kromatografi yang telah jenuh dengan uap pengembang dan ditutup rapat. Sesudah elusi selesai plat dikeluarkan dari chamber dan dikeringkan di udara,
kemudian plat disemprot dengan larutan penampak bercak Dragendorff. Warna bercak yang terjadi diamati dan dihitung harga Rf-nya hasil kromatogram
ekstrak kasar alkaloida dapat dilihat pada Lampiran 8.
3.10 Isolasi Senyawa Alkaloida Secara KLT Preparatif
Isolasi senyawa alkaloida dilakukan secara KLT preparatif, sebagai fase gerak digunakan kloroform-metanol-amonia 85:15:1 dan sebagai penampak
bercak digunakan pereaksi Dragendorff. Cara kerja:
Ekstrak diencerkan dengan metanol dan ditotolkan pada jarak 2 cm dari tepi bawah plat pra lapis silika gel 60 F
254
berukuran 20 x 20 cm yang telah diaktifkan sehingga membentuk pita. Selanjutnya plat dimasukkan ke
dalam bejana yang telah jenuh dengan uap fase gerak, pengembang dibiarkan naik membawa komponen yang ada. Setelah mencapai batas pengembang plat
dikeluarkan dari bejana lalu dikeringkan. Bagian tengah plat ditutup dengan kaca yang bersih sedangkan pada sisi kanan dan kiri plat disemprot dengan
pereaksi Dragendorff. Bercak berwarna merah jingga yang terdapat pada sisi kiri yang dihubungkan dengan sisi kanan, sehingga yang berada pada bagian
tengah plat dikerok dan dikumpulkan, kemudian plat silika yang menjadi alkaloid dielusi dengan pelarut metanol, kemudian dilakukan uji kemurnian
terhadap isolat yang diperoleh.
Universitas Sumatera Utara
3.11 Uji Kemurnian Isolat Dengan KLT Dua Arah
Terhadap isolat hasil isolasi dilakukan uji kemurnian dengan KLT untuk melihat alkaloida menggunakan fase diam plat pra lapis silika gel 60 F
254
dengan fase gerak pertama kloroform-metanol-amonia 85:15:1 dan fase gerak kedua kloroform-metanol-amonia 70:30:1. Sebagai penampak bercak
digunakan pereaksi Dragendorff. Cara kerja:
Isolat hasil isolasi ditotolkan pada plat pra lapis silika gel 60 F
254
yang sebelumnya telah diaktifkan, kemudian dimasukkan ke dalam bejana
kromatografi dengan fase gerak pertama yang telah jenuh dengan uap pengembang dan ditutup rapat. Sesudah elusi selesai plat dikeluarkan dari
bejana kromatografi, lalu diputar 90° dimasukkan ke dalam bejana kromatografi dengan fase gerak kedua yang telah jenuh dengan uap
pengembang, ditutup rapat dan dikeringkan di udara, kemudian plat disemprot dengan larutan penampak bercak Dragendorff. Warna bercak yang terjadi
diamati dan dihitung harga Rf-nya.
3.12 Karakterisasi Isolat
