44 streptomisin. Gentamisin merupakan antimikroba untuk bakteri Gram
positif, negatif, dan mikroplasma, penisilin untuk bakteri Gram positif, sedangkan streptomisin untuk bakteri Gram positif dan negatif.
Gentamisin termasuk ke dalam jenis antibiotika derivat aminoglikosida dengan spektrum yang luas dan aktif untuk melawan organisme Gram
positif dan Gram negatif. Pemberian jangka pendek gentamisin 0.3-1.0 secara tunggal tanpa kombinasi di samping biayanya lebih murah juga
sangat efektif untuk melawan organisme berspektrum luas.
3. Proliferasi Sel
Proliferasi adalah proses perbanyakan sel melalui pembelahan sel mitosis dan diferensiasi sebagai respon terhadap antigen atau mitogen.
Pada proses proliferasi dihasilkan sel-sel efektor aktif yang berperan pada respon spesifik dan atau respon nonspesifik untuk mengeliminasi mikroba
patogen dan zat-zat asing lainnya. Sel limfosit termasuk sel tunggal yang bertahan baik saat dikultur pada media sederhana dan secara konsisten
tetap dalam tahap diam dan tidak membelah sampai ditambahkan mitogen ke dalamnya. Proliferasi merupakan fungsi dasar biologis limfosit dan
respon proliferatif secara in vitro yang dapat menggambarkan fungsi limfosit serta status imun suatu individu.
Kemampuan limfosit untuk berproliferasi atau membentuk klon menunjukkan secara tidak langsung kemampuan respon imunologik atau
tingkat kekebalan. Jika sel limfosit dikultur dengan penambahan mitogen, maka limfosit akan akan memberikan respon dengan cara berproliferasi
memperbanyak diri. Mitogen adalah agen yang mampu menginduksi pembelahan sel,
baik sel B maupun sel T dalam persentase yang tinggi. Sel limfosit B dan T mampu berproliferasi seiring stimulasi mitogen ke dalam kultur sel.
Sejumlah mitogen umumnya berasal dari lektin protein tumbuhan dan gula terikat. Lektin mengenali perbedaan glikoprotein pada permukaan
setiap sel, termasuk sel limfosit Harris, 1991.
45 Beberapa jenis mitogen yang digunakan untuk menstimulir
aktivitas proliferasi sel limfosit adalah pokeweed PWM, fitohemoglutinin PHA, concanavalin A Con A, dan lipopolisakarida
LPS bakteri Garam negatif. Terdapat sejumlah mitogen yang hanya dapat mengaktivasi sel limfosit B atau sel limfosit T saja, dan ada pula yang
dapat mengaktivasi populasi keduanya. Pokeweed merupakan jenis mitogen yang mampu mengaktivasi kedua jenis sel limfosit B dan T.
Mitogen PHA dan Con A dapat merangsang transformasi blast subpopulasi sel T. Sementara LPS akan bereaksi dengan membran plasma
sel B dan menghasilkan aktivitas seluler.
F. Metode Pewarnaan MTT MTT Assay
MTT assay merupakan salah satu metode kolorimetri pewarnaan menggunakan pewarna MTT dengan mengukur konsentrasi warna nilai
absorbansi produk akhir yang terbentuk menggunakan spektrofotometer. MTT yang memiliki nama kimia [3-4,5-dimethylthiazol-2-yl-2,5-
diphenyltetrazolium bromide] merupakan garam tetrazolium yang dapat bereaksi secara in vitro dengan enzim suksinat dehidrogenase yang dihasilkan
oleh sel hidup Mosmann, 1983. Enzim suksinat dehidrogenase adalah salah satu enzim yang berperan
aktif selama proses respirasi seluler secara aerobik. Enzim suksinat dehidrogenase merupakan flavoprotein yang mengandung protein dengan
ikatan Fe besi dan S belerang. Enzim ini terikat pada bagian membran mitokondria yang berfungsi sebagai reduktor selama tahapan siklus Krebs
dan transpor elektron. Pada siklus Krebs, enzim ini menerima hidrogen dari suksinat dan bertugas menghidrogenasi suksinat menjadi fumarat serta
menghasilkan FADH
2
. FADH
2
yang dibentuk akan mengalami reoksidasi pada rantai transpor elektron yang berkaitan erat dengan pembentukan energi
ATP dalam proses fosforilasi oksidatif Lehninger, 1982. Prinsip metode pewarnaan MTT adalah mereduksi garam
monotetrazolium yang berwarna kuning dan larut dalam air oleh enzim suksinat dehidrogenase yang diproduksi oleh sel hidup menjadi produk akhir
