Gambar 14. Sampel gigi molar
Gambar 15. Pengukuran kekerasan dengan alat Micro Vickers Hardness Tester
4.7.4 Pembuatan media
Sebelum spesimen di biakkan, di buat media Trypticase Soya Broth, sebanyak 6 gram Trypticase Soya Broth, ditambahkan yeast extract 1,2 gram, dan sukrosa 28
gram, kemudian dilarutkan ke dalam 200 ml aquadest, lalu dilarutkan di atas stir plate. Kemudian media disterilkan di dalam autoklaf selama 2 jam dengan tekanan
udara 2atm suhu 121
o
C. Setelah diterilkan, media di didinginkan, lalu ditambahkan bacitracin 4 ml dan disimpan ke dalam lemari pendingin.
\
4.7.5 Pembiakan spesimen
Bakteri yang digunakan adalah bakteri Streptokokus mutans serotype c yang diisolasi dari karies.sebanyak 9 ml media TYS Broth dan 1 ml biakkan bakteri
Streptococcus mutans di pipet ke dalam tabung reaksi, lalu di vortex. Setelah itu, media TYS broth tersebut dimasukkan ke dalam anaerobic jar. Kemudian di
inkubator selama 24 jam pada suhu 37
o
C dalam suasana anaerob. Setelah 24 jam bakteri akan tumbuh.
4.7.6 Uji perlekatan Streptococcus mutans
Gambar 16. Pembuatan media TYS Broth
Gambar 17. Biakkan Streptococcus mutans dimasukkkan kedalam anaerobic jar dan diinkubasi
Biakan uji bakteri yang digunakan pada penelitian Streptokokus mutans di ambil dari Laboratorium Biologi Oral Fakultas Kedokteran Gigi Universitas
Indonesia. Kultur bakteri yang dihasilkan dicari OD-nya dengan menggunakan microplate reader kemudian diencerkan sampai didapatkan konsentrasi 10
6
CFUml. Setelah itu kultur yang telah diencerkan dimasukkan pada 24well sebanyak 1ml tiap
well. Setelah itu dimasukkan sampel, kontrol positif dan kontrol negatif pada masing- masing well, setelah itu well ditaruh padah wadah dan diisi dengan gas dan
diinkubasi selama 24 jam. Bakteri yang tidak melekat pada sampel dikeluarkan dari 24well dan diambil 100 mikroliter ke dalam 96well kemudian dimasukkan
100mikroliter larutan gentian violet 3 dan dinkubasi selama 30 menit. Gigi yang telah ditumbuhi biofilm kemudian dipindahkan ke well 24 yang lain dan kemudian di
masukkan 500 mikroliter larutan gentian violet dan diinkubasi selama 30 menit, lalu gentian violet dibuang dan di fiksasi dengan alcohol 96 0,1ml pada masing-masing
well. Kemudian 96well di letakkan di microplate reader untuk di baca.
Gambar 18. Bakteri Streptococcus mutans di pindahkan ke 96well
4.8 Analisa Data
