USP dan ICH memperkenalkan bahwa tidak selamanya seluruh parameter untuk mengevaluasi metode diuji. Adapun elemen-elemen data yang dibutuhkan untuk
uji validasi berdasrkan kategori metode analisisnya adalah: Parameter Kinerja
Analisis Pengujian
Kategori 1 Pengujian Kategori 2 Uji kategori
3 Kuantitatif
Uji Batas
Akurasi Ya
Ya Presisi
Ya Ya
Tidak Ya
Spesifitas Ya
Ya Ya
LOD Tidak
Tidak Ya
LOQ Tidak
Ya Tidak
Linieritas Ya
Ya Tidak
Kisaran range Ya
Ya Ruggedness
Ya Ya
Ya Ya
mungkin dibutuhkan, tergantung pada uji spesifiknya
2.4.1 Akurasi
Akurasikecermatan dapat ditentukan dengan dua metode, yakni spiked placebo recovery dan standard addition method. Pada spiked placebo recovery
atau metode simulasi, analit murni ditambahkan spiked ke dalam campuran bahan pembawa sediaan farmasi, lalu campuran tersebut dianalisis dan jumlah
analit hasil analisis dibandingkan dengan jumlah analit teoritis yang diharapkan. Jika plasebo tidak memungkinkan untuk disiapkan, maka sejumlah analit
yang telah diketahui konsentrasinya dapat ditambahkan langsung ke dalam sediaan farmasi otentik. Metode ini dinamakan metode standard addition method
atau metode penambahan baku. Jumlah keseluruhan analit kemudian diukur dan dibandingkan dengan
jumlah teoritis, yaitu jumlah analit yang murni berasal dari sediaan farmasi otentik tersebut, ditambah dengan jumlah analit yg di-spiked ke dalam sediaan. Akurasi
kemudian dinyatakan dalam persen perolehan kembali Recovery Harmita, 2004.
2.4.2 Presisi
Presisi diekspresikan dengan standar deviasi atau standar deviasi relatif RSD dari serangkaian data. Data untuk menguji presisi seringkali dikumpulkan
sebagai bagian dari kajian-kajian lain yang berkaitan dengan presisi seperti linearitas atau akurasi. Biasnya replikasi 6-15 dilakukan pada sampel tunggal
untuk tiap-tiap konsentrasi. Pada pengujian dengan KCKT, nilai RSD antara 1-2 biasanya dipersyaratkan untuk senyawa-senyawa aktif dalam jumlah yang banyak
sedangkan untuk senyawa-senyawa dengan kadar sekelumit RSD berkisar antara
5-15 Rohman, 2007. 2.4.3 Spesifitas
Penentuan spesifitas metode dapat diperoleh dengan dua jalan. Cara pertama adalah dengan melakukan optimasi sehingga diperoleh senyawa yang
dituju terpisah secara sempurna dari senyawa-senyawa lain resolusi senyawa yang dituju
≥ 2. Cara kedua untuk memperoleh spesifitas adalah dengan menggunakan detektor selektif terutama untuk senyawa-senyawa yang terelusi
secara bersama-sama sebagai contoh detektor elektrokimia hanya akan mendeteksi senyawa tertentu, sementara senyawa yang lainnya tidak terdeteksi.
Penggunaan detektor UV pada panjang gelombang yang spesifik juga merupakan cara yang efektif untuk melakukan pengukuran selektifitas Rohman, 2007.
2.4.4 Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi
