4. Kromatografi penukar ion
Ada dua tahap yang harus dilakukan sebelum melakukan separasi protein-protein dalam kromatografi kolom “Akta Prime”, yaitu penghilangan
garam-garam dengan menggunakan “Hi trap desalting” dan penukar ion. Laju alir yang digunakan adalah 1 mlmenit.
Gambar 6. Alat kromatografi kolom “Akta Prime”
1. Penghilangan garam-garam
a. Penyiapan contoh Contoh dilewatkan melalui filter berukuran 0,45 µm. Volume contoh
maksimal yang direkomendasikan dengan menggunakan kolom kromatografi ”HiTrap
TM
desalting” berukuran 5 ml adalah 1,8 ml. b. Penyiapan penyangga
Untuk memastikan hasil terbaik digunakan air dan bahan-bahan kimia dengan kadar kemurnian tinggi. Hal ini bertujuan untuk menyaring
penyangga dengan melewatkannya melalui filter 0,45 µm sebelum digunakan.
Penyangga portal A1 : sodium fosfat 20 mM, NaCl 0,15 M, pH 7. Sedikitnya 500 ml larutan penyangga disiapkan.
c. Pengaturan pemurnian a Pipa pemasukkan diletakkan pada portal A1 8 katup portal dan
portal B 2 katup portal di dalam penyangga. Tiga pipa
pengeluaran berwarna coklat diletakkan di dalam saluran pembuangan.
b Kolom antara portal 1 disambungkan pada katup injeksi 7 katup portal dan saluran UV.
c Rak pengumpul fraksi diisi dengan tabung 18 mm min 25 dan plat putih ditempatkan pada cabang fraksinasi yang berlawanan
dengan tabung pertama. d Contoh dihubungkan antara portal 2 dan 6 dengan katup injeksi
dengan putaran loop yang cukup besar bagi contoh. Bila superloop dibutuhkan tambahan informasi yang dibutuhkan
tersedia dalam petunjuk untuk superloop. e Jarak diatur antara dua saluran pada pencatat ke IV dan kecepatan
hingga 10 mmmin. d. Pendeteksian contoh
a Pencatat diperiksa apakah diatur berdasarkan petunjuk dan siap dioperasikan.
b Volume contoh dimasukkan dan tekan OK untuk memulai perhitungananalisa.
2. Penukar ion
a. Penyiapan contoh Contoh dilewatkan melalui filter berukuran 0,45 µm. Volume sampel
maksimal yang direkomendasikan dengan menggunakan kolom berukuran 1 ml adalah 0,9 ml.
b. Penyiapan penyangga Untuk memastikan hasil terbaik digunakan air dan bahan-bahan kimia
dengan kadar kemurnian tinggi. Hal ini bertujuan untuk menyaring penyangga dengan melewatkannya melalui filter 0,45 µm sebelum
digunakan. Penyangga portal A1 : Tris-Cl 20 mM, NaCl 1 M, variasi pH 5,5;
6,0; 7,0; dan 8,0. Sedikitnya 500 ml larutan penyangga disiapkan.