c. Pengaturan pemurnian a Pipa pemasukkan diletakkan pada portal A1 8 katup portal dan
portal B 2 katup portal di dalam penyangga. Tiga pipa pengeluaran berwarna coklat diletakkan di dalam saluran
pembuangan. b Kolom antara portal 1 disambungkan pada katup injeksi 7 katup
portal dan saluran UV. c Rak pengumpul fraksi diisi dengan tabung 18 mm min 25 dan
plat putih ditempatkan pada cabang fraksinasi yang berlawanan dengan tabung pertama.
d Contoh dihubungkan antara portal 2 dan 6 dengan katup injeksi dengan putaran loop yang cukup besar bagi contoh. Bila
superloop dibutuhkan tambahan informasi yang dibutuhkan tersedia dalam petunjuk untuk superloop.
e Jarak diatur antara dua saluran pada pencatat ke IV dan kecepatan hingga 10 mmmin.
e. Pendeteksian contoh a Pencatat diperiksa apakah diatur berdasarkan petunjuk dan siap
dioperasikan. b Volume contoh dimasukkan dan tekan OK untuk memulai
perhitungananalisa.
5. Penentuan Aktivitas Enzim
Aktivitas enzim diukur menggunakan metode Walter 1988 dimodifikasi.
Tabel 2. Metode analisis aktivitas enzim protease
a
Pereaksi Contoh
μl Blanko μl Standar
μl Kasein 1 dalam larutan
penyangga Tris-Cl pH 8 400 400 400
Enzim dalam CaCl
2
2mM 50
- -
Air suling -
50 -
Tirosin standar 5mM -
- 50
Inkubasi selama 10 menit pada suhu 30
o
C TCA 0.1 moll
500 500
500 Enzim dalam CaCl
2
2 mmoll
- 50 50
Air suling 50
- -
Inkubasi selama 10 menit pada suhu 37
o
C dan dilanjutkan dengan sentrifuse pada 4000 rpm selama 20 menit
Filtrat 400
400 400
Na
2
CO
3
0,15 moll 2000
2000 2000
Pereaksi folin 400
400 400
Inkubasi selama 20 menit pada suhu 37
o
C, kemudian dibaca absorbansinya pada panjang gelombang 578 nm
a
Walter, 1988
Unit aktivitas enzim adalah jumlah enzim yang menghasilkan produk yang setara dengan 1
μmol tirosin per menit pada suhu 37
o
C dan pH 8. Cara menghitung unit aktivitas enzim adalah sebagai berikut. Setiap yang akan
dihitung unit aktivitasnya mempunyai nilai absorban untuk contoh, blanko, dan standar masing-masing, dengan menggunakan rumus di bawah ini dapat
dihitung unit aktivitas dari enzim. U=
T xPx
A A
A A
b st
b sp
1
1 1
− −
