UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3.3.4 Preparasi Bakteri Uji
3.3.4.1 Purifikasi dan Karakterisasi Bakteri Uji pada Media Luria Bertani
Agar
Tujuan dilakukan purifikasi bakteri uji adalah untuk memurnikan biakan bakteri uji dari kultur murni S. aureus. Teknik yang digunakan adalah Streak
Plate. Jarum ose dipanaskan terlebih dahulu hingga berpijar, dan didinginkan. Kemudian bakteri diambil dari kultur murni dan digoreskan pada media luria
bertani agar lalu diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam Deby et al., 2010 dan dilakukan pengamatan secara morfologis terhadap bakteri uji yang telah
dipurifikasi serta dilakukan karakterisasi bakteri dengan pewarnaan Gram.
3.3.4.2 Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Diambil sebanyak satu ose bakteri uji yang telah dipurifikasi pada media luria bertani agar dan dimasukkan ke dalam tabung berisi 10 mL media heterotrof
HTR cair dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37
°
C. Tabung yang berisi kultur cair bakteri uji divorteks kemudian diukur nilai optical dencity Absorbansi
OD
600
untuk mengetahui konsentrasi suspensi bakteri tersebut Bjarnsholt, Thomas et al., 2011. Seluruh pengerjaan preparasi bakteri uji dilakukan secara
aseptis di dalam Laminar Air Flow LAF yang sebelumnya telah dibersihkan dengan alkohol, lalu disterilkan dengan UV yang dinyalakan selama lebih kurang
2 jam sebelum digunakan.
3.3.5 Optimasi Waktu Pembentukan Biofilm S. aureus
Pengujian dilakukan
menggunakan microtitierplate
flat-bottom polystyrene 96 wells, dengan cara memasukkan sebanyak 200 µL suspensi bakteri
ke dalam tiap wells kemudian di optimasi waktu inkubasinya. Bertujuan untuk mendapatkan waktu inkubasi optimal dalam membentuk biofilm. Variasi waktu
inkubasi yang digunakan adalah 1, 2, 3, dan 4 hari. Setelah masa inkubasi, microplate dicuci menggunakan air mengalir sebanyak 3 kali, kemudian
ditambahkan 200 µL larutan kristal violet 1 ke tiap well dan diinkubasi pada suhu ruang selama 15 menit. Microplate dicuci kembali dengan menggunakan air
mengalir sebanyak 3 kali. Larutan etanol 96 sebanyak 200 µL dimasukkan ke
Kategori