROL Perlakuan

N

Subset for alpha = 0.05

1 2 3

Tukey HSDa EEBI 150 mg/kg BB 6 144,0000

EEBI 100 mg/kg BB 6 175,8333 175,8333

EEBI 50 mg/kg BB 6 211,5000

Kontrol CMC Na 0,5% 6 287,8333

Sig. ,316 ,227 1,000

TRIGLISERIDA Perlakuan

N

Subset for alpha = 0.05 1

Tukey HSDa EEBI 150 mg/kg BB 6 82,6167

EEBI 100 mg/kg BB 6 103,8833

EEBI 50 mg/kg BB 6 107,3000

Kontrol CMC Na 0,5% 6 109,2167

Sig. ,695

HDL Perlakuan

N

Subset for alpha = 0.05 1

Tukey HSDa Kontrol CMC Na 0,5% 6 53,0000

EEBI 50 mg/kg BB 6 67,3333

EEBI 100 mg/kg BB 6 71,5000

EEBI 150 mg/kg BB 6 83,6667

LDL Perlakuan

N

Subset for alpha = 0.05

1 2 3

Tukey HSDa EEBI 150 mg/kg BB 6 43,8100

EEBI 100 mg/kg BB 6 83,4667 83,4667

EEBI 50 mg/kg BB 6 122,4733

Kontrol CMC Na 0,5% 6 208,6567

Sig. ,166 ,177 1,000

VLDL Perlakuan

N

Subset for alpha = 0.05 1

Tukey HSDa EEBI 150 mg/kg BB 6 16,5233

EEBI 100 mg/kg BB 6 20,8667

EEBI 50 mg/kg BB 6 21,4600

Kontrol CMC Na 0,5% 6 21,8433

Sig. ,699

GLUKOSA Perlakuan

N

Subset for alpha = 0.05

1 2 3

Tukey HSDa EEBI 150 mg/kg BB 6 124,6667

EEBI 100 mg/kg BB 6 136,0000

EEBI 50 mg/kg BB 6 143,6667

Kontrol CMC Na 0,5% 6 158,5000

DAFTAR PUSTAKA

Abbate, S.L., dan Brunzell J.D. ( 1990). Pathophysiology of hyperlipidemia in diabetes mellitus. J Cardiovasc Pharmacol. 16 (9) :1.

Almatsier, S. ( 2009). Prinsip Dasar Ilmu Gizi. Cetakan VII. Jakarta: penerbit PT.Gramedia Pustaka Utama. Halaman 51-69.

Aminunsyah, D. (2014). Efek Ekstrak Etanol Buah Inggir-Inggir (Solanum

sanitwongsei Craib.)Terhadap Penurunan Tekanan Darah Tikus Wistar

Normotensi dan Hipertensi. Skripsi. Medan: Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

Astrian, R.T. (2009). Pengaruh antioksidan polifenol terhadap kadar glukosa darah dan insulin mencit jantan yang dikondisikan diabetes mellitus.

Skripsi. Jawa Barat: Institut Teknologi Bandung.

Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan. (2013). Riset Kesehatan Dasar. Jakarta: Kementerian Kesehatan RI. Halaman 88-90.

Barret, K., Brooks, H., Boitano, S., dan Barman, S. (2010). Ganong’s Review of

Medical Physiology. Edisi XXII. New York: McGraw Hill Companies,

Inc. Halaman 479, 481-482.

Brown, B.G., dan Schaefer, J. (2003). Aneurysm dan Aortic Dissection. The

Merck Manual of Medical Information. USA: Merck Co. 2. Halaman

204-208.

Depkes RI. (2006). Pharmaceutical Care Untuk Penyakit Hipertensi. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 143-157.

Dipiro, T.J., Talbert, L.R., Yee, C.G., Matzke, R.G., Wells, G.B., dan Posey, M.L. (2008). Pharmacotherapy A Pathophysiologic Approach. New York: Mc Graw Hills Company. Halaman 141-142.

Ditjen POM RI. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi III. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 7, 9, 744, 748.

Ditjen POM RI1

Ditjen POM RI

. (1995). Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 266.

2

Dominiczak, M.H. (2005). Lipids dan Lipoproteins. Di dalam Medical

Biochemistry. Editors: John, W., Baynes, M., dan Dominiczak, H. Elsevier

Mosby. Philadelphia, London, New York, Oxford, Sydney, Toronto2: 225-244.

. (1995). Materia Medika Indonesia. Jilid VI. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 300-306, 321, 325, 333-337.

Donatis, I.O. (2001). Toksikologi Dasar. Yogyakarta: Lab Farmakologi dan Toksikologi Fakultas Farmasi UGM. Halaman 30-45.

Dufour, R.D. (2000). Laboratory Guidelines for Screening, Diagnosis, and Monitoring of Hepatic Injury. Journal The National Academy of Clinical Biochemistry :12.

Elstein, M. (2005). Cholesterol, Low density Lipoprotein (LDL), High density

Lipoprotein (HDL), Triglycerides and Apoproteins A-1 and B.You have

the power Australia: Aliart. Halaman 238.

Ernawati., dan Bintari, T. (2015). Acute Toxicity Of Ethanolic Extract of Solanum

sanitwongsei Craib Fruits on Mice. Research PharmTech. 8:642-647.

Fabellar, A. (1998). Some Important Philippine Plants With Therapeutic Value (Diabetes). Research Information Series on Ecosystems. 3(10): 15-16. Fridewald, N.T., Levy, R.I., dan Frieddericson. (2001). Estimation Of The

Concentration Of Low Density Lipoprotein Cholesterol Plasma Without

Use The Prepagative Ultracentrifugation. Clinical Chemistry 1972:18:

499-502.

Gad, S.C. (1990). Model selection in toxicology: Principles dan practice. J. Am. Coll. Toxicol. Halaman 291-302.

Gaze, D.C. (2007). The Role of Existing and Novel Cardiac Biomarkers for Cardioprotection. Curr Opin Invest Drugs. 8(9): 711 – 712.

Goldberg, I.J. ( 2001). Diabetic dyslipidemia: causes and consequences. JCE & M.86 (3): 965-971.

Goldman, R., dan Klatz, R. (2007). The New Anti-Aging Revolution. Malaysia: PrintmateSdn. Bhd: 19-25.

Gray, H.H., Dawkins, M.J. Morgan., dan A.I Simpson. (2005). Lecture Notes Kardiologi. Jakarta: Penerbit Erlangga.

Guyton, A.C. (1993). Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Edisi ketujuh. Jakarta: EGC Kedokteran. Halaman 288-339.

Guyton, A.C., dan Hall, J.E. (2007). Keseimbangan Diet; Aturan Pemberian

Makanan; Obesitas dan Kelaparan; Vitamin dan Mineral. Buku Ajar

Fisiologi Kedokteran. Edisi XI. Terjemahan Irawati, et al. Jakarta. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Halaman 916-925.

Hartoyo, A., Dahrulsyah, N,. Sripalupi., dan Nugroho, P. (2008). Pengaruh Fraksi Karbohidrat Kacang Komak (Lablab Purpureus (L) Sweet). Jurnal

Hayashi, T., Maruyama, H., Kasai. R., Hattori, K., Takasuga, S., Hazeki, O., Yamasaki, K., dan Tanaka, T. (2002). Ellagitannins from Lagerstroemia speciosa as activators of glucose transport in fat cells. Planta Med.

68(2):173-5.

Herwiyarirasanta, B.A., dan Eduardus. (2010). Effect of Black Soybean Extract Supplementation in Low Density Lipoprotein Level of Rats (Rattus norvegicus) With High Fat Diet. Science Article. Universitas Airlangga. Surabaya.

Husadha, Y. (1996). Fisiologi dan Pemeriksaan Hepar. Dalam: Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam. Jilid I. Edisi III. Jakarta: Balai Penerbit FKUI. Halaman 224 – 226.

Kerato, M., Yamaguchi, K., Takei, S, Kino, T., dan Yazawa, K. (2006). Inhibitory effects of Pasuchaca (Geranium dielsianum) extract on a glukosidase in Mouse. Biosci. Biotechnol Biochem. 70:1482-1484.

Kinjo, J., Okawa, M., dan Udayama, M. (1999). Hepatoprotective and Hepatotoxic Actions of Oleanolic Acid-Type Triterpenoidal Glucuronides on Rat Primary Hepatocyte Cultures. Pharmaceutical Society of Japan . 47(2). 290-292.

Kramer, J.A., Pettiet S.D., dan Steven, J.T. (2004). Overview of the application of transciption profiling using selected nephrotoxicant for toxicology assesment . Environmental Health Perspectives.12:460-464.

Iranloye, B.O., Ajayi, G.O., Morakinyo, A. dan Olajide, A.O. (2011). Hypotensive Effect of Solanum Macrocarpum Linn.Fruit Extract in Sprague-Dawley Rats. Nig. J. Nat. Prod. and Med. 1(15): 53-57.

Laboratory Technologist. (2010). Health Information. Canadian Institute for Health Information (CIHI). Canada.

Lailani, M., Edward, Z., dan Herman, B.R. (2013). Gambaran Tekanan Darah Tikus Wistar Jantan dan Betina Setelah Pemberian Diet Tinggi Garam.

Jurnal Kesehatan Andalas. 2(3): 151-157.

Lefever, K. J. (2007). Pedoman Pemeriksaan Laboratorium dan Diagnosis,

Edisi VI. Jakarta: EGC.

Loew, D., dan Kaszkin, M. (2002). Approching The Problem of Bioequivalence of Herbal Medicinal Products. Phythoter Recearch. 16. Halaman 705-711. Mahley, R.W., Weisgraber, K.H., dan Farese, R.V. (2003). Disorder of Lipid

Metabolism. In Williams Textbook of Endocrinology. Saunders,

Philadephia. 10. Halaman 1642-1680.

Malole dan Pramono CSU. (1989). Penggunaan Hewan-hewan Percobaan di

Marpaung, N. (2015) Uji Efek Antihiperurisemia Ekstrak Etanol Buah Inggir-Inggir (Solanum sanitwongsei Craib.) Pada Tikus Putih Jantan (Rattus

norvegicus L.). Skripsi. Medan: Fakultas Farmasi Universitas Sumatera

Utara.

Masharani. ( 2004). Diabetes Mellitus. In: Basic Clinical Endocrinology. San Francisco: Lange Medical Books/McGraw-Hill. 7:669.

Mayes, P.A., dan K.M. Botham. (2003). Cholesterol Synthesis, Transport dan

Excretion Harper’s Illustrated Biochemistry. Mc.Graw Hill. 26. Halaman

219-227.

McFarlane. (2005). Diabetes and hypertension. In : Johnstone M.T. dan Veves A. Diabetes and Cardiovascular Disease. New Jersey: Humana Press: 322.

Michael. (2013). Pengaruh Ekstrak Metanol Daun Kesum (Polygonum minus

Huds.) Terhadap Peningkatan Kadar Kreatinin dan Ureum Serum tikus putih falur wistar terinduksi Sisplatin. Skripsi. Pontianak: Fakultas Kedokteran Universitas Tanjungpura.

Movva, R., dan Rader, D.J. (2008). Laboratory assessment of HDL heterogeneity and function. Clin Chem.

Murray, R.K. (2009). Harper’s Illustrated Biochemistry. USA. Mac Graw Hill Company. 28. Halaman 101-130.

Neutel, J.M., dan Smith D.H. (2001). Lipids in the hypertension syndrome. In: Weber M. A. Hypertension Medicine. New Jersey: Humana Press Inc. Halaman 34-35.

Olivera, T., Ricardo, K.F.S., Almeida. M.R., Costa, M.R., dan Nagem, T.J. (2007). Hypolipidemic Effect of Flavonoids and Cholestyramine in Rats Tania. Latin American Journal of farmacy. 26 (3): 407-10.

Prihanto, Y. (2015). Aktivitas Antihipertensi Ekstrak Etanol Daun jambu mete pada tikus putih sebagai materi pembelajaran tingkat SMA kelas XI.

JUPEMASI-PBIO. 1(2): 242-247.

Prince, S.A., dan Wilson, L.M. (2005). Patofisiologi. Konsep Klinis Vol 2 Ed 6; Terjemahan Dari Pathophysiologhy. Clinical Concepts Of Desease

Processes. Alih Bahasa: Peter Anugrah. Jakarta: EGC. Halaman 1402.

Rader, D.J., dan Hobbs, H.H. (2005). In Harrison’s Principles Of Internal

Medicine. New York. McGraw-Hill. 16. Halaman 2286-2298.

Rahastuti, S., Tjahjani, S. dan Hartini, E. (2011). Efek Infusa Daun Salam (Syzgium polyanthum) terhadap Penurunan Kadar Kolesterol Total Darah Tikus Model Dislipidemia Galur Wistar. Jurnal Medika Planta. 4: 28-32.

Rahmadian, M. (2015). Telmisartan Menghambat peningkatan kadar TGF-B1 aorta tikus yang diinduksi NaCl 8%. Jurnal Sains Teknologi IV. Lembaga Penelitian dan Pengabdian Universitas Lampung. 4:579-588.

Ramdhani, R. (2008). Pengaruh ekstrak etanol daun (Muntingia calabura L). terhadap kadar glukosa darah mencit (Mus musculus L.) swiss webster jantan dewasa yang dikondisikan. Skripsi. Jawa Barat: Institut Teknologi Bandung.

Reaven. ( 1996). Hypertension and associated metabolic abnormalities: the role of insulin resistance and the sympathoadrenal system. The New

England Journal of Medicine. 334: 374-380.

Riskesdas. (2014). Laporan Nasional 2014.Indonesia. Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Departemen Kesehatan.

Sacher, L., dan Person, M. (2002). Tinjauan Klinis atas Hasil Pemeriksaan

Laboratorium. Edisi XI. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.

Halaman 369 – 370.

Sargowo, D. (2001). Peranan Kadar Trigliserida dan Lipoprotein sebagai faktor Resiko Penyakit Jantung Koroner (Studi Pendahuluan). Jurnal Saintika. Lembaga Penelitian Universitas Brawijaya Malang. 3(2).

Sawi dan Sleem, A.A. (2010). Flavonoids And Hepatoprotective Activity Of Leaves Of Senna Surattensis (Burm.f.) In CCL4 Induced Hepatoxicity In Rats. Australian Journal Of Basic And Applied Scrences. 4(6): 1326-1334 Scanlon, C.V., dan Sanders, T. (2007). Essentials of Anatomy and Physiology.

New Jersey: Davis Company. Halaman 307-312.

Sinaga, F.I.T. (2014). Uji Efek Diuretik Ekstrak Etanol Buah Inggir-Inggir

(Solanum sanitwongsei Craib.) Pada Tikus Putih Jantan. Skripsi. Medan:

Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

Siska, A., dan Arifin, H. (2011).The Effect of Multiple Fractions of Celery Root

(Apium graveolens L.) on Blood Pressure of Hypertension Rats. Jurnal

Bahan Alam Indonesia. Universitas Andalas.

Slamet, S. (1993). Peran Insulin dan Lipid pada Hipertensi. Majalah Kesehatan

Masyarakat Indonesia. 21:229.

Slamet, S. ( 2005). Kecenderungan Peningkatan Jumlah Penyandang Diabetes.

Penatalaksanaan Diabetes Melitus Terpadu. Jakarta: Balai Penerbit FK

UI. 1: 1-5.

Sowers, K. M. R., dan Sowers, J. R. (2001). Diabetes and hypertension. In: Weber M. A. Hypertension Medicine. New Jersey: Humana Press Inc. Halaman 376.

Thapa, B.R., dan Walia, A. (2007). Liver Function Tests and Their Interpretation.

Indian Journal of Pediatrics. 74(7): 665-667.

Thongpukdee, A., dan Thepsitar, C. (2010). Scanning Electron Microscopic Study on Hair Types as Taxonomic Character Thai Endemic Solanum. Journal

Of The Microscopy Society Of Thailand. 24(2): 73–77.

Tjay, T.H., dan Kirana, R. (2007). Obat-Obat Penting Khasiat, Penggunaan dan

Efek-Efek Sampingnya. Jakarta: Elex Media Komputindo.

Verges, B.L. (1999). Dyslipidemia in diabetes mellitus. Review of the main lipoprotein abnormalities and their consequences on the development of atherogenesis. Diabetes Metab. 25: 32-40.

Wahyudi, A. (2009). Metabolisme Kolesterol Hati: Khasit Ramuan Jati Belanda

(Guazuma ulmifolia) dalam Mengatur Konsentrasi Kolesterol Selular.

Tesis. Bogor: Institut Pertanian Bogor.

Wastuti, S. (2015). The cytotoxic test dan apoptic of Solanum sanitwongsei Craib against Hela cells. Research Pharmtech. 7:16-21.

Widyaningrum, H. (2011). Kitab Tanaman Obat Nusantara. Yogyakarta: Medpress. Halaman 528.

Wilmana, P.F. (1995). Analgesik-Antipiretik, Analgesik Anti-inflamasi Nonsteroid

dan Obat Pirai. Dalam: Farmakologi dan Terapi. Editor: Sulistia Gan

Gunawan. Edisi IV. Jakarta: Bagian Farmakologi FKUI. Halaman 221. Witri, A.W. (2007). Pemberian Perasan Buah Mengkudu (Morinda citrifolia)

Terhadap kadar SGOT dan SGPT pada tikus putih Diet Tinggi Lemak.

Jurnal Veteriner. Universitas Airlangga.

World Health Organization. (2014). A Global Brief on Cardiovascular.WHO. Wulandari, T.M., dan Sihanti, L. (2007). Pengaruh Ekstrak Daun

SambilotoTerhadap struktur Mikroanatomi Hepar dan Kadar Glutamat Piruvat Transaminase serum mencit yang terpapar Diazinon. UNS Surakarta: Jurnal Bioteknologi. ISSN: 0216-6887. 4(2):53-58.

Yogiantoro, M. (2006). Hipertensi Esensial. Buku Ajar Penyakit Dalam.

BAB III

METODE PENELITIAN

Penelitian ini menggunakan metode eksperimental yaitu mengetahui pengaruh variabel bebas terhadap variabel terikat dan parameter dengan tahapan penelitian sebagai berikut: penyiapan hewan percobaan yaitu 24 ekor tikus jantan dan di aklimatisasi selama 14 hari, penginduksian 24 tikus jantan dengan NaCl 2,5 % metilprednisolon selama 14 hari per oral, pembagian 4 kelompok perlakuan terhadap tikus jantan masing-masing kelompok terdiri dari 6 tikus jantan meliputi kelompok kontrol negatif CMC Na 0,5%, EEBI 50, 100 dan 150 mg/kg BB, pemberian CMC Na 0,5% dan suspensi ekstrak etanol buah inggir-inggir (EEBI) dosis 50 mg/kg BB, 100 mg/kg BB, 150 mg/kg BB selama 7 hari per oral, pengambilan serum darah tikus jantan dan pengujian parameter biokimia terdiri dari; ALT, AST, ureum, kreatinin, total kolesterol, trigliserida, HDL, LDL, VLDL dan glukosa, kemudian dilakukan analisis data. Data hasil pengukuran aktivitas biokimia serum darah tikus dianalisis menggunakan one way ANOVA yang dilanjutkan uji Post Hoc Tukey HSD dengan program SPSS versi 17.0.

3.1 Alat dan bahan 3.1.1 Alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi alat-alat gelas laboratorium, alat-alat bedah laboratorium, alat cek glukosa dan kolesterol Easy

Touch, botol, batang pengaduk, cawan porselen, mortir dan stamfer, neraca

analitis (Boeco), timbangan tikus (Presica), spatula, sudip, pipet tetes, jarum suntik 1ml dan 3ml, oral sonde, restainer tikus.

3.1.2 Bahan

Bahan tumbuhan yang digunakan pada penelitian ini adalah ekstrak etanol buah inggir-inggir (Solanum sanitwongsei Craib.). Bahan kimia yang digunakan adalah CMC-Na (Merck), Natrium Klorida (Merck), aquades, tablet metilprednisolon (Dexa Medica).

3.2 Penyiapan sampel

3.3.1 Pengambilan dan pengolahan sampel

Pengambilan dan pengolahan sampel telah dilakukan oleh Novia M. Marpaung (2016). Pada penelitian ini digunakan tumbuhan yang sama sehingga pengambilan dan pengolahan sampel tidak dilakukan kembali. Pengambilan sampel dilakukan secara purposif tanpa membandingkan dengan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Sampel diperoleh dari Desa Amborgang, Kecamatan Porsea, Kabupaten Toba Samosir, Sumatera Utara.

3.3 Hewan percobaan

Hewan percobaan yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus putih jantan dengan berat badan 150-230 gram sebanyak 24 ekor dengan kondisi sehat. Hewan diaklimatisasi selama 2 minggu dengan tujuan untuk menyeragamkan makanan dan hidupnya dengan kondisi yang serba sama sehingga dianggap memenuhi syarat penelitian.

3.4 Penyiapan bahan uji

Penyiapan bahan-bahan meliputi penyiapan suspensi CMC Na 0,5%, larutan NaCl 2,5%, suspensi metilprednisolon tablet, suspensi ekstrak etanol buah inggir-inggir.

3.4.1 Pembuatan suspensi CMC-Na 0,5% (b/v)

Sebanyak 0,5 gram CMC Na ditaburkan ke dalam lumpang berisi air panas sebanyak 10 ml, lalu ditutup dan dibiarkan selama 15 menit hingga diperoleh massa yang transparan, kemudian digerus dan diencerkan dengan air suling hingga 100 ml (Ditjen POM RI, 1979).

3.4.2 Pembuatan larutan NaCl 2,5% (b/v)

Sebanyak 2,5 gram NaCl dimasukkan ke dalam lumpang, lalu digerus hingga homogen. Tambahkan sebagian air suling sambil gerus hingga NaCl larut. Masukkan larutan ke dalam labu tentukur 100 ml, tambahkan air suling sampai garis tanda.

3.4.3 Pembuatan suspensi metilprednisolon tablet

Timbang metilprednisolon sebanyak 10 mg (yang telah disetarakan dengan berat tablet). Masukkan ke dalam lumpang, lalu digerus hingga homogen. Ditambahkan pelan-pelan sebagian suspensi CMC Na kedalam lumpang, gerus hingga merata. Masukkan suspensi ke dalam labu entukur 10 ml, cukupkan kembali dengan suspensi CMC Na sampai garis tanda.

3.4.4 Pembuatan suspensi ekstrak etanol buah inggir-inggir

Timbang sebanyak 0,05 gram EEBI untuk dosis 50 mg/kg BB, 0,1 gram EEBI untuk dosis 100 mg/kg BB, dan 0,15 gram EEBI untuk dosis 150 mg/kg BB dengan gelas arloji masing masing dosis. Kemudian masukkan ke dalam lumpang. Gerus hingga homogen. Lalu tambahkan suspensi CMC Na. Gerus kembali

hingga merata. Tuangkan suspensi yang terbentuk ke dalam labu tentukur 10 ml. Tambahkan kembali suspensi CMC Na sampai garis tanda.

3.4.5 Perlakuan induksi

24 ekor tikus putih jantan dengan berat sekitar 150 – 230 gram yang telah diaklimatisasi, diinduksi dengan NaCl 2,5% dan metilprednisolon secara oral. Proses induksi dilakukan selama 14 hari.

3.4.6 Pemberian suspensi ekstrak etanol buah inggir-inggir

Sebanyak 24 ekor tikus putih jantan yang telah diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon selama 14 hari per oral dibagi menjadi 4 kelompok. tiap kelompok terdiri dari 6 ekor tikus putih jantan. Lalu diberikan perlakuan secara oral selama 7 hari. Hewan dikelompokkan sebagai berikut:

a. kelompok I: kontrol. hewan uji diberikan suspensi Na CMC 0,5% sekali ...sehari selama 7 hari berturut-turut diberikan secara oral.

b. kelompok II: hewan uji diberikan EEBI dosis 50 mg/kg BB sekali sehari ...selama 7 hari berturut-turut diberikan secara oral.

c. kelompok III: hewan uji diberikan EEBI dosis 100 mg/kg BB sekali sehari ...selama 7 hari berturut-turut diberikan secara oral.

d. kelompok IV: hewan uji diberikan EEBI dosis 150 mg/kg BB sekali sehari ...selama 7 hari berturut-turut diberikan secara oral.

3.5 Pemeriksaan faal hati 3.5.1 AST

Pengambilan darah dilakukan pada hari ke-22, 24 jam setelah pemberian Na CMC 0,5% dan EEBI dosis 50,100 dan 150 mg/kg BB. tikus didislokasi di leher kemudian dibedah dan darah diambil menggunakan jarum suntik langsung

dari jantung tikus sebanyak 2 ml, setelah itu dimasukkan ke dalam microtube dan didiamkan ± 20 menit. Darah disentrifuge dengan kecepatan 3000 rpm selama 20 menit untuk mendapatkan serum darah tikus. Pemeriksaan fungsi hati dilakukan dengan menghitung kadar aktivitas AST yang dikerjakan oleh Laboratorium Kesehatan Daerah Provinsi Sumatera Utara.

3.5.2 ALT

Pengambilan darah dilakukan pada hari ke-22, 24 jam setelah pemberian Na CMC 0,5% dan EEBI dosis 50,100 dan 150 mg/kg BB. tikus didislokasi di leher kemudian dibedah dan darah diambil menggunakan jarum suntik langsung dari jantung tikus sebanyak 2 ml, setelah itu dimasukkan ke dalam microtube dan didiamkan ± 20 menit. Darah disentrifuge dengan kecepatan 3000 rpm selama 20 menit untuk mendapatkan serum darah tikus. Pemeriksaan fungsi hati dilakukan dengan menghitung kadar aktivitas ALT yang dikerjakan oleh Laboratorium Kesehatan Daerah Provinsi Sumatera Utara.

3.6 Pemeriksaan faal ginjal 3.6.1 Ureum dan kreatinin

Pengambilan darah dilakukan pada hari ke-22, 24 jam setelah pemberian Na CMC 0,5% dan EEBI dosis 50,100 dan 150 mg/kg BB. tikus didislokasi di leher kemudian dibedah dan darah diambil menggunakan jarum suntik langsung dari jantung tikus sebanyak 2 mL, setelah itu dimasukkan ke dalam microtube

dan didiamkan ± 20 menit. Darah disentrifuge dengan kecepatan 3000 rpm selama 20 menit untuk mendapatkan serum darah tikus. Pemeriksaan fungsi ginjal dilakukan dengan mengukur ureum dan kreatinin yang dikerjakan oleh Laboratorium Kesehatan Daerah Provinsi Sumatera Utara.

3.7 Pemeriksaan profil lipid

3.7.1 Total kolesterol, trigliserida, HDL, LDL dan VLDL

Pengambilan darah dilakukan pada hari ke-22, 24 jam setelah pemberian Na CMC 0,5% dan EEBI dosis 50,100 dan 150 mg/kg BB. Pemeriksaan Profil lipid dilakukan dengan menghitung total kolesterol dengan pengambilan darah pada vena ekor tikus lalu diperiksa menggunakan alat Easy Touch denga strip Kolesterol. LDL dan VLDL dihitung menggunakan rumus (Fridewald, et al., 2001) yaitu LDL = Total kolesterol – (HDL + 1/5 Trigliserida dan VLDL = Trigliserida/5, serum darah tikus dimasukkuan di mikrotube untuk pengukuran trigliserida dan HDL yang dikerjakan oleh Laboratorium Kesehatan Daerah Provinsi Sumatera Utara.

3.8 Pemeriksaan profil gula darah 3.8.1 Glukosa darah

Pengambilan darah dilakukan pada hari ke-22, 24 jam setelah pemberian Na CMC 0,5% dan EEBI dosis 50,100 dan 150 mg/kg BB. Kadar glukosa darah tikus percobaan dianalisis dengan metode biosensor glukose oksidase, menggunakan alat Easy Touch. Darah diambil melalui ujung ekor tikus yang sebelumnya dibersihkan dengan alkohol 70%, diurut perlahan-lahan kemudian ujung ekor ditusuk dengan jarum kecil (Kerato, et al., 2006). Darah yang keluar kemudian disentuhkan pada strip gluko meter. Kadar glukosa darah akan terbaca di layar Easy Touch setelah 11 detik dan kadar glukosa darah dinyatakan dalam

3.9 Analisis statistik

Data hasil penelitian dianalisis menggunakan program SPSS 17.0. Data hasil penelitian ditentukan homogenitas dan normalitasnya untuk menentukan analisis statistik yang digunakan. Data dianalisis menggunakan uji One Way

ANOVA untuk menentukan perbedaan rata-rata di antara kelompok dengan uji

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Bahan baku ekstrak

Pada penelitiaan ini digunakan ekstrak etanol buah inggir-inggir yang sama dengan esktrak yang digunakan Novia M. Marpaung (2016) pada penelitian yang berjudul uji efek antihiperurisemia ekstrak etanol buah inggir-inggir (Solanum sanitwongsei Craib.) pada tikus putih jantan (Rattus norvegicus L.) Oleh karena itu, identifikasi, skrining fitokimia sampel dan karakterisasi tidak dilakukan lagi. Hasil identifikasi tumbuhan yang dilakukan di Pusat Penelitian dan Pengembangan LIPI Bogor, menunjukkan bahwa tumbuhan yang diteliti adalah

Solanum sanitwongsei Craib.

EEBI disimpan di dalam lemari pendingin dalam wadah tertutup rapat sehingga EEBI terhindar dari kontaminasi zat-zat asing. Penyimpanan di dalam lemari pendingin bertujuan untuk mencegah tumbuhnya jamur sehingga mencegah ekstrak agar tidak terkena sinar matahari langsung. Secara organoleptik, EEBI yang disimpan tidak ada ditumbuhi kapang dan jamur. Ekstrak etanol buah inggir-inggir yang digunakan berwarna hijau kekuningan, berbau khas dan rasa pahit.

4.2 Hasil Uji Parameter Biokimia. 4.2.1 Hasil Pengukuran AST dan ALT

Pengukuran aktivitas AST lakukan pada hari ke-22, 24 jam setelah pemberian Na CMC 0,5% dan EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB. Hasil pengukuran dapat dilihat secara rinci pada Gambar 4.1

Gambar 4.1 Grafik aktivitas AST tikus jantan yang diinduksi NaCl 2,5% dan metil prenisolon.

Hasil induksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon selama 14 hari secara oral menyebabkan mayoritas sel hepatosit mengalami degenerasi hidropik. Degenerasi hidropik yang terjadi disebabkan oleh hidrasi ion natrium akibat permeabilitas di dinding sel yang terganggu akibat mekanisme toksisitas, selain itu terjadi gangguan pada metabolisme energi didalam sel, terutama mekanisme transport aktif pada Na+ akibat hepatosit tidak mampu memompa ion natrium keluar sel. Jumlah ion natrium yang berlebih menyebabkan influks organel sitoplasma seperti retikulum endoplasma dapat diubah menjadi kantong-kantong berisi air (Price dan Wilson, 1984) dalam (Wulandari, dkk., 2007).

Nilai aktivitas AST pada kontrol negatif yaitu 313 U/L, dimana nilai aktivitas AST tikus jantan normal 70-400 U/L (Gad, 1990). Enzim AST ini dapat dijumpai juga di jantung, otot skelet, dan ginjal. Bila jaringan tersebut mengalami kerusakan akut maka kadarnya dalam serum meningkat. Berdasarkan pengamatan rata-rata aktivitas AST, terjadi penurunan kadar aktivitas AST setelah pemberian

EEBI 150 mg/kg BB bila dibandingkan dengan 2 kelompok dosis lainnya dengan nilai 332,33 U/L. Hasil pengujian statistika dengan analisa Tukey One Way

Anova menunjukkan bahwa EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB tidak memiliki

pengaruh secara signifikan terhadap penurunan aktivitas AST (p>0.05).

Penurunan AST dan ALT disebabkan oleh kandungan flavonoid dan saponin yang terdapat di dalam buah inggir-inggir. Flavonoid berperan sebagai antioksidan alami karena di dalam flavonoid terdapat kandungan kuersetin yang kerjanya untuk menghambat lipid peroksidase dengan cara memblok enzim xantin. Selain itu, dengan meningkatkan absorbsi dari vitamin C dapat melindungi mekanisme pertahanan antioksidan. Kandungan saponin dalam buah inggir-inggir kemungkinan juga akan berdampak pada penurunan kadar AST dan ALT (Sawi danSleem, 2010). Karena hal ini sejalan dengan hasil penelitian yang dilakukan (Kinjo, et al., 1999) yang menyebutkan kandungan yang terdapat pada saponin yaitu bisdesmosyl saponin yang didalamnya terdapat asam

oleanolic-glukoronat dan asam oleanolic-glucoside menunjukkan tingkat hepatoprotektor

yang efektif dengan ditandai dengan perbaikan hati yaitu penurunan kadar AST ALT.

Menurut (Dufour, 2000), bahwa hasil laboratorium pengukuran AST dan ALT dapat dipengaruhi beberapa hal yaitu :

a. Waktu pengambilan sampel darah

Pengambilan sampel yang paling baik adalah siang hari, sedangkan pada sore hari kadar AST dan ALT cenderung meningkat dan pada malam hari cenderung lebih rendah.

b. Spesimen penyimpanan

Sampel akan lebih stabil jika disimpan dalam lemari es tetapi tingkat kestabilan sampel hanya dapat bertahan 24 jam dan akan cenderung meningkat setelah 24 jam.

c. Hemolisis

Jika sampai terjadi hemolisis maka pengukuran sampel akan cenderung meningkat dan tergantung dari cara pengambilan sampel.

Pengukuran aktivitas ALT dilakukan pada hari ke-22, 24 jam setelah pemberian Na CMC 0,5% dan EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB. Hasil pengukuran dapat dilihat secara rinci pada Gambar 4.2

Gambar 4.2 Grafik aktivitas ALT tikus jantan yang diinduksi NaCl 2,5% dan ... metilprenisolon

Hasil induksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon selama 14 hari secara oral menyebabkan mayoritas sel hepatosit mengalami degenerasi hidropik. Degenerasi hidropik yang terjadi disebabkan oleh hidrasi ion natrium akibat permeabilitas di dinding sel yang terganggu akibat mekanisme toksisitas (Price dan Wilson, 1984) dalam (Wulandari, dkk., 2007). Akumulasi ion natrium mengakibatkan nilai

osmosis plasma sel meningkat, keadaan ini menyebabkan air disekitar hepatosit masuk ke dalam hepatosit sehingga terjadi pembengkakan sel dan organel sel. Bila kondisi ini terjadi maka akan mengakibatkan kerusakan struktur serta penurunan fungsi organel tersebut (Prihanto, 2015).

Nilai aktivitas ALT pada kelompok kontrol negatif yaitu 210 U/L, dimana nilai normal aktivitas ALT pada tikus jantan 25-200 U/L (Gad, 1990). Berdasarkan pengamatan rata-rata aktivitas ALT, terjadi penurunan kadar aktivitas ALT setelah pemberian EEBI 150 mg/kg BB dengan nilai 168,33 U/L. Hasil pengujian statistika dengan analisa Tukey One Way Anova menunjukkan bahwa EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB tidak memiliki pengaruh secara signifikan terhadap penurunan ALT (p>0,05).

4.2.2 Hasil Pengukuran Ureum dan Kreatinin

Pengukuran ureum dilakukan pada hari ke-22, 24 jam setelah pemberian Na CMC 0,5% dan EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB. Hasil pengukuran dapat dilihat secara rinci pada Gambar 4.3

Gambar 4.3 Grafik ureum tikus jantan yang diinduksi dengan NaCl 2,5% dan metilprednisolon

Hasil induksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon selama 14 hari secara oral menyebabkan kadar ureum pada kelompok kontrol negatif 36,4 mg/dL. Kadar ureum normal untuk tikus adalah 15-21 mg/dL (Malole dan Pramono, 1989). Kadar ureum dalam serum darah suatu individu hewan dapat dipengaruhi dua faktor. Pertama pengaruh patologis individu, contohnya para penderita gagal ginjal akut, maupun kronis, penderita gagal jantung dan individu yang mengalami kekurangan elektrolit dan cairan tubuh. Kedua, perlakuan pada hewan, contohnya pada pemberian pakan. Kenaikan kadar ureum dalam darah sebagai akibat dari kerusakan ginjal hanya apabila disertai hasil pemeriksaan urin dan diperkuat dengan tanda klinis yang mendukung penentuan diagnosa (Kramer, et al., 2004).

Rata-rata kadar ureum pada kelompok kontrol negatif sangat tinggi dikarenakan kelompok ini diberikan induksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon sehingga terjadi gagal ginjal akut mengakibatkan kadar ureum meningkat. Salah satu penyebab meningkatnya kadar ureum adalah radikal bebas. Radikal bebas merupakan mekanisme nefrotoksik dari NaCl, antioksidan dapat melindungi dari nefrotoksik radikal bebas dan penginduksi stress oksidatif dalam ginjal. Peningkatan radikal bebas akan menyebabkan terjadinya kematian sel. Hal ini akan menyebabkan penyumbatan sehingga kadar ureum tidak dapat dikeluarkan dengan baik (Michael, 2013).

Berdasarkan pengamatan rata-rata ureum, terjadi penurunan kadar ureum setelah pemberian EEBI 150 mg/kg BB bila dibandingkan dengan 2 kelompok dosis lainnya dengan nilai 35,45mg/dL. Hasil pengujian statistika dengan analisa

Tukey One Way Anova menunjukkan bahwa EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB

dalam menurunkan kadar ureum diduga berdasarkan aktivitas antioksidan. Seperti yang dipaparkan dalam hasil skrining fitokimia ekstrak etanol buah inggir-inggir mengandung flavonoid, alkaloid, polifenol, tanin, saponin dan triterpenoid. Senyawa flavonoid, polifenol dan tanin diduga kuat merupakan senyawa yang bertanggung jawab terhadap aktivitas antioksidan.

Pengukuran kreatinin dilakukan pada hari ke-22, 24 jam setelah pemberian Na CMC 0,5% dan EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB. Hasil pengukuran dapat dilihat secara rinci pada Gambar 4.4.

Gambar 4.4 Grafik kreatinin tikus jantan yang diinduksi NaCl 2,5% dan ... ...metilprednisolon.

Hasil induksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon selama 14 hari secara oral menyebabkan kadar kreatinin pada kelompok kontrol negatif 0,48 mg/dL. Kadar kreatinin normal untuk tikus adalah 0,2 – 0,8 mg/dL (Malole dan Pramono, 1989). Rata-rata kadar kreatinin pada kelompok kontrol negatif adalah 0,48 mg/dL yang berarti rata-rata kadar kreatinin pada kelompok ini masih dalam rentang normal. Buah inggir-inggir memiliki senyawa bioaktif antioksidan dan polifenol.

Kuersetin merupakan senyawa flavonoid yang terdapat pada buah inggir-inggir. Kuersetin secara signifikan dapat menghambat produksi TNF-α dan ekspresi gen. Ekstrak etanol buah inggir-inggir mengandung polifenol yang kemungkinan juga dapat menghambat produksi TNF-α pada sel tubulus sehingga tidak terjadi cedera dan kematian pada sel tubulus. Hal ini akan mengakibatkan kadar kreatinin tidak akan meningkat atau tetap pada kadar normal. Kreatinin merupakan metabolit kreatin yang di ekskresikan seluruhnya kedalam urin melalui filtrasi glomerulus. Peningkatan kadar kreatinin dalam darah dan jumlah kreatinin dalam urin dapat digunakan untuk memperkirakan laju filtrasi glomerulus (Kramer, et al., 2004).

Berdasarkan hasil rataan kadar kreatinin pada kelompok kontrol negatif 0,48 mg/dL dan meningkat setelah perlakuan EEBI 50 mg/kg BB menjadi 0,52 mg/dL. Begitu juga untuk kelompok EEBI 100 mg/kg BB dan EEBI 150 mg/kg BB mengalami kenaikan setelah perlakuan dengan nilai 0,62 mg/dL dan 0,64 mg/dL jadi dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol buah inggir-inggir tidak mampu menurunkan nilai kreatinin. Hasil pengujian statistika dengan analisa Tukey One

Way Anova menunjukkan bahwa EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB tidak

memiliki pengaruh secara signifikan terhadap penurunan kreatinin (p>0,05). 4.2.3 Hasil Pengukuran Total Kolesterol, Trigliserida, HDL, LDL dan VLDL

Pengukuran total kolesterol dilakukan pada hari ke-22, 24 jam setelah pemberian Na CMC 0,5% dan EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB. Hasil pengukuran dapat dilihat secara rinci pada Gambar 4.5

Gambar 4.5 Grafik total kolesterol tikus jantan yang diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon.

Hasil induksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon selama 14 hari secara oral menyebabkan nilai total kolesterol pada kelompok kontrol negatif 287 mg/dL. Tikus jantan memiliki kadar kolesterol total normal dengan nilai 90 -170 mg/dL (Gad, 1990). Dimana induksi NaCl menyebabkan sel hepatosit mengalami degenerasi parenkimatosa, degenerasi hidropik dan nekrosis. Kerusakan ini kemungkinan terjadi karena proses metabolisme yang tidak normal. Organ hati merupakan pusat biosintesis dan degradasi kolesterol tubuh, apabila proses metabolisme tidak berjalan normal maka meningkatnya laju biosintesis kolesterol dan menurunkan sekresi kolesterol melalui cairan empedu sehingga kolesterol meningkat. Salah satu fungsi hati adalah organ eksresi yang mengeluarkan cairan empedu kembali ke hepar sebelum disekresi, penumpukan atau peningkatan zat toksik dalam hati memungkinkan timbulnya efek toksik seperti degenerasi parenkimatosa, degenerasi hidropik, dan nekrosis pada hepar normal (Donatis IO, 2001).

Berdasarkan pengamatan kadar total kolesterol rata-rata, terjadi penurunan kadar total kolesterol setelah pemberian EEBI dosis 50mg/kg BB, 100 mg/kg BB dan 150 mg/kg BB bila dibandingkan terhadap kontrol negatif. Kelompok perlakuan yang terjadi penurunan paling optimal pada kelompok EEBI 150 mg/kg BB dengan nilai 144 mg/dL. Hasil pengujian statistika dengan analisa

Tukey One Way Anova menunjukkan bahwa EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB

memiliki pengaruh secara signifikan terhadap penuruan kadar kolesterol total (p<0.05). Oleh karena itu, EEBI 150 mg/kg BB memberikan efek penurunan kadar kolesterol total cukup optimal dibandingkan dengan kedua dosis lainnya.

Senyawa aktif yang diduga berperan dalam menurunkan total kolesterol darah adalah flavonoid. Flavonoid dan tanin dapat menghambat enzim HMG-CoA reduktase yang berperan mensintesis kolesterol. Terhambatnya HMG-CoA reduktase akan menurunkan sintesis kolesterol di hati sehingga menurunkan sintesis Apo B dan meningkatkan reseptor LDL pada permukaan hati. Kemudian kolesterol dalam darah dapat ditarik ke hati sehingga menurunkan kolesterol LDL dan VLDL. Selain itu tanin berefek menghambat enzim lipase pankreas sehingga penyerapan kolesterol oleh hati terhambat dan sekresi kolesterol melalui feses meningkat (Rahastuti, et al., 2011)

Tanin juga dapat menghambat enzim AcylCoA Cholesterol Acyl

Transferase (ACAT) yang berperan dalam esterifikasi kolesterol sehingga

menghambat kolesterol ester membentuk kilomikron dan VLDL. Menurunnya kadar Apo B menyebabkan pembentukan kilomikron, LDL dan VLDL terganggu yang menyebabkan trigliserida tidak terbentuk sehingga ukuran partikel LDL besar (Rahastuti, et al., 2011).

Kandungan alkaloid memiliki efek menghambat aktivitas enzim lipase, sehingga dapat menghambat pemecahan lemak menjadi molekul-molekul lemak yang lebih kecil. Hal ini mengakibatkan terjadinya pengurangan jumlah lemak yang dapat diabsorbsi sehingga konsetransi trigliserida dalam usus menurun yang menyebabkan peningkatan ukuran partikel LDL (Olivera, et al., 2007 dan Rahastuti, et al., 2011)

Pengukuran trigliserida dilakukan pada hari ke-22, 24 jam setelah pemberian Na CMC 0,5% dan EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB. Hasil pengukuran dapat dilihat secara rinci pada Gambar 4.6.

Gambar 4.6 Grafik trigliserida tikus jantan yang diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon.

Hasil induksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon selama 14 hari secara oral menyebabkan trigliserida tikus pada kelompok kontrol negatif 109,22 mg/dL. Kadar trigliserida tikus jantan normal adalah 60–160 mg/dL (Gad, 1990).

Berdasarkan pengamatan kadar trigliserida rata-rata, terjadi penurunan trigliserida setelah pemberian EEBI dengan tiga variasi dosis 50 mg/kg BB, 100 mg/kg BB dan 150 mg/kg BB. Hasil pengujian statistika dengan analisa

Tukey One Way Anova menunjukkan bahwa tidak terjadi pengaruh secara signifikan EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB (p>0.05) dalam menurunkan trigliserida, tetapi 150 mg/kg BB memberikan efek penurunan kadar trigliserida cukup optimal dibandingkan dengan kedua dosis lainnya dengan nilai 82,62 mg/dL.

Senyawa aktif yang diduga berperan dalam menurunkan trigliserida adalah tanin. Tanin juga dapat menghambat enzim AcylCoA Cholesterol Acyl Transferase

(ACAT) yang berperan dalam esterifikasi kolesterol sehingga menghambat penggabungan kolesterol ester membentuk kilomikron dan VLDL. Menurunnya kadar Apo B menyebabkan pembentukan kilomikron, LDL dan VLDL terganggu yang menyebabkan trigliserida tidak terbentuk sehingga ukuran partikel LDL besar (Rahastuti, et al., 2011).

Kandungan alkaloid memiliki efek menghambat aktivitas enzim lipase, sehingga dapat menghambat pemecahan lemak menjadi molekul-molekul lemak yang lebih kecil. Hal ini mengakibatkan terjadinya pengurangan jumlah lemak yang dapat diabsorbsi sehingga konsetransi trigliserida dalam usus menurun yang menyebabkan peningkatan ukuran partikel LDL (Olivera, et al., 2007 dan Rahastuti, et al., 2011)

Pengukuran HDL dilakukan pada hari ke-22, 24 jam setelah pemberian Na CMC 0,5% dan EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB. Hasil pengukuran dapat dilihat secara rinci pada Gambar 4.7

Gambar 4.7 Grafik HDL tikus jantan yang diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon.

Hasil induksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon selama 14 hari secara oral menyebabkan HDL tikus pada kelompok kontrol negatif 53 mg/dL. Kadar kolesterol HDL plasma darah tikus yang normal yaitu ≥35 mg/dL (Hartoyo dkk., 2008). Keadaan hiperkolesterolemia pada hewan terjadi jika kadar kolesterol total dalam darah melebihi normal. Peningkatan kadar LDL dan penurunan kadar HDL dikarenakan adanya aktivitas radikal bebas dari NaCl yang menyebabkan adanya kerusakan oksidatif pada beberapa jaringan. Kadar kolesterol yang tinggi dalam darah menyebabkan VLDL membentuk LDL, akibatnya LDL dalam darah meningkat membuat HDL tertekan dan tidak bisa membuang kelebihan kolesterol yang ada dalam darah, sehingga keadaan HDL menurun (Sargowo, 2001).

Berdasarkan pengamatan kadar HDL rata-rata, terjadi peningkatan HDL setelah pemberian EEBI dengan tiga variasi dosis 50 mg/kg BB, 100 mg/kg BB dan 150 mg/kg BB. Hasil pengujian statistika dengan analisa Tukey One Way

Anova menunjukkan bahwa tidak terjadi pengaruh secara signifikan EEBI dosis

BB memberikan efek peningkatan kadar HDL cukup optimal dibandingkan dengan kedua dosis lainnya dengan nilai 83,66 mg/dL.

Peningkatan HDL akan berpengaruh positif terhadap pencegahan terjadinya aterosklerosis, karena banyak penelitian yang membuktikan bahwa meningkatnya HDL akan menurunkan morbiditas penyakit jantung koroner. HDL mampu menyerap kolesterol bebas dari dinding pembuluh darah maupun dari jaringan kemudian dibawa ke hati dan diubah menjadi kolesterol ester dengan bantuan LCAT

(lecithin cholesterol acylTransferase) (Dominiczak, 2005).

Pengukuran LDL dilakukan pada hari ke-22, 24 jam setelah pemberian Na CMC 0,5% dan. Hasil pengukuran dapat dilihat secara rinci pada Gambar 4.8

Gambar 4.8 Grafik LDL tikus jantan yang diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon.

Hasil induksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon selama 14 hari secara oral menyebabkan LDL tikus pada kelompok kontrol negatif 208,66 mg/dL. Nilai normal LDL pada tikus jantan adalah 7-27,2 mg/dL (Herwiyarirasanta, 2010). Keadaan hiperkolesterolemia pada hewan terjadi jika kadar kolesterol total dalam darah melebihi normal. Peningkatan kadar LDL dikarenakan adanya aktivitas

radikal bebas dari NaCl yang menyebabkan adanya kerusakan oksidatif pada beberapa jaringan. Kadar kolesterol yang tinggi dalam darah menyebabkan VLDL membentuk LDL, akibatnya LDL dalam darah dalam darah meningkat membuat HDL tertekan dan tidak bisa membuang kelebihan kolesterol yang ada dalam darah, sehingga keadaan HDL menurun. Hiperkolesterol mengakibatkan adanya gangguan metabolisme lipoprotein, yang meliputi peningkatan kadar LDL serta penurunan HDL (Sargowo, 2001).

Setelah diterapi EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB selama 7 hari, terlihat adanya penurunan kadar LDL. Penurunan kadar LDL untuk kelompok EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB berturut-turut adalah 122,47 mg/dL, 83,47 mg/dL dan 43,81 mg/dL. Jadi pada penelitian ini, dapat dikatakan bahwa terapi EEBI dapat menurunkan kadar LDL. Hasil pengujian statistika dengan analisa

Tukey One Way Anova menunjukkan bahwa EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB

memiliki pengaruh secara signifikan terhadap penurunan kadar LDL (p<0.05). Penelitian ini menunjukkan bahwa terapi EEBI dengan dosis 150 mg/kg BB menunjukkan dosis yang paling baik untuk menurunkan kadar LDL karena ekstrak etanol buah inggir-inggir akan meningkatkan sekresi asam empedu yang akan meningkatkan metabolisme lemak, akibatnya kelebihan lemak akan dikeluarkan melalui usus besar dalam bentuk feses. Lemak yang dibuang akan menurunkan kadar kolesterol dalam darah, dan pembentukkan LDL juga tidak akan berlebih. Kerja antioksidan dalam ekstrak etanol buah inggir-inggir berfungsi untuk mengurangi aktivitas LDL oksidasi yang terjadi akibat penimbunan kolesterol dalam darah. Antioksidan dalam ekstrak etanol buah inggir-inggir juga dapat meningkatkan HDL dalam darah dengan cara

meningkatkan mRNA Apo A1 hati yang berperan untuk menginisiasi sintesis Apo A1, Apo A1 juga dapat menekan perbanyakan LDL sehingga tidak terjadi LDL oksidasi (Brown, 2003).

Pengukuran VLDL dilakukan pada hari ke-22, 24 jam setelah pemberian Na CMC 0,5% dan EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB. Hasil pengukuran dapat dilihat secara rinci pada Gambar 4.9

Gambar 4.9 Grafik VLDL tikus jantan yang diinduksi NaCl 2,5% dan ...metilprednisolon.

Hasil induksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon selama 14 hari secara oral menyebabkan VLDL tikus pada kelompok kontrol negatif 21,83 mg/dL. Berdasarkan pengamatan VLDL rata-rata, terjadi penurunan VLDL setelah pemberian EEBI dengan tiga variasi dosis 50 mg/kg BB, 100 mg/kg BB dan 150 mg/kg BB. Hasil pengujian statistika dengan analisa Tukey One Way Anova

menunjukkan bahwa tidak terjadi pengaruh secara signifikan EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB (p>0.05).

Senyawa aktif yang diduga berperan dalam menurunkan VLDL darah adalah adalah flavonoid. Flavonoid dan tanin dapat menghambat enzim

HMG-CoA reduktase yang berperan mensintesis kolesterol. Terhambatnya HMG-HMG-CoA reduktase akan menurunkan sintesis kolesterol di hati sehingga menurunkan sintesis Apo B dan meningkatkan reseptor LDL pada permukaan hati. Kemudian kolesterol dalam darah dapat ditarik ke hati sehingga menurunkan kolesterol LDL dan VLDL. Selain itu tanin berefek menghambat enzim lipase pankreas sehingga penyerapan kolesterol oleh hati terhambat dan sekresi kolesterol melalui feses meningkat (Rahastuti, et al., 2011).

4.2.4 Hasil Glukosa Darah

Pengukuran glukosa darah dilakukan pada hari ke-22, 24 jam setelah pemberian Na CMC 0,5% dan EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB. Hasil pengukuran dapat dilihat secara rinci pada Gambar 4.10

Gambar 4.10 Grafik glukosa tikus jantan yang diinduksi NaCl 2,5% dan ....metilprednisolon.

Hasil induksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon selama 14 secara oral menyebabkan masuknya senyawa radikal bebas kedalam tubuh membuat stress oksidatif pada tikus dan meningkatkan kadar glukosa darah puasa dengan nilai

158,50 mg/dL. Kadar glukosa tikus jantan normal adalah 80-160 mg/dL (Gad, 1990). Berdasarkan pengamatan penurunan kadar glukosa rata-rata, terjadi penurunan kadar glukosa setelah pemberian EEBI dosis 50 mg/kg BB, 100 mg/kg BB dan 150 mg/kg berturut-turut dengan nilai 143,67 mg/dL, 136 mg/dL dan 124,67 mg/dL. Kelompok penurunan yang optimal pada kelompok EEBI 150 mg/kg BB dengan nilai 124,67 mg/dL. Hasil pengujian statistika dengan analisa

Tukey One Way Anova menunjukkan bahwa EEBI dosis 50, 100, 150 mg/kg BB

memiliki pengaruh secara signifikan terhadap penurunan glukosa (p<0.05). Oleh karena itu, EEBI 150 mg/kg BB memberikan efek penurunan kadar glukosa cukup optimal dibandingkan dengan kedua dosis lainnya.

Mengkonsumsi secara teratur buah inggir-inggir dapat menurunkan kadar glukosa darah pada penderita diabetes (Fabellar, 1998). Efek penurunan kadar glukosa darah tikus dari pemberian ekstrak etanol buah inggir-inggir disebabkan oleh adanya senyawa flavonoid sebagai antioksidan yang mampu mengikat radikal bebas sehingga dapat mengurangi stress oksidatif akibat kadar glukosa darah yang tinggi. Hal ini sejalan dengan penelitian (Ramadhani, 2008) dan (Astrian, 2009), bahwa stress oksidatif dapat menurunkan jumlah transporter

glukosa (GLUT) sehingga menyebabkan peningkatan resistensi insulin, dan mengganggu sekresi insulin karena terjadi kerusakan sel β pankreas. Tanin terbukti meningkatkan penyerapan glukosa pada jaringan adiposit tikus (Hayashi, et al., 2002).

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil analisis statisik, pemberian ekstrak etanol buah inggir-inggir (Solanum sanitwongsei Craib.) dosis 150 mg/kg BB mampu menurunkan total kolesterol= 144 mg/dL, LDL=43,81 mg/dL dan glukosa=124,67 mg/dL dan berbeda signifikan dengan kontrol negatif (p<0,05) dan tidak mampu menurunkan AST, ALT, ureum, kreatinin, trigliserida, VLDL dan tidak mampu meningkatkan HDL secara signifikan (p>0,05). Dapat disimpulkan bahwa EEBI dosis 150 mg/kg BB merupakan dosis optimal dalam menurunkan resiko penyakit kardiovaskular.

5.2 Saran

Disarankan untuk peneliti selanjutnya dilakukan uji efek ekstrak etanol buah inggir-inggir terhadap parameter biokimia manusia.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Uraian Tumbuhan

Tumbuhan inggir-inggir (Solanum sanitwongsei Craib.) adalah tumbuhan yang secara morfologi hampir mirip dengan tomat (Solanum lycopersicum), tekokak (Solanum torvum) dan terong (Solanum melongena). Tumbuhan ini mudah tumbuh di berbagai tempat seperti di semak dan pekarangan rumah dengan tinggi ± 2 m (Widyaningrum, 2011).

2.1.1 Sistematika tumbuhan

Tumbuhan inggir-inggir memiliki sistematika sebagai berikut : Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyta Subdivisi : Angiospermae Kelas : Dicotyledoneae Bangsa : Solanales Suku : Solanaceae Marga : Solanum

Spesies : Solanum sanitwongsei Craib (Widyaningrum, 2011). 2.1.2 Nama lain

Tumbuhan inggir-inggir memiliki nama lain yaitu: Sinonim : Solanum kurzii

Nama daerah : Inggir-inggir (Batak), Terung siam (Jawa) Brace.

Nama asing : Talong siam (Tagalog), Ma kae kom; Ma waeng dton; Ma waeng

...khurue (Thailand) (Widyaningrum, 2011).

2.1.3 Morfologi

Inggir-inggir berbatang tegak, bulat, berkayu, berbulu halus, dan berwarna putih kotor. Daun tunggal, lonjong, panjang 4-10 cm, lebar 3-7 cm, tepi rata, ujung runcing, berbulu, tangkai panjang ±0,5 cm dan berwarna hijau. Bunga majemuk, bentuk tandan, berbulu, tangkai panjang ±2 cm, bewarna ungu, kelopak bertajuk lima, hijau keunguan, benang sari kuning, putik berbulu, kuning, mahkota bentuk bintang dan berwarna ungu. Buah berbentuk bulat, masih muda hijau setelah tua kuning atau jingga. Biji bulat pipih, kecil, kuning muda serta mempunyai akar tunggang berwarna coklat kotor (Widyaningrum, 2011).

2.1.4 Khasiat dan penggunaan

Buah Inggir-inggir berkhasiat sebagai obat nyeri haid, obat kencing manis, obat tekanan darah tinggi, obat jerawat, bijinya untuk obat sakit gigi dan gusi bengkak. Untuk nyeri haid dipakai ±20 g buah segar Solanum sanitwongsei Craib, dicuci lalu dipotong-potong direbus dengan 1 gelas air selama 15 menit, setelah dingin disaring. Hasil saringan diminum sekaligus (Widyaningrum, 2011).

2.1.5 Kandungan kimia

Buah inggir-inggir (Solanum sanitwongsei Craib) mengandung alkaloid, flavonoid, saponin, tanin, glikosida, steroida/triterpenoida (Sinaga, 2014).

2.2 Ekstrak

Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang

sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Ditjen POM RI, 1995).

2.3 Hipertensi

Hipertensi adalah penyakit tekanan darah tinggi di atas batas normal (120/80 mmHg). Para ahli medis menetapkan bahwa 120 - 139/80 - 89 dikatakan sebagai prehipertensi (Scanlon, 2007). Klasifikasi tekanan darah menurut JNC

(Joint National Commitee) VII 2003 dapat dilihat pada Tabel 2.1.

Tabel 2.1 Klasifikasi tekanan darah berdasarkan JNC VII (Dipiro, et al., 2008). Klasifikasi Tekanan Sistolik (mmHg) Tekanan Diastolik (mmHg)

Normal 120 80

Pre Hipertensi 120-139 80-89

Stadium I 140-159 90-99

Stadium II ≥160 ≥100

2.3.1 Etiologi Hipertensi

Berdasarkan penyebab hipertensi dibagi menjadi 2 golongan, yaitu hipertensi primer (esensial) yang tidak diketahui penyebabnya dan hipertensi sekunder (non esensial) yang diketahui penyebabnya (Depkes RI, 2006).

a. Hipertensi primer (esensial)

Hipertensi esensial atau hipertensi primer yang tidak diketahui penyebabnya, disebut juga hipertensi idiopatik. Terdapat sekitar 95% kasus. Banyak faktor yang mempengaruhinya seperti genetik, lingkungan, hiperaktifitas sistem saraf simpatis, sistem renin angiotensin dan faktor-faktor yang meningkatkan risiko obesitas, alkohol dan merokok (Schrier, 2000).

b. Hipertensi sekunder (non esensial)

Hipertensi sekunder atau hipertensi renal terdapat 5% kasus. Penyebab spesifik diketahui, seperti penggunaan estrogen, penyakit ginjal, hipertensi vaskular renal, hiperaldosteronisme primer dan hipertensi yang berhubungan dengan kehamilan (Schrier, 2000).

2.3.2 Patofisiologi Hipertensi

Mekanisme patofisiologi yang berhubungan dengan peningkatan hipertensi esensial antara lain:

1. Sistem Renin Angiotensin

a. Mekanisme terjadinya hipertensi adalah melalui terbentuknya angiotensin II dari angiotensin 1 oleh angiotensin I-converting enzyme (ACE). Angiotensin II inilah yang memiliki peranan kunci dalam menaikkan tekanan darah melalui dua aksi utama yang pertama dengan meningkatkan sekresi Anti-Diuretik Hormon (ADH) dan rasa haus yang kemudian meningkatkan ADH maka sangat sedikit sekali urin yang dieksresikan ke luar tubuh (antidiuresis) hasilnya urin menjadi pekat dan tinggi osmolalitasnya dan untuk mengencerkannya, volume cairan ekstrasel akan ditingkatkan dengan cara menarik cairan dari bagian intraseluler. Akibatnya, volume darah meningkat, yang pada akhirnya akan meningkatkan tekanan darah (Gray, et al., 2005). b. Menstimulasi sekresi aldosteron dari korteks adrenal. Aldosteron merupakan

hormon steroid yang berperan penting pada ginjal yang berfungsi mengatur volume cairan ekstraseluler dan aldosteron akan mengurangi ekskresi NaCl (garam) dengan cara mereabsorpsinya dari tubulus ginjal. Naiknya konsentrasi NaCl akan diencerkan kembali dengan cara meningkatkan volume cairan

ekstraseluler yang pada gilirannya akan meningkatkan volume dan tekanan darah (Gray, et al., 2005).

2. Sistem saraf otonom

Sirkulasi sistem saraf simpatis dapat menyebabkan vasokontriksi dan dilatasi arteriol. Sistem saraf otonom ini mempunyai peran yang penting dalam mempertahankan tekanan darah. Hipertensi dapat terjadi karena interaksi antara sistem saraf otonom dan sistem renin-angiotensin bersama-sama dengan faktor lain termasuk natrium, volume sirkulasi dan beberapa hormon (Gray, et al., 2005).

2.4 Hubungan Hipertensi dengan Parameter Biokimia

Pada kebanyakan kasus, hipertensi terdeteksi saat pemeriksaan fisik karena alasan penyakit tertentu, hipertensi sering disebut sebagai “silent killer”. Pasien hipertensi sering tidak menyadari bahwa pasien mengalami komplikasi pada organ-organ vital seperti jantung, hati, otak ataupun ginjal yang menyebabkan penyakit komplikasi seperti diabetes melitus, gagal ginjal, stroke dan aterosklerosis (Yogiantoro, 2006). Perlu beberapa pemeriksaan untuk menentukan adanya kerusakan organ salah satunya dengan pemeriksaan laboratorium yaitu pemeriksaan parameter biokimia hipertensi diataranya ALT, AST, kreatinin, ureum, total kolesterol, trigliserida, HDL, LDL, VLDL dan glukosa.

a. ALT

Enzim ini mengkatalisis pemindahan satu gugus amino antara lain alanin

Terdapat banyak di hepatosit dan konsentrasinya relatif rendah di jaringan lain. ALT lebih sensitif dibandingkan AST (Sacher dan Person, 2002).

b. AST

Enzim ini berfungsi sebagai katalisator reaksi antara asam aspartat dan asam α- ketoglutarat menjadi glutamat dan oksalasetat yang bersifat reversibel. AST terdapat lebih banyak dijantung dibandingkan di hati, selain itu enzim ini juga terdapat di otot rangka, otak dan ginjal. AST meningkat tajam ketika terjadi infark miokardium (Husadha, 1996). Enzim ini kurang spesifik untuk penyakit hati (Gaze, 2007). Saat sel hati mengalami kerusakan, enzim transaminase tersebut berada di dalam darah, sehingga dapat diukur aktivitasnya. Hal ini disebabkan karena terjadi kerusakan pada struktur dan fungsi membran sel hati, aktivitas ALT lebih dini dan lebih cepat meningkat dari aktivitas AST (Wilmana, 1995).

Peningkatan AST yang tinggi terjadi ketika nekrosis di jaringan hati sudah meluas, seringkali dikaitkan dengan infark miokard. AST terdapat di mitokondria dan sitoplasma sel, sedangkan ALT hanya terdapat di sitoplasma. Tingkat kenaikan AST dan ALT dikelompokkan menjadi tinggi, sedang dan ringan. Peningkatan ringan (1-3 kali lipat) biasanya dijumpai pada hepatitis neonatus yang disebabkan sepsis, perlemakan hati, sirosis, hepatitis steatotik non alkohol, toksisitas obat, dan beberapa gangguan hati lain, terkadang penigkatan ALT juga dijumpai pada orang normal (Thapa dan Walia, 2007).

5% kasus hipertensi telah diketahui penyebabnya, dan dapat dikelompokkan seperti: penyakit parenkim ginjal dimana setiap penyebab gagal ginjal (glomerulonefritis, pielonefritis, sebab-sebab penyumbatan) yang menyebabkan kerusakan parenkim akan cenderung menimbulkan hipertensi dan

dapat mengakibatkan kerusakan ginjal (Gray, et al., 2005). Pemeriksaan darah terhadap kadar kreatinin dan ureum dalam darah diperlukan untuk menegakkan diagnosa gagal ginjal dengan tepat (LabTechnologist, 2010).

c. Ureum

Ureum adalah satu molekul kecil yang mudah mendifusi ke dalam cairan ekstrasel, tetapi pada akhirnya ureum akan dipekatkan dalam urin (LabTechnologist, 2010). Bila ginjal rusak atau kurang baik fungsinya maka kadar ureum darah dapat meningkat dan meracuni sel-sel tubuh karena terjadi penurunan proses filtrasi glomerulus. Ureum secara khusus berguna dalam mengevaluasi fungsi glomerulus. Kondisi klinis lain yang mengakibatkan kesalahan perkiraan laju filtrasi glomerulus yang dilihat dari kadar ureum. Kondisi klinis tersebut adalah volume ekstraseluler dalam tubuh, kadar protein dalam pakan, dan penyakit liver. Keadaan dehidrasi cairan tubuh akan mengakibatkan kadar ureum meningkat. Kadar kreatinin dan ureum bukanlah satu-satunya indikator kerusakan ginjal, tetapi perlu dikonfirmasi lagi dengan histologi jaringan ginjal (Lefever, 2007).

d. Kreatinin

Kreatinin adalah produk akhir dari metabolisme kreatin. Kreatinin disintesis oleh hati, terdapat hampir semuanya dalam otot rangka yang terikat secara reversibel kepada fosfat dalam bentuk fosfokreatin, yakni senyawa penyimpan energi. Reaksi keratin + fosfat ↔ fosfokreatin bersifat reversibel pada waktu energi dilepas atau diikat (LabTechnologist, 2010). Kreatinin dieskresikan seluruhnya dalam urin melalui filtrasi glomerulus. Kadar kreatinin sendiri tidak dipengaruhi oleh asupan makanan atau minuman sehingga

2.1.4 Khasiat dan penggunaan ... 8

2.1.5 Kandungan kimia... 8

2.2 Ekstrak ... 8

2.3 Hipertensi ... 9

2.3.1 Etiologi Hipertensi ... 9

2.3.2 Patofisiologi Hipertensi ... 10

2.4 Hubungan Hipertensi dengan Parameter Biokimia ... 11

BAB III METODE PENELITIAN ... 19

3.1 Alat dan Bahan ... 19

3.1.1 Alat ... 19

3.1.2 Bahan ... 20

3.2 Penyiapan Sampel ... 20

3.3.1 Pengambilan dan pengolahan sampel ... 20

3.3 Hewan Percobaan ... 20

3.4 Penyiapan Bahan uji ... 21

3.4.1 Pembuatan Suspensi CMC Na 0,5% (b/v) ... 21

3.4.2 Pembuatan Larutan NaCl 2,5% (b/v) ... 21

3.4.3 Pembuatan Suspensi metil prednisolon tablet ... 21

3.4.4 Pembuatan Suspensi Ekstrak etanol buah inggir - inggir ... 21

3.5.2 ALT ... 23

3.6 Pemeriksaan Faal Ginjal ... 23

3.6.1 Ureum dan Kreatinin ... . 23

3.7 Pemeriksaan Profil Lipid ... 24

3.7.1 Total kolesterol, Trigliserida, HDL, LDL, dan VLDL ... 24

3.8 Pemeriksaan Profil Gula Darah ... 24

3.8.1 Glukosa darah ... 24

3.9 Analisis Data ... 25

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 26

4.1 Bahan Baku Ekstrak ... 26

4.2 Hasil Uji Parameter Biokimia ... 26

4.3.1 Hasil pengukuran AST dan ALT... 26

4.2.2 Hasil pengukuran Ureum dan Kreatinin ... 30

4.2.3 Total kolesterol, Trigliserida, HDL, LDL, dan VLDL ... 33

4.2.4 Hasil pengukuran Gula darah ... 42

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 44

5.1 Kesimpulan ... 44

5.2 Saran ... 44

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

Ga1.1 Kerangka Pikir Penelitian ... .. ... 6 Ga4.1 Grafik AST tikus diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon ... .. 27 Ga4.2 Grafik ALT tikus diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon ... .. 29 Ga4.3 Grafik ureum tikus diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon .. 30 Ga4.4 Grafik kreatin tikus diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon.. 32 Ga4.5 Grafik Tk tikus diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon ... .. 34 Ga4.6 Grafik Tg tikus diinduksi NaCl 2,5 dan metilprednisolon ... .. 36 Ga4.7 Grafik HDL tikus diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon.... 38 Ga4.8 Grafik LDL tikus diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon... 39 Ga4.9 Grafik VLDL tikus diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon .. 41 Ga4.10 Grafik glukosa tikus diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon. 42

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

La1 Rekomendasi persetujuan etik penelitian kesehatan ... 51

La2 Hasil identifikasi tumbuhan ... 52

La3 Tumbuhan inggir-inggir ... 53

La4 Simplisia buah inggir-inggir ... 54

La5 Gambar mikroskopik serbuk simplisia buah inggir-inggir ... 55

La6 Gambar hewan percobaan ... 56

La7 Bagan alur penelitian ... 57

La8 Perhitungan kadar air ... 58

La9 Perhitungan penetapan kadar sari larut dalam air ... 59

La10 Perhitungan penetapan kadar sari larut dalam etanol ... 60

La11 Perhitungan penetapan kadar abu total ... 61

La12 Perhitungan penetapan kadar abu tidak larut dalam asam ... 62

La13 Volume maksimu sesuai jalur pemberian dan konversi dosis .. 64

La14 Contoh perhitungan dosis kontrol CMC Na 0,5% ... 64

La15 Contoh perhitungan dosis metilprednisolon 1,5 mg/kg bb ... 64

La16 Contoh perhitungan dosis NaCl 2.5% ... 65

La17 Perhitungan volume pemberian EEBI 50, 100, 150 mg/kg bb . . 66

La23 Hasil analisis statistik ... 72