21 proteolitik mampu menginduksi sitolisis sel HeLa, tetapi tidak berpengaruh
terhadap sel non-kanker UtSMC human uterine smoot muxcle cells
2.4. SDS PAGE
Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrilamid Gel Electroforesis 2.4.1. Prinsip Dasar
Elektroforesis merupakan proses bergeraknya molekul bermuatan pada suatu medan listrik. Kecepatan molekul-molekul yang bergerak dalam medan
listrik bergantung pada muatan, bentuk dan ukuran. Dengan demikian elektroforesis dapat digunakan untuk separasi makromolekuler seperti protein
dan asam nukleat. Posisi molekul yang tersparasi pada gel dapat dideteksi dengan pewarnaan autoradiografi, ataupun dilakukan dengan densitometer Ikmalia,
2008. Salah satu metode elektroforesis yang umumnya digunakan untuk analisa
campuran protein secara kualitatif adalah SDS‐PAGE Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrilamid Gel Electroforesis
. Prinsip penggunaan metode ini adalah pembentukan polimer dari komponen akrilamida dengan ikatan silamg
N.N` bisakrilamida. Kisi-kisi
tersebut berfungsi
sebagai saringan molekul sehingga konsentrasi atau rasio akrilamida dengan bisakrilamida dapat
diatur untuk mengoptimalkan migrasi komponen protein Wilson dan Walker, 2000.
Elektroforesis gel SDS dilakukan pada pH netral dengan adanya SDS dan β
-merkaptoetanol. Dengan adanya SDS, protein rantai ganda akan terdisosiasi menjadi rantai-rantai individual dan terdenaturasi oleh detergen ini, sehingga
susunan yang tadinya teratur dan berbentuk tiga dimensi menjadi rusak
22 membentuk konfigurasi random coil. Peristiwa ini dibantu dengan adanya β-
merkaptoetanol yang memutus ikatan disulfida antar ataupun dalam rantai mereduksi ikatan disulfida menjadi gugus sulfihidril. Di samping itu, SDS
berikatan dengan protein membentuk kompleks SDS-Protein yang tidak memiliki struktur sekunder dan membawa muatan negatif yang diakibatkan oleh adanya
gugus-gugus anion dari SDS Nur et al., 1992.
2.4.2. Aplikasi SDS-PAGE
SDS PAGE dapat diaplikasikan berdasarkan kegunaannya antara lain Ikmalia, 2008 :
1. Menentukan berat molekul estimasi. Penetapan BM secara lebih teliti dapat
dilakukan dengan ultrasentrifuge, meskipun dengan elektroforesis sudah memenuhi syarat.
2. Dapat mendeteksi terjadinya pemalsuan bahan.
3. Dapat mendeteksi terjadinya kerusakan bahan seperti protein dalam
pengolahan dan penyimpanan. 4.
Untuk memisahkan spesies molekul yang berbeda secara kualitatif maupun kuantitatif, yang selanjutnya masing-masing spesies dapat dianalisis.
5. Menetapkan titik isoelektrik protein.
Keunggulan dari SDS PAGE adalah pita protein yang terbentuk menjadi lebih stabil dikarenakan adanya medium penyangga yaitu gel poliakrilamida,
bersifat transparan sehingga dapat diamati dengan mudah, dapat memperoleh resolusi yang lebih baik dan ukuran pori dapat diatur sehingga pemisahan
senyawa dapat lebih optimal Nur et al., 1992. Meskipun SDS PAGE paling
23 sering digunakan dalam elektroforesis gel untuk analisis protein, tapi tidak dapat
digunakan untuk menganalisa sejumlah protein kompleks yang diperlukan aktifitas biologi dari protein untuk pengujian protein selanjutnya. Hal ini
disebabkan karena protein yang telah di elektroforesis telah mengalami denaturasi Hames, 1998.
24
BAB III METODE PENELITIAN
3.1. Waktu dan Tempat Penelitian
