21 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta BAB 3
METODE PENELITIAN
3.1. Waktu dan Tempat
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Teknologi Gen, Balai Pengkajian Bioteknologi-BPPT Serpong, Tangerang, dari bulan Maret 2013
hingga bulan Januari 2014.
3.2. Alat dan Bahan 3.2.1. Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah pisau steril [Vidrex], pipet mikro 0,1-2µL, 2-20 µL, 20-200 µL, 100-1000 µL [Nichipet EX], tips 10 µL, 100
µL, 1000 µL, tabung sentrifugasi 1,5 m, tabung mikrosentrifugasi 200 µl [Axygen], rak tabung, mesin micro sentrifuge [TOMY MX-301], timbangan
analitik [ADAM
®
], ice maker [HOSHIZAKI], vortex [Heidolph], magnetic stirrer, inkubator [Memmert], spatula, kulkas [Toshiba], autoclave, freezer -20
o
C [Angelantoni Scientifica], lemari pendingin 4
o
C [Iberma], microwave [National], satu set elektroforesis [Mupid
®
-2Plus], gel documentation, Spektrofotometer Nano Drop [ND-1000], dan Insulated Isothermal PCR. Alat gelas yang digunakan
adalah gelas ukur 100 ml, Labu Erlenmeyer 250 ml, gelas Beaker [Pyrex], kaca
arloji, dan batang pengaduk. 3.2.2. Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daging babi segar dan daging sapi segar yang didapatkan dari pasar swalayan di Lebak Bulus. Bahan lain
seperti cell lysis buffer Tris-EDTA pH 8 dan SDS 1 vv, proteinase K, RNAse A, NaCl 5M, fenol, kloroform, isoamilalkohol, etanol 70, etanol absolut, Na
asetat, agarosa, buffer TAE, loading dye 6x , Sybr Safe, free nuclease water, Go Taq Green Master Mix®, primer babi, primer sapi, probe babi, probe sapi, dNTP,
KAPPA 2G Robust, buffer ii-PCR.
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 3.3. Tahapan Penelitian
1. Pengumpulan sampel daging babi dan daging sapi. 2. Isolasi DNA daging babi dan DNA daging sapi.
3. Cek keberadaan DNA babi dan DNA sapi dengan elektroforesis. 4. Optimasi suhu annealing primer dengan PCR konvensional.
5. Uji spesifitas dan sensitivitas primer dengan PCR konvensional. 6. Optimasi komposisi ii-PCR untuk amplifikasi DNA babi dan DNA sapi.
3.4. Prosedur Kerja 3.4.1. Isolasi dan Purifikasi DNA pada Daging Sapi dan Daging Babi.
Kategori