3. Vertex
4. Oven – 50
C 5.
Eppendof 1,5 ml 6.
Freezer – 70 C
7. Inkubatur
8. Collection tube
9. Screw cap 10. Hood Api Bunsen
11. Microcentrifuge 12. PCR
13. Elektroforesa 14. Kamera Polaroid BIO RED
15. Illuminator UV 16. Biosafetycase klas II
17. Miropipet
III. 3. 2. Bahan :
1. Bufer AL
2. Bufer AL+Carrier RNA
3. Qiagen Protease
4. Ethanol
5. Bufer AW 1
Marliana Lubis : Frekuensi Virus Dengue Serotipe 4 Dari Serum Penderita DD BBD Di Rumah Sakit Kota Medan Menggunakan RT-PCR, 2009
USU Repository © 2008
6. Primer Dengue Universal dan TS 2
7. Bufer AW 2
8. Stock Solution dari Primer
9. Bufer AVE
10. Rnase – free water
11. FBS Fatal Bovine Serum
12. Aquadest
13. Mg2SO4
14. Super Cript TMII
15. RT-PCR bufer
16. DNTP mix
17. RT – PCT enzyme mix
18. Free Water
19. Agarose 2
20. Blue Juice
21. Syber Safe
22. TAE Bufer
Ekstrasi RNA
- Persiapan
1. Mempersiapkan Qyagen Protease................1
Marliana Lubis : Frekuensi Virus Dengue Serotipe 4 Dari Serum Penderita DD BBD Di Rumah Sakit Kota Medan Menggunakan RT-PCR, 2009
USU Repository © 2008
• Tambahkan 1,4 ml buffer AVE ke dalam Qyagen Protease
• Campurkan jangan menggunakan Vortex
• Pisahkan ke dalam 5–6 tab, eppenorf, masing-masing sejumlah 250 µl u10
reaksi.......... simpan pada suhu -20 C
2. Mempersiapkan buffer AL..........2
• Tambahkan 310 µl buffer AVE ke dalam tabung berisi “Carrier RNA“
310µl •
Pisahkan ke dalam 5 tab eppendorf masing-masing berisi 62 µl u10 Reaksi •
Simpan pada suhu -20 C
3. Mempersiapkan buffer AW –1
• Tambahkan 25 ml ethanol 96–100 ke dalam buffer AW
• Simpan pada suhu temperatur ruangan
III. 3. 3 Cara Kerja Ekstraksi
Pipet 25 µl Qyagen Protease ke dalam tabung mikrocentrifuge 1,5 ml. Kemudian tambahkan 200 µl sampel kedalam tabung. Tambahkan 200 µl sampel campuran
buffer AL Carrier RNA ke dalam tabung tutup cap dan Vorteks selama 15 detik. Kemudian diinkubasi selama 15‘ dalam 50
C. Setelah itu di Brifly Centrifuge. Lalu tambahkan 250 µl etanol kedalam sampel, tutup cap dan Vortex selama 15 detik
inkubasi pada suhu ruangan 5 menit. Kemudian dilakukan Brifly Centrifuge. Lalu masukkan campuran tersebut kedalam Collum, tutup Cap dan Centrifuge 8000 rpm
Marliana Lubis : Frekuensi Virus Dengue Serotipe 4 Dari Serum Penderita DD BBD Di Rumah Sakit Kota Medan Menggunakan RT-PCR, 2009
USU Repository © 2008
selama 1 menit. Buang Collection tube yang menyambung filtrase, masukkan Collumn ke dalam collection tube baru. Kemudian Cuci dengan buffer baru AW 1
tambahkan 500 µl Buffer AW 1. Centrifuge 800 rpm selama 1 menit. Buang Collection Tube yang mengandung filtrat, masukkan Collection tube baru.
Lalu cuci dengan buffer AW2 tambahkan 500 µl buffer AW2, centrifuge 8000 rpm selama 1menit. Buang Collection Tube yang mengandung filtrat masukkan Collumn
ke dalam Collection tube baru. Lalu Cuci dengan etanol tambahkan 500 µl etanol, Centrifuge 800 rpm selama 1 menit. Buang Collection tube yang mengandung filtrat.
Masukkan Collumn ke dalam Collection tube baru. Kemudian di centrifuge dengan 14.000 rpm selama 3 menit untuk mengeringkan Dry Spi. Lalu masukkan Collumn
ke dalam tube baru. Buka tutupnya, inkubasi dalam 56 C
selama 3 menit. Kemudian buang Collection tube tempat Collumn pada Microcentrifuge 1,5 ml, masukkan 20-
150 µl buffer AV. Buang Collumn simpan RNA yang telah di ekstraksi dalam 70 C.
III. 3. 4. Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction RT – PCR
