23 dengan 1000 ml aquadem, dipanaskan di atas hot plate sampai mendidih, di
sterilkan di dalam autoklaf dengan pH 6,6 ± 0,1.
3.4.2 Pembuatan larutan dapar fosfat III
Dilarutkan 8,36 g kalium dihidrogen fosfat dalam 500 ml aquadem. Atur pH hingga syarat 8,0 ± 0,1 dengan kalium hidroksida 10 N dan asam fosfat 18 N.
3.4.3 Pembuatan larutan baku pembanding kerja
Ditimbang baku pembanding sesuai dengan potensi yang ada pada etiket setara dengan 1000 mcgml. Masukkan kedalam labu 50 ml, tambahkan pelarut
±25 ml diletakkan diatas Ultrasonic selama 15 menit lalu tambahkan pelarut sampai garis tanda.
Untuk larutan standar 1 S1 dipipet sebanyak 0,64 ml, S2 dipipet sebanyak 0,8 ml, S3 dipipet sebanyak 1 ml, S4 dipipet sebanyak 1,25 ml, S5
dipipet sebanyak 1,56 ml, larutan diatas, masukkan ke dalam labu tentukur 10 ml cukupkan dengan Larutan Dapar Fosfat LDF III sampai garis tanda lalu
homogenkan. Dimasukkan kedalam vial yang berbeda untuk setiap larutan standar.
3.4.4 Pembuatan larutan uji
Timbang 1 g krim Betason-N dalam beker gelas 50 ml. Tambahkan 5 ml larutan dapar fosfat LDF III, panaskan diatas hot plate, biarkan hingga larut.
Masukkan ke dalam labu 10 ml lalu tambahkan pelarut sampai garis tanda. Saring dan ambil filtratnya.
3.4.5 Penandaan cawan petri
Kelompokkan cawan petri menjadi 5 kelompok, masing-masing terdiri
24 dari 3 cawan petri. Pada bagian bawah bagian luar cawan petri beri tanda
titik 6 buah ring dengan 3 titik untuk S1 dan 3 titik untuk S3 secara selang-seling. Pada bagian bawah sebelah luar cawan petri kelompok 2, beri tanda titik 6 buah
ring dengan 3 buah untuk S2 dan 3 buah untuk S3 secara berselang-seling. Seterusnya sampai S4, S5 dan U.
3.4.6 Pembuatan inokulum
Bakteri Staphylococcus epidermidis dengan nomor ATCC 12228 di biakkan ke dalam media non selektif. Digariskan ke dalam tabung reaksi, inkubasi
selama 24 jam pada suhu 35
°
C. Siapkan media antibiotik no.1 sebanyak 250 ml masukkan kedalam botol roux. Pada biakan bakteri ditambahkan 3 ml NaCl 0,9
dikocok sampai larut lalu masukkan ke dalam tabung reaksi. Inkubasi selama 1 minggu pada suhu 35-37
o
C. Setelah 1 minggu ke dalam botol roux ditambahkan 40 ml larutan NaCl 0,9, kocok sampai semua bakteri terlarut. Pindahkan
suspensi bakteri ke dalam erlenmeyer 250 ml. Simpan di dalam lemari pendingin suhu 2-8
°
C dengan masa simpan 1 bulan.
3.4.7 Penyiapan media
