29
3.7 Uji Penurunan Kadar Kolesterol 3.7.1 Penyiapan hewan percobaan
Hewan percobaan yang digunakan dalam penelitian adalah marmot jantan dengan berat 300-400 gram berumur 3-4 bulan yang dikondisikan selama 2
minggu dalam kandang yang baik untuk menyesuaikan lingkungan.
3.7.2 Perhitungan besar sampel
Hewan yang digunakan dalam penelitian ini adalah 24 ekor. Dimana 24 ekor marmot jantan tersebut dibagi dalam 6 kelompok uji, yang masing-masing
kelompok uji terdiri dari 4 ekor marmot jantan. Perhitungan besar sampel dihitung dengan rumus Federer Hermawan, 2013 sebagai berikut:
t-1 n-1 ≥ 15
6-1 n-1 ≥ 15
5n-5 ≥ 15
5n ≥ 20
n ≥ 4
keterangan : t : Jumlah kelompok uji
n : Besar sampel per kelompok
3.7.3 Penyiapan bahan
Penyiapan bahan-bahan meliputi kontrol Na-CMC, bahan uji Ekstrak etil asetat daun binahong, obat pembanding Simvastatin.
3.7.3.1 Pembuatan suspensi CMC-Na 0,5 bv
Sebanyak 500 mg CMC-Na ditaburkan ke dalam lumpang berisi air suling panas sebanyak 10 ml, ditutup dan dibiarkan selama 15 menit hingga massa
menjadi transparan, digerus lalu diencerkan dengan air suling hingga 100 ml.
Universitas Sumatera Utara
30
3.7.3.2 Pembuatan suspensi ekstrak daun binahong
Daun ekstrak etil asetat daun binahong ditentukan berdasarkan orientasi hewan percobaan, yaitu dosis 100 mgkgbb, 200 mgkgbb, 400 mgkgbb. Dosis I
100mgkgbb, dosis II 200 mgkgbb, dosis III 400mgkgbb.
Cara kerja : Ekstrak etil asetat daun binahong masing-masing sebanyak 100 mg, 200 mg dan 400 mg dimasukkan ke dalam lumpang yang berisi sedikit
suspensi Na-CMC 0,5 digerus homogen lalu dicukupkan dengan suspensi Na- CMC 0,5 hingga 10 ml.
3.7.3.3 Pembuatan suspensi simvastatin
Sebanyak 50 mg simvastatin digerus dalam lumpang, lalu ditambahkan suspensi Na-CMC 0,5 sedikit demi sedikit sambil terus digerus hingga
homogen, lalu dicukupkan dengan suspensi Na-CMC 0,5 hingga 625 ml.
3.7.4 Penyiapan hewan yang hiperkolesterolemia
Hewan yang digunakan pada penelitian ini adalah marmot yang sehat dan dewasa sebanyak 24 ekor yang terlebih dahulu dikarantina selama 2 minggu untuk
menyesuaikan diri dengan lingkungannya. Diukur kadar kolesterol awalnya lalu sengaja dibuat hiperkolesterolemia dengan cara memberikan makanan induksi
berupa kuning telur dosis 1 bb diberikan selama 14 hari berturut-turut yang dicampur dengan lemak kambing 15 g sebanyak sehari sekali secara oral serta
diberi pakan biasa Pane, 2011. Diukur kadar kolesterolnya.
3.7.5 Pengujian efek penurun kadar kolesterol
Pengujian efek penurunan kadar kolesterol menggunakan dosis ekstrak daun binahong 100 mgkgbb, 200 mgkgbb, 400 mgkgbb dengan pembanding
suspensi simvastatin dosis 0,80 mgkgbb marmot dan kontrol suspensi CMC-Na 0,5.
Universitas Sumatera Utara
31
3.7.5.1 Pemberian suspensi kontrol, suspensi ekstrak daun binahong dan suspensi simvastatin pada marmot
Marmot dibagi menjadi 6 kelompok disetiap kelompok terdiri dari 4 marmot jantan, dimana kelompok pertama adalah normal, tidak mendapatkan
perlakuan sebagai kontrol -. Kelompok kedua diberikan suspensi simvastatin sebagai kontrol +. Kelompok ketiga diberikan suspensi Na-CMC 0,5 sebagai
kontol pelarut. Kelompok keempat diberikan suspensi ekstrak etil asetat daun binahong dosis 100 mgkgbbhari. Kelompok kelima diberikan suspensi ekstrak
etil asetat daun binahong dosis 200 mgkgbbhari. Kelompok keenam diberikan suspensi ekstrak etil asetat daun binahong 400 mgkgbbhari. Marmot yang telah
diinduksi kolesterol selama 14 hari, pada hari ke-14 diambil darahnya dan marmot yang berada pada kondisi hiperkolesterolemia diberikan obat dan ekstrak etil
asetat daun binahong pada hari ke-14 setelah pengambilan darah, hari ke-15 dan hari ke-16, kemudian diambil lagi darahnya pada hari ke-17 sebelum pemberian
simvastatin dan ekstrak etil asetat daun binahong. Marmot masih diberikan simvastatin dan ekstrak etil asetat daun binahong pada hari ke-17,18,19,20 hingga
pengambilan darah pada hari ke-21 Pane, 2011. Selama pemberian simvastatin dan ekstrak etil asetat daun binahong marmot diberikan makanan pakan biasa.
3.7.5.2 Pengambilan darah
Sebelum pengambilan darah marmot dipuasakan selama 10-18 jam tidak makan tetapi masih tetap diberi minum. Kuku marmot dipotong dengan
pemotong kuku sampai berdarah, kemudian diambil ± 0,5 ml darah ditampung dalam microtube. Darah disentrifuge selama 15 menit dengan kecepatan 3000 rpm
sehingga terbentuk dua lapisan yaitu bagian serum dan padatan. Diambil bagian serum.
Universitas Sumatera Utara
32
3.7.5.3 Penetapan kadar kolesterol serum darah marmot
Serum dipipet sebanyak 0,01 ml kemudian dimasukkan ke dalam tabung yang berisi reagensia kolesterol sebanyak 1 ml, lalu di inkubasi pada suhu 25
o
C selama 10 menit. Kadar kolesterol diukur menggunakan alat microlab pada
panjang gelombang 546 nm.
3.8 Analisis Data
