19
BAB III METODE PENELITIAN
3.1 Lokasi Penelitian
Penelitian dilakukan di Laboratorium Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara dan Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara.
3.2 Jenis Penelitian
Metode penelitian dilakukan secara eksperimental meliputi pengumpulan dan pengolahan sampel, karakterisasi simplisia, uji pendahuluan, pembuatan
ekstrak, isolasi senyawa saponin menggunakan KLT preparatif. Isolat yang diperoleh dikarakterisasi dengan spektrofotometer inframerah IR dan
spektrofotometer ultraviolet UV-Vis.
3.3 Alat-Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi alat-alat kaca laboratorium, alumunium foil, alat penguap vakum putar Boeci 461, bejana,
blender Philips, botol kaca, cawan porselen, eksikator, hair dryer Maspion, jeriken, kain flanel, klem, kompor, kurs porselen, labu Sterling-Bidwell Pyrex,
mikroskop Olympus, mixture vibrator, neraca analitik Vibra AJ, neraca kasar Homeline, oven listrik Memmert, penangas air, penyemprot, plastik bening,
plat kaca 20x20 cm, plat pra lapis silika GF 254, spatula, spektrofotometer inframerah Shimadzu, spektrofotometer ultraviolet Shimadzu, statif, sudip,
tanur Nabertherm, toples kaca, tutup karet, vial.
Universitas Sumatera Utara
20
3.4 Bahan-Bahan
Bahan-bahan yang digunakan adalah daun buni Antidesma bunius L. Spreng. dan bahan-bahan kimia merek Merck yang digunakan kecuali dinyatakan
lain berkualitas pro analisis yaitu α-naftol, amil alkohol, amonia pekat, asam asetat anhidrida, asam klorida pekat, asam sulfat pekat, besi III klorida, bismut
III nitrat, etilasetat, iodium, isopropanol, kalium iodida, kloroform, metanol, n- heksana, natrium hidroksida, natrium sulfat anhidrida, raksa II klorida, serbuk
magnesium, timbal II asetat dan toluena. Air suling dan etanol hasil destilasi.
3.5 Pembuatan Larutan Pereaksi
Pembuatan larutan pereaksi dibawah ini menurut Ditjen POM RI, 1995.
3.5.1 Pereaksi asam klorida 2 N
Sebanyak 17 ml asam klorida pekat diencerkan dengan air suling hingga 100 ml.
3.5.2 Pereaksi natrium hidroksida 2 N
Sebanyak 8,002 g natrium hidroksida dilarutkan dalam air suling bebas karbon dioksida hingga 100 ml.
3.5.3 Pereaksi Bouchardat
Sebanyak 4 g kalium iodida ditimbang, kemudian dilarutkan dalam air suling, ditambahkan iodium sebanyak 2 g dan dicukupkan dengan air suling
hingga 100 ml.
3.5.4 Pereaksi Mayer
Larutan raksa II klorida P 2,27 bv sebanyak 60 ml dicampur dengan 10 ml larutan kalium iodida P 50 bv, kemudian ditambahkan air suling
secukupnya hingga 100 ml.
Universitas Sumatera Utara
21
3.5.5 Pereaksi Dragendorff
Larutan bismut nitrat P 40 bv dalam asam nitrat P sebanyak 20 ml dicampur dengan 50 ml kalium iodida P 54,4 bv, didiamkan sampai memisah
sempurna. Lalu diambil lapisan jernih dan diencerkan dengan air suling secukupnya hingga 100 ml.
3.5.6 Pereaksi besi III klorida 1
Sebanyak 1 g besi III klorida dilarutkan dalam air suling hingga 100 ml.
3.5.7 Pereaksi Liebermann-Burchard
Sebanyak 20 bagian asam asetat anhidrat dicampurkan dengan 1 bagian asam sulfat pekat. Larutan penyemprotnya dibuat dengan 20 bagian asam asetat
anhidrida dengan 1 bagian asam sulfat pekat dan 50 bagian kloroform. Larutan penyemprot ini harus dibuat baru.
3.5.8 Pereaksi Molisch
Sebanyak 3 g α-naftol dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N hingga diperoleh volume 100 ml.
3.5.9 Larutan air-kloroform
Sebanyak 2,5 ml kloroform dikocok dengan 900 ml air suling, encerkan dengan air suling hingga 1000 ml.
3.5.10 Larutan kloralhidrat
Sebanyak 50 gram kloralhidrat ditimbang dan dilarutkan dalam 20 ml air suling.
3.5.11 Larutan pereaksi timbal II asetat 0,4 N
Sebanyak 15,17 gram timbal II asetat dilarutkan dalam air suling bebas karbondioksida secukupnya hingga 100 ml.
Universitas Sumatera Utara
22
3.5.12 Pereaksi asam sulfat 50 dalam metanol
Sebanyak 5 ml asam sulfat pekat ditambahkan hati-hati kepada 5 ml metanol.
3.5.13 Pereaksi asam nitrat 0,5 N
Sebanyak 3,4 ml asam nitrat pekat diencerkan dengan air suling hingga 100 ml.
3.6 Pengambilan dan Pengolahan Sampel 3.6.1 Pengambilan sampel
Pengambilan sampel dilakukan secara purposif tanpa membandingkan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Sampel yang digunakan dalam penelitian
ini adalah daun buni segar yang diambil dari Jalan Suwondo, Kecamatan Medan Polonia, Provinsi Sumatera Utara.
3.6.2 Identifikasi tumbuhan
Identifikasi daun tumbuhan buni dilakukan di Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia LIPI Pusat Penelitian dan Pengembangan Biologi-Bogor.
3.7 Pengolahan Sampel
Daun buni disortir dan dipisahkan antara ranting pohon dan daun, dibersihkan dari pengotor dengan air mengalir, ditiriskan dan dikeringkan.
Simplisia dinyatakan kering bila diremas akan mudah hancur, kemudian simplisia dihaluskan atau dijadikan serbuk menggunakan blender dan ditimbang,
selanjutnya disimpan dalam wadah bersih yang tertutup rapat dan di tempat yang sejuk.
Universitas Sumatera Utara
23
3.8 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia
Kategori