4.4.2 Pasta CaOH
2
adalah bubuk CaOH
2
Merck, Germany
murni
sebanyak 1 gr yang dilarutkan dengan pelarut air 1 ml hingga berbentuk pasta kental.
4.4.3 Sel fibroblas adalah stem sel Fibroblas
BHK-21
yang berasal dari Laboraturium Pusat Veterinaria Farma UNAIR Surabaya dan dibiakkan secara
murni pada media
Rosewell Park Memorial Institute 1640 RPMI-1640.
4.4.4 Sitotoksisitas adalah viabilitas sel
fibroblas
BHK-21
terhadap ekstrak etanol
A.vera
dilihat dari nilai
IC
50
, dihitung memakai metode MTT
assay
dengan menggunakan
ELISA reader
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
pada panjang
gelombang 620 nm.
4.4.5
IC
50
ekstrak etanol
A.vera
adalah konsentrasi dari ekstrak etanol
A.vera
yang menghambat pertumbuhan sel fibroblas sebesar 50 dari kontrol sel yang diperoleh dari nilai rata-rata persentase kehidupan sel pada waktu pengamatan
24 jam.
4.5 Bahan dan Alat Penelitian
4.5.1 Bahan Penelitian
Ekstraksi
A.vera
1. Tanaman
A.vera
jenis
Aloe Barbadensis
Miller 1015,5 gram Kelurahan
Sidomulyo, Kec. Medan Tuntungan, Sumatera Utara, Indonesia
2. Etanol 96 destilasi Kimia Farma, Indonesia 1,3 liter
Uji
Screening
Fitokimia Ekstrak
A.vera
1. Ekstrak kental
A.vera
Universitas Sumatera Utara
2. Ampas ekstrak
A.vera
3. HCl 2N Kimia Farma, Indonesia 10 ml
4. FeCl
3
Kimia Farma, Indonesia 10 ml 5.
H
2
SO
4
2N Kimia Farma, Indonesia 10 ml 6.
Benzene
Kimia Farma, Indonesia 10 ml 7.
NaOH 2N Kimia Farma, Indonesia 10 ml
Uji Sitotoksisitas
1. Larutan ekstrak etanol
A.vera
100, 50, 25, 12,5, 6,25, 3,125, 1,56, 0,78 8 sampel
2. CaOH
2
bubuk
Merck, Germany
3. Kultur
cell lines
fibroblas
BHK-21
Pusvetma, Surabaya 4.
MTT
solution Sigma, St. Louis, OM
5.
DimethyilsulfoxideDMSO Merck, Germany
6.
Trypsine versene solution
0,25
Merck, Germany
7.
RPMI-1640
Pusvetma, Surabaya 8.
Phosphate Buffer SalinePBS
pH 7 Pusvetma, Surabaya
Gambar 6. Bubuk CaOH
2
Universitas Sumatera Utara
4.5.2 Alat Penelitian
Ekstraksi
A.vera
1.
Freeze dryer modulyo Edwards, USA
2.
Electronic balance Ohyo JP2-6000, JAPAN
3.
Rotavapor Buchi R-200, Switzerland
4. Blender Phillips, Indonesia
5. Corong
buchner mainz, Schoott
6.
Erlenmeyer Pyrex, USA
7.
Cutter Hakkoh, Japan
8. Kertas saring biasa
9. Sendok pengaduk
Gambar 7. Freeze dryer Gambar 8. Rotavapor
Uji
Screening
Fitokimia Ekstrak
A.vera
1. Tabung reaksi Pyrex, Indonesia
2. Kayu penjepit
Uji Sitotoksisitas
1.
96-well tissue culture plate Nunc,USA
Universitas Sumatera Utara
2.
Timbangan Mettler, Germany
3.
Hemositometer Neubeur, Swiss
4.
Scanning multiwell spectrophotometer Thermo Scientific,USA
5.
Automatic plate shaker Vari shaker,USA
6. Inkubator
Memmert, Germany
7.
Micropipette Finnpipette Colour 40
–
200 µ l, China
8. Botol kultur
Roux, Schott Duran, Germany
9.
Microscope inverted Nikon,Jepang
10.
Multi channel pipette ICN, Germany
11.
Laminar flow hood Clemco, Australia
12.
Sterile pipette tips Eppendorf, North America
10. Tabung steril
Pyrex, USA
13. Stopwatch
Citizen, Japan
14. Spuit Sterra, Indonesia
15.
Filter holder Millipore, USA
16.
Nitrocellulose paper Millipore, USA
Gambar 9. 96-well tissue culture plate Gambar 10. Microscope inverted
Universitas Sumatera Utara
Gambar 13. Micropipette Gambar 14. Multi channel pipette
Gambar 15. ELISA reader
4.6 Tempat dan Waktu Penelitian