Penetapan Kadar Campuran Teofilin dan Efedrin Hidroklorida dalam Sediaan Tablet dengan Metode Spektrofotometri Derivatif

Lampiran 1. Sampel Grafasma® dan Ifasma® Tablet

1. Merek Grafasma®

Gambar 1. Grafasma® tablet

2. Merek Ifasma®

Lampiran 2. Komposisi Tablet Grafasma® dan Ifasma®

Daftar Spesifikasi Sampel

1. Grafasma® (PT. Graha Farma) No. Reg : DKL9231102410A1 Expire Date : September 2017

Komposisi : Theophylline…………... 130 mg Efedrine HCl……….………. 10 mg 2. Ifasma® (PT. Ifars)

No. Reg : DKL7609203410A1 Expire Date : Oktober 2015

Komposisi : Theophylline …………... 130 mg Ephedrine HCl………. 10 mg

Lampiran 3. Gambar Alat

Gambar 3. Spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu 1800)

Gambar 4. Neraca analitik (Mettler Toledo)

Lampiran 4. Perhitungan Pembuatan HCl 0,1N

HCl pekat = 37% setara dengan 12 N V1 x N1 = V2 x N2

V1 x 12 N = 1000 mL x 0,1 N

V1 = 12N

N 1 , 0

ml 1000

x

Lampiran 5. Bagan Alir Prosedur Penelitian

Dimasukkan ke labu 10mL dan

dicukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda Dimasukkan Dimasukkan ke labu 10mL dan dicukupkan HCl 0,1 N sampai garis tanda Dimasukkan ke labu 10mL dan dicukupkan HCl 0,1 N sampai garis tanda Dimasukkan ke labu 10mL dan dicukupkan HCl 0,1 N sampai garis tanda diambil 2,5 mL

dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 mL

dilarutkan dan dicukupkan dengan HCL 0,1N

LIB II Teofilin 100 μg/mL

4 μg/mL 8 μg/mL 10 μg/mL 12 μg/mL

diambil 0,4 mL diambil 0,8 mL diambil 1 mL

diambil 0,6 mL

Diambil 1,2 mL

diukur serapan maksimum

pada λ 200 -Teofilin

ditimbang 50 mg

dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL

dilarutkan dan dicukupkan dengan HCL 0,1N

Lampiran 5. (Lanjutan)

Dimasukkan ke labu 10mL dan dicukupkan HCl 0,1 N sampai garis tanda Dimasukkan ke labu 10mL dan dicukupkan HCl 0,1 N sampai garis tanda Dimasukkan ke labu 10mL dan dicukupkan HCl 0,1 N sampai garis tanda Dimasukkan ke labu 10mL dan dicukupkan HCl 0,1 N sampai garis tanda diambil 2,5 mL

dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 mL

dilarutkan dan dicukupkan dengan HCL 0,1N

LIB II Efedrin HCl 100 μg/mL

2 μg/mL 5 μg/mL 4 μg/mL 6 μg/mL

diambil 0,2 mL diambil 0,5 mL diambil 0,4 mL Diambil 0,6 mL Efedrin HCl

ditimbang 50 mg

dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL

dilarutkan dan dicukupkan dengan HCL 0,1N

Lampiran 5. (Lanjutan)

Persamaan Regresi

dibuat kurva kalibrasi Larutan Standar Teofilin

(4; 6; 8; 10; 12 μg/mL )

diukur serapan pada λ 200-400 nm ditransformasikan ke serapan derivat pertama

ditransformasikan ke serapan derivat kedua

ditentukan zero crossing ditentukan panjang gelombang analisis

Lampiran 5. (Lanjutan)

Persamaan Regresi

dibuat kurva kalibrasi Larutan Standar Efedrin HCl

(2; 3; 4; 5; 6 μg/mL)

diukur serapan pada λ 200-400 nm ditransformasikan ke serapan derivat pertama

ditransformasikan ke serapan derivat kedua

ditentukan zero crossing ditentukan panjang gelombang analisis

Lampiran 5. (Lanjutan)

ditimbang

digerus dalam lumpang sampai halus dan homogen

ditimbang setara 50 mg teofilin

dihitung kesetaraan efedrin HCl yang terkandung didalamnya (penimbangan dilakukan sebanyak 6 kali pengulangan)

dimasukkan kedalam labu tentukur 50 mL dilarutkan dengan HCl 0,1N

dihomogenkan dengan sonikator selama 15 menit dicukupkan dengan HCl 0,1N sampai garis tanda dihomogenkan

disaring

dibuang ± 10 mL filtrat pertama filtrat selanjutnya ditampung dipipet 0,08 mL

ditambahkan 0,44 mL larutan efedrin HCl (untuk adisi)

dimasukkan kedalam labu tentukur 10 mL

dicukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda diukur pada λ 244,2 nm untuk teofilin dan 213,8 nm untuk efedrin HCl

Nilai Absorbansi 20 tablet

Lampiran 6. Spektrum Serapan Teofilin Baku dan Efedrin HCl Baku a. Teofilin

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

bs.

0.80000

0.60000

0.40000

0.20000

Lampiran 6. (Lanjutan)

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

1.80000

1.50000

1.00000

0.50000

0.00000 -0.10000

Lampiran 6. (Lanjutan) b. Efedrin HCl

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.25000

0.20000

0.10000

0.00000

Lampiran 6. (Lanjutan)

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.50000

0.40000

0.20000

0.00000 -0.05000

Lampiran 7. Spektrum Serapan Derivat Pertama Teofilin dan Efedrin HCl

a. Teofilin

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

bs.

0.04000

0.02000

0.00000

-0.02000

Lampiran 7. (Lanjutan)

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.12000 0.10000

0.05000

0.00000

-0.05000

Lampiran 7. (Lanjutan) b. Efedrin HCl

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

bs.

0.00300

0.00000

-0.00500

Lampiran 7. (Lanjutan)

nm .

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

bs.

0.00900

0.00000

-0.01000

-0.02000

Lampiran 8. Spektrum Serapan Derivat Kedua Teofilin dan Efedrin HCl a. Teofilin

nm .

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

bs.

0.00600 0.00500

0.00000

-0.00500

-0.01000 -0.01100

Lampiran 8. (Lanjutan)

nm .

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

bs.

0.01500

0.00000

-0.02000

-0.04000

Lampiran 8. (Lanjutan) b. Efedrin HCl

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

bs.

0.00400

0.00200

0.00000

Lampiran 8. (Lanjutan)

nm .

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

bs.

0.00700

0.00500

0.00000

-0.00500 -0.00600

Lampiran 9. Spektrum Serapan Panjang Gelombang Analisis Teofilin dan

Efedrin HCl

nm .

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

bs.

0.01500 0.01000

0.00000

-0.01000

-0.02000

Lampiran 10. Data Kalibrasi Teofilin BPFI, Persamaan Regresi dan Koefisien

Korelasi

Kalibrasi serapan derivat kedua teofilin pada panjang gelombang 244,20 nm

No. Konsentrasi (μg/mL) (X) Absorbansi (Y)

1. 0,0000 0,00000

2. 4,0000 0,00119

3. 6,0000 0,00175

4. 8,0000 0,00232

5. 10,0000 0,00289

6. 12,0000 0,00350

Perhitungan persamaan garis regresi

No. X Y XY X2` Y2

1. 0,00000 0,00000 0,00000 0,00000 0,0000000000 2. 4,00000 0,00119 0,00476 16,00000 0,0000014161 3. 6,00000 0,00175 0,01050 36,00000 0,0000030625 4. 8,00000 0,00232 0,01856 64,00000 0,0000053824 5. 10,00000 0,00289 0,02890 100,00000 0,0000083521 6. 12,00000 0,00350 0,04200 144,00000 0,0000122500

ΣX = 40 =6,666667

ΣY = 0,01165 = 0,00194

ΣXY = 0,10472 ΣY

2

= 360 Σ Y

2

= 0,0000304631

Lampiran 10. (Lanjutan)

Perhitungan Koefisien Korelasi ( )

=

0,9999

Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua teofilin pada panjang gelombang 244,20 nm adalah 0,9999.

Lampiran 11. Data Kalibrasi Efedrin HCl, Persamaan Regresi dan Koefisien

Korelasi

Kalibrasi serapan derivat kedua efedrin HCl pada panjang gelombang 213,80 nm

No. Konsentrasi (μg/mL) (X) Absorbansi (Y)

1. 0,00000 0,00000

2. 2,00000 0,00124

3. 3,00000 0,00182

4. 4,00000 0,00231

5. 5,00000 0,00290

6. 6,00000 0,00348

Perhitungan Persamaan Garis Regresi

No. X Y XY` X2 Y2

1. 0,00000 0,00000 0,00000 0,00000 0,00000 2. 2,00000 0,00124 0,00248 4,00000 1,5376.10-6 3. 3,00000 0,00182 0,00546 9,00000 3,3124.10-6 4. 4,00000 0,00231 0,00924 16,00000 5,3361.10-6 5. 5,00000 0,00290 0,01450 25,00000 8,41.10-6 6. 6,00000 0,00348 0,02088 36,00000 12,1104.10-6

ΣX = 20

=3,333

ΣY = 0,01175

= 0,00196

ΣXY =

0,05256 ΣX

2

= 90 ΣY

2

= 30,7065.10-6

Lampiran 11. (Lanjutan)

Perhitungan Koefisien Korelasi ( )

Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua efedrin HCl pada panjang gelombang 213,80 nm adalah 0,9993.

Lampiran 12. Perhitungan Batas Deteksi (Limit of Detection, LOD) dan Batas

Kuantitasi (Limit of Quantitation, LOQ) Teofilin Persamaan garis regresi teofilin adalah

No. X Y Yi Y-Yi (10-5) (Y-Yi)2 (10-10)

1 0,00000 0,00000 0,00001 -1 1

2 4,00000 0,00119 0,00117 2 4

3 6,00000 0,00175 0,00175 0 0

4 8,00000 0,00232 0,00233 -1 1

5 10,00000 0,00289 0,00291 -2 4

6 12,00000 0,00350 0,00349 1 1

Σ(Y-Yi)2 11

1,6583.10-5

0,1715 μg/mL

Lampiran 13. Perhitungan Batas Deteksi (Limit of Detection, LOD) dan Batas

Kuantitasi (Limit of Quantitation, LOQ) Efedrin HCl Persamaan garis regresi efedrin HCl adalah Y = 0,00057X + 0,00005

No. X Y Yi Y-Yi (10-5) (Y-Yi)2 (10-10)

1 0,00000 0,00000 0,00005 -5 25

2 2,00000 0,00124 0,00119 5 25

3 3,00000 0,00182 0,00176 6 36

4 4,00000 0,00231 0,00233 -2 4

5 5,00000 0,00290 0.00290 0 0

6 6,00000 0,00348 0,00347 1 1

Σ (Y-Yi)2 102

5,0498 .10-5

0,2658 μg/mL 0,8859 μg/mL

Lampiran 14. Spektrum Serapan Derivat Kedua Sampel

nm .

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

Ab

s.

0.04000

0.03000

0.02000

0.01000

0.00000

Lampiran 14. (Lanjutan)

nm .

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

Ab

s.

0.04000

0.03000

0.02000

0.01000

0.00000

Lampiran 14. (Lanjutan)

nm .

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

Ab

s.

0.04000

0.03000

0.02000

0.01000

0.00000

Lampiran 14. (Lanjutan)

nm .

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

Ab

s.

0.02000

0.01000

0.00000

Lampiran 15. Hasil Analisis Kadar Teofilin dan Efedrin HCl dalam Tablet

1. Kadar teofilin dalam sediaan tablet (mengandung 130 mg teofilin dalam satu tablet) Nama Sediaan Penimba-ngan (g) Setara (mg) Absorbansi pada λ = 244,2 nm

Konsentra- si teoritis

(μg/mL)

Konsentra-si teofilin (μg/mL)

Kadar % Kadar (mg) G R A F A S M A® (PT. GraHa Farma)

0,0811 49,5197 0,00232 7,9232 7,9655 100,45 130,58 0,0819 50,0082 0,00234 8,0013 8,0345 100,33 130,43 0,0820 50,0693 0,00232 8,0111 7,9655 99,35 129,15 0,0819 50,0082 0,00232 8,0113 7,9655 99,47 129,31 0,0817 49,8861 0,00229 7,9818 7,8621 98,42 127,95 0,0825 50,3746 0,00238 8,0599 8,1724 101,31 131,70

I F A S M A® (PT. Ifars)

0,1262 49,9604 0,00234 7,9937 8,0345 100,43 130,56 0,1260 49,8812 0,00236 7,9810 8,1034 101,45 130,18 0,1262 49,9604 0,00232 7,9937 7,9655 99,57 129,44 0,1263 50,0000 0,00233 8,0000 8,0000 99,92 129,89 0,1265 50,0792 0,00227 8,0127 7,7931 97,18 126,33 0,1260 49,8812 0,00227 7,9810 7,7931 97,56 126,82

Lampiran 15. (Lanjutan)

2. Kadar efedrin HCl dalam sediaan tablet (mengandung 10 mg efedrin HCl dalam satu tablet) Nama Sediaan Penimban-gan (g) Setara (mg) Absorban- si pada λ=213,8 nm Konsentra-si teoritis (μg/mL)

Konsentrasi efedrin HCl

(μg/mL)

Kadar % Kadar (mg) G R A F A S M A® (PT. GraHa Farma)

0,0811 3,8092 0,00222 3,9958 3,8070 95,97 9,59 0,0819 3,8468 0,00231 4,0007 3,9649 97,66 9.76 0,0820 3,8515 0,00231 4,0055 3,9649 98,86 9,88 0,0819 3,8468 0,00231 4,0007 3,9649 99,43 9,94 0,0817 3,8374 0,00232 3,9909 3,9825 99,65 9,96 0,0825 3,8750 0,00239 4,0300 4,1052 101,73 10,17

I F A S M A® (PT. Ifars)

0,1262 3,8431 0,00228 3,9968 3,9123 97,76 9,77 0,1260 3,8370 0,00223 3,9905 3,8246 95,72 9,57 0,1262 3,8431 0,00222 3,9968 3,8070 95,13 9,51 0,1263 3,8462 0,00224 4,0000 3,8421 95,93 9,59 0,1265 3,8522 0,00231 4,0063 3,9649 98,84 9,88 0,1260 3,8370 0,00224 3,9905 3,8421 96,16 9,61

Lampiran 16. Contoh Perhitungan Kadar Teofilin dan Efedrin HCL dalam

Sediaan Tablet

i.) Perhitungan volume analisis untuk teofilin dan efedrin HCl

Sediaan tablet yang digunakan tablet Grafasma® dan Ifasma® yang mengandung teofilin 130 mg dan efedrin HCl 10 mg

Berat 20 tablet Grafasma® = 4,2581 g

Ditimbang serbuk setara dengan 50 mg teofilin, maka jumlah serbuk yang ditimbang adalah;

x

1 x 4,2581g

= 0,0819 g

Kemudian dihitung kesetaraan efedrin HCl yang terkandung dalam 0,0819 g serbuk.

x

2 x (20 x 10 mg)

= 3,8468 mg

Dilarutkan 0,0819 g serbuk dalam HCl 0,l N dalam labu tentukur 50 mL sampai garis tanda. Larutan kemudian dihomogenkan, disaring, lebih kurang 10 mL filtrat pertama dibuang. Filtrat selanjutnya ditampung (larutan A).

Konsentrasi teofilin larutan A x 1000 μg = 1000 μg/mL Konsentrasi efedrin HCl larutan A x 1000 μg = 77 μg/mL

Lampiran 16. (Lanjutan)

Konsentrasi teofilin larutan B = = 8 μg/mL Konsentrasi efedrin HCl larutan B = = 0,616 μg/mL

Konsentrasi analisis untuk efedrin HCl 4 μg/mL, sedangkan konsentrasi dalam larutan B adalah 0,616 μg/mL. Maka untuk mendapatkan konsentrasi analisis dilakukan penambahan baku efedrin HCl untuk metode adisi. Penambahan baku dilakukan dengan pembuatan LIB konsentrasi 77 μg/mL.

Konsentrasi yang dibutuhkan dari adisi = 4 μg/mL - 0,616 μg/mL = 3,384 μg/mL

Volume efedrin HCl dari LIB = = 0,44 mL Maka volume analisis untuk efedrin HCl adalah

= Volume efedrin HCl larutan B + Volume efedrin HCl dari LIB = 0,08 mL+ 0,44 mL

= 0,52 mL

Jadi konsentrasi Efedrin HCl = = 4 μg/mL

Lampiran 16. (Lanjutan)

Konsentrasi teofilin = x 1000 μg = 1001,3858 μg/mL Konsentrasi teoritis teofilin = x 0,08 mL

= 8,0111 μg/mL

Kesetaraan efedrin HCl = x (20 x 10 mg) = 3,8515 mg Konsentrasi efedrin HCl = x 1000 μg = 77,03 μg/mL Konsentrasi teoritis efedrin HCl = x0,52 mL

= 4,0055 μg/mL

Absorbansi teofilin pada derivat kedua pada panjang gelombang 244,20 nm adalah 0,00232

Kadar teofilin dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis teofilin Y= 0,00029X + 0,00001

Konsentrasi teofilin: Y = 0,00029X + 0,00001 0,00232 = 0,00029X + 0,00001 0,00232 - 0,00001 = 0,00029X

X =

X = 7,9655 μg/mL Kadar teofilin = x 99,92 %

Lampiran 16. (Lanjutan)

Absorbansi efedrin HCl pada derivat kedua pada panjang gelombang 213,80 nm adalah 0,00231.

Kadar efedrin HCl dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis efedrin HCl Y = 0,00057X + 0,00005

Konsentrasi efedrin HCl : Y = 0,00057X + 0,00005 0,00231 = 0,00057X + 0,00005

0,00231-0,00005 = 0,00057X

X =

X = 3,9649 μg/mL Kadar efedrin HCl = x 99,87 %

Lampiran 17. Perhitungan Statistik Teofilin pada Tablet Grafasma®

SD =

=

=

= 1,0151

Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1= 5, maka t(α/2,dk) = 4,0321

Data diterima jika t hitung < t tabel

t hitung 1 = =

t hitung 2 = = 1,0617

No. X Kadar (%)

2

1 100,45 0,56 0,3136

2 100,33 0,44 0,1936

3 99,35 -0,54 0,2916

4 99,47 -0,42 0,1764

5 98,42 -1,47 2,1609

6 101,31 1,42 2,0164

Lampiran 17. (Lanjutan)

t hitung 4 = = 1,0135

t hitung 5 = = 3,5472

t hitung 6 = = 3,4265

Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima.

Kadar teofilin dalam tablet Grafasma® :

μ

= ± (

t

_{α/2, dk}) x SD/√n)

= 99,89 ± (4,0321 x 1,0151/√6) = (99,89 ± 1,67)%

Kandungan teofilin dalam tablet Grafasma® = x 130 mg

Lampiran 18. Perhitungan Statistik Efedrin HCl pada Tablet Grafasma®

SD =

=

=

= 1,9485

Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1= 5, maka t_(α/2,dk) = 4,0321

Data diterima jika t hitung < t tabel

t hitung 1 = =

t hitung 2 = = 1,5337

No. X

Kadar (%) 2

1 95,57 -2,91 8,4681

2 97,66 -1,22 1,4884

3 98,86 0,1 0,01

4 99,43 0,55 0,3025

5 99,65 0,77 0,5929

6 101,73 2,85 8,1225

Lampiran 18. (Lanjutan)

t hitung 4 = = 0,6914

t hitung 5 = = 0,9680

t hitung 6 = = 3,5828

Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima

Kadar efedrin HCl dalam tablet Grafasma® :

μ

= ±

(t

_{α/2, dk)} x SD/√n) = 98,88 ± (4,0321 x 1,9485/√6) = (98,88± 3,21) %

Kandungan efedrin HCl dalam tablet Grafasma® = x 10 mg = 9,57 – 10,21 mg

Lampiran 19. Perhitungan Statistik Teofilin pada Tablet Ifasma®

SD =

=

=

= 1,6651

Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1= 5, maka t_(α/2,dk) = 4,0321

Data diterima jika t hitung < t tabel

t hitung 1 = =

t hitung 2

=

= 3,0893

t hitung 3 = = 0,3236

No. X

Kadar (%)

2

1 100,43 1,08 1,1664

2 101,45 2,1 4,41

3 99,57 0,22 0,0484

4 99,92 0,57 0,3249

5 97,18 -2,17 4,7089

6 97,56 -1,79 3,2041

Lampiran 19. (Lanjutan)

t hitung 5 = = 3,1922

t hitung 6 = = 2,5891

Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima.

Kadar teofilin dalam tablet Ifasma® :

μ

= ± (

t

_{α/2, dk}) x SD/√n)

= 99,35 ± (4,0321 x 1,6651/√6) = (99,35 ± 2,7409)%

Kandungan teofilin dalam tablet Ifasma® = x 130 mg

Lampiran 20. Perhitungan Statistik Efedrin HCl pada Tablet Ifasma®

SD =

=

= = 1,41

Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1= 5, maka t(α/2,dk) = 4,0321

Data diterima jika t hitung < t tabel

t hitung 1 = =

t hitung 2 = = 1,1514

No. X

Kadar (%)

1 97,76 1,17 1,3689

2 95,72 -0,87 0,7569

3 95,13 -1,46 2,1316

4 95,93 -0,66 0,4359

5 98,84 2,25 5,0625

6 96,16 -0,43 0,1849

Lampiran 20. (Lanjutan)

t hitung 4 = = 1,1465

t hitung 5 = = 3,9088

t hitung 6 = = 0,7470

Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima.

Kadar Efedrin HCl dalam Tablet Ifasma® :

μ

= ±

(t

_{α/2, dk)} x SD/√n) = 96,59 ± (4,0321 x 1,41/√6) = (96,59 ± 2,3210) %

Kandungan efedrin HCl dalam tablet Ifasma® = x 10 mg = 9,43 – 9,89 mg

Lampiran 21. Spektrum Serapan Grafasma® pada Uji Perolehan Kembali

Gambar 51. Spektrum serapan perolehan kembali 80%-1 pada tablet Grafasma®

Lampiran 21. (Lanjutan)

Gambar 54. Spektrum serapan perolehan kembali 100%-1 pada tablet Grafasma®

Lampiran 21. (Lanjutan)

Gambar 57. Spektrum serapan perolehan 120%-1 pada tablet Grafasma®

Lampiran 22. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Teofilin pada Tablet

Grafasma® dengan Metode Penambahan Baku (Standard Addition Method)

No. Kon- sen-trasi (%) Penim-bangan (mg) Absor-bansi pada λ= 244,20 nm

Konsentrasi Baku yang ditambahkan (mg) % peroleh-an kembali Setelah penambahan baku (mg) Sebelum penambaha n baku (mg) 1. 80

0,0460 0,00187 40,0863 28,0301 11,9904 100,55

2. 0,0459 0,00186 39,8707 27,9692 11,9904 99,26

3. 0,0462 0,00188 40,3017 28,1521 11,9904 101,33

4.

100

0,0574 0,00232 49,7845 35,0225 14,9880 98,49

5. 0,0575 0,00233 50,0000 35,0835 14,9880 99,93

6. 0,0573 0,00232 49,7845 34,9615 14,9880 98,90

7.

120

0,0692 0,00281 60,3448 42,1977 17,9856 100,90

8. 0,0688 0,00279 59,9138 41,9538 17,9856 99,86

9. 0,0689 0,00278 59,6983 42,0148 17,9856 98,32

Rata-rata (% recovery) 99,67 Standard Deviation (SD) 1,07 Relative Standard Deviation (RSD) (%) 1,07

Lampiran 23. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Efedrin HCl pada Tablet

Grafasma® dengan Metode Penambahan Baku (Standard AdditionMethod)

No. Kon- sen-trasi (%) Penim-bangan (mg) Absor-bansi pada λ= 213,80 nm

Konsentrasi Baku yang ditambahkan (mg) % peroleh-an kembali Setelah penambahan baku (mg) Sebelum penambaha n baku (mg) 1. 80

0,0460 0,00186 3,0533 2,1364 0,9219 99,46

2. 0,0459 0,00186 3,0533 2,1318 0,9219 99,96

3. 0,0462 0,00186 3,0533 2,1457 0,9219 98,45

4.

100

0,0574 0,00231 3,8124 2,6658 1,1523 99,51

5. 0,0575 0,00231 3,8124 2,6704 1,1523 99,11

6. 0,0573 0,00232 3,8293 2,6612 1,1523 101,37

7.

120

0,0692 0,00280 4,6390 3,2527 1,3828 100,25

8. 0,0688 0,00277 4,5884 3,1943 1,3828 100,82

9. 0,0689 0,00278 4,6053 3,1990 1,3828 101,70

Rata-rata (% recovery) 100,07 Standard Deviation (SD) 1,07 Relative Standard Deviation (RSD) (%) 1,07

Lampiran 24.Contoh Perhitungan Persentase Perolehan Kembali (%recovery)

Sampel yang digunakan adalah tablet Grafasma® Berat 20 tablet Grafasma® = 4,2581 g

Berat kesetaraan penimbangan sampel pada penetapan kadar = 50 mg

Perolehan 80%

Teofilin 80% = x 50 mg = 40 mg

Serbuk teofilin 70% = x 40 mg = 28 mg Penimbangan serbuk setara 28 mg teofilin

Sampel yang ditimbang x 4,2581 = 0,0459 g

Baku teofilin 30% = x 40 = 12 mg

Jumlah efedrin HCl dalam serbuk yang ditimbang : = x (20 x 10 mg) = 2,1559 mg

Baku efedrin HCl yang ditambahkan : =

= 0,9231 mg

Perolehan100%     mg mg mgx 130 40 10 100 30

Lampiran 24. (Lanjutan)

Penimbangan serbuk setara 35 mg teofilin

Sampel yang ditimbang x 4,2581 = 0,0573 g

Baku teofilin 30% = x 50 = 15 mg

Jumlah efedrin HCl dalam serbuk yang ditimbang : = x (20 x 10 mg) = 2,6913 mg

Baku efedrin HCl yang ditambahkan :

= = 1,1538 mg

Perolehan 120%

Teofilin 120% = x 50 mg = 60 mg Serbuk teofilin 70% = x 60 mg = 42 mg Penimbangan serbuk setara 42 mg teofilin

Sampel yang ditimbang x 4,2581 = 0,0688 g

Baku teofilin 30% = x 60 = 18 mg

Jumlah efedrin HCl dalam serbuk yang ditimbang : = x (20 x 10 mg) = 3,2305 mg

Baku efedrin HCl yang ditambahkan :     mg mg mgx 130 50 10 100 30  

Lampiran 24. (Lanjutan)

Contoh perhitungan % perolehan kembali pada perolehan 80%

Misalnya absorbansi analisis (Y) : Penimbangan sampel = 0,0460 Teofilin (244,20 nm) = 0,00187

Efedrin HCl (213,80 nm) = 0,00186

A. Teofilin

Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis teofilin (λ=244,20 nm): Y = 0,00029X + 0,00001

Konsentrasi teofilin (X):

Y = 0,00029X + 0,00001 0,00187 = 0,00029X + 0,00001 0,00187 – 0,00001 = 0,00029X

X =

X = 6,4138 μg/mL Konsentrasi sampel setelah penambahan bahan baku (CF):

= x faktor pengenceran

= x 6250

Lampiran 24. (Lanjutan)

A = Berat sampel yang akan ditimbang setara 28 mg serbuk teofilin 70% B = Serbuk Teofilin 70%

C = Kadar rata-rata sampel

(CA) =

x (28 mg x 99,89%) = 28,0301 mg

Jumlah baku yang ditambahkan ( ) = D x E Keterangan :

D = Baku teofilin 30% (yang ditambahkan) E = % kadar baku teofilin dari sertifikat analisis

( ) = 12 mg x 99,92% = 11,9904 mg Maka % perolehan kembali teofilin:

% perolehan kembali = x 100 %

% perolehan kembali = x 100%

= 100,55%

B. Efedrin HCl

Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis efedrin HCl (λ= 213,80 nm): Y= 0,00057X + 0,00005

Konsentrasi efedrin HCl (X): Y = 0,00057X + 0,00005 0,00186 = 0,00057X + 0,00005

Lampiran 24. (Lanjutan)

Konsentrasi awal setelah penambahan bahan baku (CF):

= x faktor pengenceran

= x 961,5385

= 3,0533 mg

Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (CA):

= Keterangan :

A = Berat sampel yang akan ditimbang setara 28 mg serbuk teofilin 70% B = Jumlah efedrin HCl dalam 0,0460 g berat sampel yang akan ditimbang C = Kadar rata-rata sampel

=

x (2,1599 mg x 98,88%) = 2,0529 mg

Jumlah baku yang ditambahkan ( ) = D x E

Keterangan :

D = Baku efedrin HCl 30% (yang ditambahkan) E = % kadar baku efedrin HCl dari sertifikat analisis

( ) = 0,9231 mg x 99,87% = 0,9219 mg

Lampiran 25. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar deviasi

Perolehan Kembali Teofilin pada Tablet Grafasma®

SD =

=

= 1,07

RSD =

x

100%

=

x 100% = 1,07%

No KadarPerolehan

Kembali[X](%) Xi-X (Xi–X)2

1. 100,55 -0,88 0,7744

2. 99,26 0,38 0,1444

3. 101,33 -1,66 2,7556

4. 98,49 1,18 1,3924

5. 99,93 -0,26 0,0676

6. 98,90 0,77 0,5929

7. 100,90 -1,23 1,5129

8. 99,86 -0,19 0,0361

9. 98,32 1,35 1,8225

Lampiran 26. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar deviasi

Perolehan Kembali Efedrin HCl pada Tablet Grafasma®

SD =

=

= 1,07

RSD

=

x

100%

= x 100%

No _{Kembali [X] (%)} KadarPerolehan Xi-X (Xi–X)2

1. 99,46 0,61 0,3721

2. 99,96 0,11 0,0121

3. 98,45 1,62 2,6244

4. 99,51 0,56 0,3136

5. 99,11 0,96 0,9216

6. 101,37 -1,30 1,69

7. 100,25 -0,18 0,0324

8. 100,82 -0,75 0,5625

9. 101,70 -1,63 2,6569

DAFTAR PUSTAKA

Cairns, D. (2008). Essentials of Pharmaceutical Chemistry. Third Edition. London: Pharmaceutical Press. Halaman 177 - 179.

Charles, E., Sims, M.D., dan G.A. Do Pico, M.D. (1978). Bronchodilator Effect of Ephedrine and Theophylline after Two to Four Weeks of Repeated Dosing. Journal Publications. 73(6): 1019 - 1020.

Connors, K.A. (1982). Textbook of Pharmaceutical Analysis. Third Edition. New York: Willey - VCH. Halaman 171 - 222.

Day, R.A., dan Underwood, A.L. (1998). Quantitative Analysis Sixtth Edition. Penerjemah: Sopyan, I. (2002). Analisis Kimia Kuantitatif Edisi Ke Enam. Jakarta: Penerbit Erlangga. Halaman 413.

Ditjen POM. (1979). Farmakope Indonesia edisi III. Jakarta : Departemen Kesehatan RI. Halaman 53.

Ditjen POM. (1995). Farmakope Indonesia edisi IV. Jakarta : Departemen Kesehatan RI. Halaman 1067.

Ditjen BKAK. (2014). Farmakope Indonesia edisi V. Jakarta : Kementerian Kesehatan RI. Halaman 362-364, 1250, 1251.

El-Sayed, A.Y., Yehia Z., dan Montaser A.M. (2001). Simultaneous Determination of Phosphate and silicate by First-Derivative Spectrophotometry. Analytical Science. The Japan Society for Analytical Chemistry. 17: 1461-1464.

Ermer, J., dan McB. Miller, J. H.. (2005). Method Validation in Pharmaceutical

Analysis, A Guide to Best Practice. Weinheim: Wiley-Vch Verlag GmbH &

Co. KGaA. Halaman 16.

Setiawati, A., dan Gan, S. (1995). Penghambat Adrenergik. Dalam: Ganiswarna, S.G. (1995). Farmakologi dan Terapi Edisi IV. Jakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Halaman 77-78.

Khopkar, S.M. (1990). Konsep Dasar Kimia Analitik. Penerjemah ; A. Saptorahardjo. Jakarta : Universitas Indonesia (UI Press). Halaman 202 dan 217.

Moffat, A.C., Osselton, M.D., dan Widdop, B. (2005). Clarke’s Analysis of Drug and Poisons. Third Edition. London: Pharmaceutical Press. Halaman 324 -326.

Munson, J.W. (1984). Pharmaceutical Analisis: Part B Modern Methods. Penerjemah: Harjana (1991). Analisis Farmasi Metode Modern. Surabaya: Erlangga University Press. Halaman 369-385.

Nurhidayati L. (2007). Spektrofotometri Derivatif dan Aplikasinya dalam Bidang Farmasi. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia 5(2) : 93-99.

Owen, A.J. (1995). Uses of Derivative Spectroscopy Aplication Note UV - Visible Spectroscopy. HP Way: Agilent Technologies.

Pratiwi, P. (2011). Optimasi Fase Gerak Metanol dan Laju Alir Pada Penetapan Kadar Campuran Teofilin dan Efedrin HCl Dalam Tablet Dengan Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT). Skripsi 2011. Medan : Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

Rohman, A. (2007). Kimia Farmasi Analisis. Cetakan pertama. Yogyakarta: Pustaka Pelajar. Halaman 235-236, 240-243 dan 464.

Satiadarma, K., Mulja, M., Tjahjono, D.H., Kartasasmita, R.E. (2004). Asas Pengembangan Prosedur Analisis. Edisi Pertama. Surabaya: Airlangga University Press. Halaman 49, 87 - 93.

Senturk, Z., Erk, N., Ozkan, S.A., Akay, C., dan Cevheroglu, S. (2002). Determination of Theophylline and Ephedrine HCl in Tablets by Ratio-spectra Derivative Spectrophotometry and LC. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 29: 291-298.

Siswandono, dan Soekardjo, B. (2000). Kimia Medisinal 2. Surabaya: Airlangga University Press. Halaman 400-402.

Skujins, S., dan Varian, A.G. (1986). Applications of UV - Visible Derivative Spectrophotometry. Switzerland: CH 6300 Zug. Halaman 1 - 30.

Sudjana. (2005). Metode Statistika. Bandung: Penerbit Tarsito. Halaman 93, 145, 201, 225.

Sweetman, S. C. (2005). Martindale The Extra Pharmacopoeia. 34th Edition. London: Pharmaceutical Press. Page 1120.

Tan, T.H. dan Rahardja, K. (2007). Obat-Obat Penting Khasiat, Penggunaan, dan

Efek-Efek Sampingnya. Edisi Keenam. Jakarta: PT. Elex Media Komputindo.

Hal. 646-650.

USP 30-NF 25. (2007). The United States Pharmacopoeia 30 and The National Formulary. 30th edition : The United States Pharmacopoeial Convention. Halaman 2035, 2036, 3319, 3323.

Watson, D.G. (2005). Pharmaceutical Analysis: A Textbook for Pharmacy Students and Pharmaceutical Chemists. 2 edition. Penerjemah: Syarief, W.R. (2007). Analisis Farmasi: Buku Ajar Untuk Mahasiswa Farmasi dan Praktisi Kimia Farmasi. Edisi Kedua. Jakarta: EGC. Hal. 126.

Wulandari, L., Yuni Retnaningtyas., dan Diyanul Mustafidah. (2013). Pengembangan dan Validasi Metode Kromatografi Lapis Tipis Densitometri Untuk Penetapan Kadar Teofilin dan Efedrin Hidroklorida secara Simultan pada Sediaan Tablet. JKTI. 15(1) : 15-21.

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Jenis Penelitian

Penelitian ini termasuk jenis penelitian deskriptif dengan metode spektrofotometri derivatif terhadap analisa campuran teofilin dan efedrin HCl yang terkandung pada dua sediaan tablet.

3.2 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilakukan pada bulan Februari sampai dengan Maret 2015 di Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

3.3 Alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah spektrofotometer UV-Visible (dapat dilihat pada Lampiran 3 halaman 54), Personal Computer (PC) yang dilengkapi software UV Probe 2.42 (UV-1800 Shimadzu), neraca analitik (Mettler Toledo), kuvet, kertas saring, bola karet, spatula, alat gelas dan alat-alat lainnya yang diperlukan dalam penyiapan sampel.

3.4 Bahan

Bahan yang digunakan adalah HCl 0,1 N, teofilin BPFI, efedrin HCl BPFI (sertifikat pengujian dapat dilihat pada Lampiran 28 dan 29 halaman 111 dan 112), Grafasma® (PT. Graha Farma) dan Ifasma® (PT.Ifars).

dengan yang diteliti (Sudjana, 2005). Sampel yang digunakan yaitu tablet Grafasma® (PT. Graha Farma) dan Ifasma® (PT.Ifars) yang mengandung teofilin 130 mg dan efedrin HCl 10 mg. Gambar sediaan dan daftar spesifikasi sediaan tablet dapat dilihat pada Lampiran 1 dan 2 halaman 52 dan 53.

3.6 Prosedur Penelitian 3.6.1 Pembuatan Pelarut

Diencerkan 8,3 mL HCl 37% dengan 1 liter akuades (Ditjen POM, 1979).Perhitungan pembuatan pereaksi dapat dilihat pada Lampiran 4 halaman 55.

3.6.2 Pembuatan Larutan Induk Baku dan Larutan Standar 3.6.2.1 Pembuatan Larutan Induk Baku Teofilin

Ditimbang dengan seksama 50 mg baku pembanding teofilin BPFI kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL, dilarutkan dengan HCl 0,1N hingga larut, dicukupkan volume dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi 1000 μg/mL (LIB I). Dari larutan LIB I dipipet 2,5 mL dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 mL, dicukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan

konsentrasi 100 μg/mL (LIB II). Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada

Lampiran 5 halaman 56.

3.6.2.2 Pembuatan Larutan Baku Pembanding Efedrin HCl

tentukur 25 mL, dicukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi 100 μg/mL (LIB II). Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 5 halaman 57.

3.6.2.3 Pembuatan Larutan Standar Teofilin

Larutan standar dibuat dalam 5 labu tentukur 10 mL yang memiliki konsentrasi masing-masing 4 μg/mL, 6 μg/mL, 8 μg/mL, 10 μg/mL, dan 12

μg/mL, dengan cara mengencerkan sebanyak 0,4 mL; 0,6 mL; 0,8 mL; 1,0 mL;

dan 1,2 mL secara berurutan dari LIB II teofilin menggunakan pelarut HCl 0,1 N. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 5 halaman 58.

3.6.2.4 Pembuatan Larutan Standar Efedrin HCl

Diambil sebanyak 0,2 mL; 0,3 mL; 0,4 mL; 0,5 mL; dan 0,6 mL dari LIB II efedrin HCl. Kemudian masing-masing dimasukkan ke dalam 5 labu tentukur 10 mL. Dilarutkan dengan pelarut HCl 0,1 N. Kemudian dicukupkan dengan pelarut yang sama untuk membuat larutan standar dengan konsentrasi 2 μg/mL; 3 µg/ml, 4 μg/mL; 5 µg/ml; dan 6 μg/mL. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 5 halaman 59.

3.6.3 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum

3.6.3.1 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum Teofilin

Diambil sebanyak 0,8 mL dari LIB II teofilin (konsentrasi = 100 μg/mL) kemudian dimasukan ke dalam labu tentukur 10 mL untuk kemudian dilarutkan dengan HCl 0,1 N. Selanjutnya larutan diencerkan dengan pelarut yang sama

200-400 nm. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 5 halaman 56.

3.6.3.2 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum Efedrin HCl

Diambil sebanyak 0,5 mL dari LIB II efedrin HCl (konsentrasi = 100

μg/mL) kemudian dimasukan ke dalam labu tentukur 10 mL untuk diencerkan

dengan pelarut HCl 0,1 N hingga garis tanda, lalu dikocok sampai homogen untuk memperoleh larutan dengan konsentrasi 5 μg/mL. Diukur serapannya pada panjang gelombang 200-400 nm. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 5 halaman 57.

3.6.4 Pembuatan Spektrum Serapan Derivatif

3.6.4.1 Pembuatan Spektrum Serapan Derivatif Teofilin

Dibuat spektrum serapan (tanpa diderivatkan) dari larutan standar teofilin dengan konsentrasi 4 μg/mL, 6 μg/mL, 8 μg/mL, 10 μg/mL, dan 12 μg/mL pada panjang gelombang 200-400 nm. Kemudian spektrum ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat pertama dan kedua dengan Δλ = 2 nm. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 5 halaman 58.

3.6.4.2 Pembuatan Spektrum Serapan Derivatif Efedrin HCL

Dibuat spektrum serapan (tanpa diderivatkan) dari larutan standar Efedrin HCL dengan konsentrasi 2 μg/mL; 3 μg/mL; 4 μg/mL; 5 μg/mL; dan 6 μg/mL pada panjang gelombang 200 – 400 nm. Kemudian spektrum ditransformasikan

Penentuan zero crossing diperoleh dengan menumpangtindihkan spektrum serapan masing-masing derivat dalam berbagai konsentrasi larutan. Zero crossing masing-masing zat ditunjukkan oleh panjang gelombang yang memiliki serapan nol pada berbagai konsentrasi.

3.6.6 Penentuan Panjang Gelombang Analisis

Dibuat larutan teofilin dengan konsentrasi 8 μg/mL, larutan efedrin HCl dengan konsentrasi 4 μg/mL, dan larutan campuran teofilin 8 μg/mL dan efedrin HCl 4 μg/mL. Kemudian ketiga larutan ini diukur serapannya pada panjang gelombang 200 – 400 nm.Selanjutnya ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat pertama dan kedua dari masing-masing zat tunggal dan dari campuran teofilin dan efedrin HCl. Spektrum serapan derivat kedua dari larutan zat tunggal dan campuran keduanya ditumpangtindihkan. Yang dipilih untuk menjadi panjang gelombang analisis adalah yang pada panjang gelombang tertentu, serapan tunggal salah satu senyawa nol sedangkan serapan tunggal senyawa pasangannya dan campuran keduanya hampir sama atau persis sama. Karena pada panjang gelombang tersebut dapat secara selektif mengukur serapan salah satu senyawa tanpa diganggu oleh serapan senyawa pasangannya.

3.6.7 Pembuatan dan Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi

3.6.7.1 Pembuatan dan Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi Teofilin

Dibuat larutan standar teofilin dengan konsentrasi 4 μg/mL; 6 μg/mL; 8

gelombang analisis, dilakukan pula perhitungan limit deteksi / limit of detection (LOD) dan limit kuantitasi / limit of quantitation (LOQ).Untuk menentukan batas deteksi (LOD) dan batas kuantitasi (LOQ) dapat digunakan rumus :

Keterangan : SB = Simpangan baku LOD = Limit of Detection LOQ = Limit of Quantitation

3.6.7.2 Pembuatan dan Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi Efedrin HCl

Dibuat larutan standar Efedrin HCl dengan konsentrasi 2 μg/mL; 3 μg/mL;

4 μg/mL; 5 μg/mL dan 6 μg/mL, kemudian diukur serapan derivat kedua (Δλ = 2

nm) pada panjang gelombang analisis yang telah ditentukan. Kemudian dilakukan analisis hubungan antara konsentrasi dan nilai serapan sehingga diperoleh persamaan regresi linear y = ax + b.Dan berdasarkan nilai serapan pada panjang gelombang analisis, dilakukan perhitungan limit deteksi / limit of detection (LOD) dan limit kuantitasi / limit of quantitation (LOQ). Perhitungan untuk menentukan LOD dan LOQ seperti rumus sebelumnya.

dihitung kesetaraan efedrin HCl yang terkandung di dalamnya (penimbangan serbuk dilakukan sebanyak 6 kali pengulangan). Selanjutnya dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL, dan dilarutkan dengan HCl 0,1 N (dengan sonikator selama 15 menit), kemudian dicukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda, dikocok sampai homogen. Larutan tersebut kemudian disaring, lebih kurang 10 mL filtrat pertama dibuang. Filtrat selanjutnya ditampung. Kemudian dari filtrat ini dipipet sebanyak 0,08 mL, ditambahkan 0,44 mL larutan efedrin HCl (untuk adisi), dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 mL, dicukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda sehingga diperoleh larutan yang didalamnya terdapat teofilin konsentrasi 8 μg/mL dan efedrin HCl konsentrasi 4 μg/mL. Diukur serapan pada panjang gelombang 200−400 nm, selanjutnya spektrum serapan ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat kedua dengan Δλ 2 nm pada panjang gelombang analisis teofilin dan efedrin HCl masing-masing 244,2 nm dan 213,8 nm. Bagan alir prosedur penelitian penentuan kadar teofilin dan efedrin HCl dapat dilihat pada lampiran 5 halaman 60.

3.6.9 Analisis Data Penetapan Kadar Secara Statistik

Data perhitungan kadar teofilin dan efedrin HCl dianalisis secara statistik dengan menggunakan uji T.Tabel distribusi t dapat dilihat pada Lampiran 27 halaman 110.

Rumus yang digunakan adalah :

( )

Xi-X 2

t hitung = SD n

X Xi

/ −

Data diterima jika -ttabel < thitung < ttabel pada interval kepercayaan 99%

dengan nilai α = 0,001.

Keterangan :

SD = standard deviation / simpangan baku Xi = kadar dalam satu perlakuan

−

X _{= Kadar rata-rata dalam satu sampel (mg/100g)}

n = jumlah pengulangan

α = tingkat kepercayaan

Untuk menghitung kadar teofilin dan efedrin HCl sebenarnya dalam sampel secara statistik, menurut Sudjana (2005) dapat digunakan rumus:

µ = X ± (t(α/2, dk) x SD / √n )

Keterangan : SD = standard deviation / simpangan baku −

X _{= Kadar rata-rata dalam satu sampel}

n = jumlah pengulangan

t = harga ttabel sesuai dengan derajat kepercayaan

3.6.10 Uji Validasi 3.6.10.1 Uji Akurasi

Kemudian campuran sampel dan baku diukur serapannya pada panjang gelombang 200 – 400 nm, selanjutnya spektrum serapan ditransformasikan

menjadi spektrum serapan derivat kedua dengan Δλ 2 nm pada panjang

gelombang analisis teofilin dan efedrin HCl masing-masing 244,2 nm dan 213,8 nm. Persen perolehan kembali dapat dihitung dengan rumus:

% perolehan kembali =

100 %

Keterangan:

CF = Konsentrasi sampel setelah penambahan bahan baku

CA = Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku

C*A = Jumlah baku yang ditambahkan

3.6.10.2 Uji Presisi

Presisi diukur sebagai simpangan baku relatif atau koefisien variasi. Presisi merupakan ukuran yang menunjukkan derajat kesesuaian antara hasil uji individual ketika suatu metode dilakukan secara berulang untuk sampel yang homogen. Nilai simpangan baku relatif yang memenuhi persyaratan menunjukkan adanya keseksamaan metode yang dilakukan (Harmita, 2004). Simpangan baku relatif dapat dihitung dengan rumus berikut ini :

RSD =

Keterangan : X = Kadar rata-rata sampel SD = Standard Deviation RSD = Relative Standar Deviation

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Hasil Penentuan Spektrum Serapan Maksimum

Penentuan spektrum serapan maksimum dilakukan pada panjang gelombang 200–400 nm. Pengukuran teofilin pada konsentrasi 8 μg/mL,

sedangkan untuk efedrin HCl pada konsentrasi 5 μg/mL. Berdasarkan hasil

penelitian, diperoleh panjang gelombang maksimum teofilin pada 272,40 nm dan efedrin HCl pada 206,80 nm. Spektrum serapan maksimum teofilin konsentrasi 8

μg/mL dan efedrin HCl konsentrasi 5 μg/mL masing-masing dapat dilihat pada

Gambar 4.1 dan 4.2.

nm .

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

Ab

s.

1.50000

1.00000

0.50000

0.00000 -0.10000

nm .

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

Ab

s.

1.50000

1.00000

0.50000

0.00000 -0.10000

nm .

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

Ab

s.

1.50000

1.00000

0.50000

0.00000 -0.10000

Dari gambar 4.6 dapat dilihat bahwa hasil tumpang tindih serapan teofilin 8 µg/mL dan efedrin HCl 4 µg/mL terdapat serapan yang berimpit. Maka dilakukan derivatisasi untuk memperoleh zero crossing terhadap masing-masing komponen.

4.3 Penentuan Zero crossing pada Serapan Derivat

4.3.1 Penentuan Zero crossing pada Serapan Derivat Pertama

Spektrum serapan teofilin konsentrasi 8 µg/mL dan efedrin HCl konsentrasi 4 µg/mL ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat pertama dengan Δλ = 2 nm. Hasil penentuan zero crossing pada derivat pertama diperoleh dengan menumpangtindihkan spektrum serapan derivat pertama pada masing zat. Zero crossing pada spektrum derivat pertama dari masing-masing zat ditunjukkan oleh panjang gelombang yang memiliki serapan nol. Spektrum teofilin dan efedrin HCl pada spektrum serapan derivat pertama masing-masing dapat dilihat pada gambar 4.7 dan 4.8. Spektrum tumpang tindih serapan teofilin dan efedrin HCl dapat dilihat pada gambar 4.9.

A

bs.

0.10000

0.05000

0.00000

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.01000

0.00000

-0.01000

konsentrasi 8 µg/ml dan larutan efedrin HCl dengan konsentrasi 4 µg/ml pada panjang gelombang 200-400 nm. Spektrum serapan yang telah diperoleh ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat kedua dengan ∆λ 2 nm. Spektrum serapan derivat kedua dari masing-masing zat tersebut ditumpangtindihkan. Spektrum teofilin dan efedrin HCl pada serapan derivat kedua dapat dilihat pada gambar 4.10 dan 4.11. Spektrum tumpang tindih teofilin dan efedrin HCl pada serapan derivat kedua pada Gambar 4.12.

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.01000

0.00000

-0.01000

-0.02000

nm.

200.00 250.00 300.00 320.00

A

b

s.

0.01000

0.00000

-0.01000

-0.02000

menentukan panjang gelombang analisis pada spektrum serapan pada masing-masing derivat dilakukan dengan mengamati panjang gelombang yang menunjukkan serapan senyawa pasangannya nol dan serapan senyawa lain dan campurannya memiliki nilai serapan sama atau hampir sama. Spektrum tumpang tindih serapan teofilin 8 μg/mL, efedrin HCl 4 μg/mL dan campuran teofilin 8

μg/mL dan efedrin HCl 4 μg/mL pada spektrum serapan derivat kedua dapat

dilihat pada Gambar 4.14. Spektrum panjang gelombang analisis teofilin dan efedrin HCl dapat dilihat pada Gambar 4.14 dan 4.15.

Gambar 4.13 Spektrum tumpang tindih serapan derivat kedua teofilin, efedrin

HCl dan campuran teofilin dan efedrin HCl

244,20 nm Teofilin 8 μg /mL Efedrin HCl 4μg /mL

Campuran Teofilin 8μg /mL

dan Efedrin HCl 4μg /mL Teofilin 8 μg /mL

Efedrin HCl 4μg /mL Campuran Teofilin 8μg /mL

Gambar 4.15 Panjang gelombang analisis efedrin HCl λ = 213,80 nm

Berdasarkan Gambar 4.13, diperoleh panjang gelombang yang dapat dipakai untuk penentuan kandungan campuran teofilin dan efedrin HCl adalah pada serapan derivat kedua. Hal tersebut diketahui berdasarkan pemilihan panjang gelombang analisis pada setiap derivat. Panjang gelombang analisis didapatkan dengan menentukan zero crossing untuk teofilin dan efedrin HCl.

Panjang gelombang analisis ditentukan dengan cara menumpangtindihkan spektrum serapan masing-masing derivat dari teofilin, efedrin HCl dan campuran teofilin dan efedrin HCl. Selanjutnya ditentukan panjang gelombang dimana absorbansi salah satu zat berada pada nilai nol, sedangkan zat lain memiliki nilai serapan hampir sama. Pada serapan derivat pertama, panjang gelombang analisis untuk efedrin HCl dapat ditemukan. Namun panjang gelombang analisis untuk teofilin tidak ditemukan, sehingga penetapan kadar campuran teofilin dan efedrin

213,80 nm

Teofilin 8 μg /mL

Efedrin HCl 4μg /mL

Campuran Teofilin 8μg /mL

Berdasarkan hasil spektrum serapan derivat kedua, diketahui bahwa zero crossing untuk teofilin berada pada panjang gelombang 213,80 nm; 305,20 nm dan 319,60 nm dan efedrin HCl pada panjang gelombang 227,40 nm; 238,80 nm; 244,20 nm; 249,00 nm; 252,20 nm; 288,00 nm dan 290,60 nm. Setelah spektrum serapan derivat kedua dari kedua zat dan campuran ditumpangtindihkan, didapatkan panjang gelombang analisis untuk teofilin pada 244,20 nm dan efedrin HCl pada 213,80 nm. Panjang gelombang analisis dan absorbansi pada derivat kedua dapat dilihat pada Tabel 4.1.

Tabel 4.1 Panjang Gelombang Analisis dan Absorbansi pada Derivat Kedua

Panjang Gelombang

(nm)

Absorbansi Teofilin

8 μg/mL Efedrin HCl 4 μg/mL Teofilin dan Campuran

Efedrin HCl

213,80 0,0000 0,0023 0,0022

227,40 0,0017 0,0000 0,0018

238,80 0,0008 0,0000 0,0008

244,20 0,0023 0,0000 0,0023

249,20 0,0017 0,0000 0,0018

290,60 0,0015 0,0000 0,0017

305,20 0,0000 0,0009 0,0005

319,60 0,0000 0,0001 0,0004

Berdasarkan Tabel 4.1 diperoleh panjang gelombang analisis teofilin dan efedrin HCl yang digunakan masing-masing adalah 244,20 nm dan 213,80 nm. Penentuan panjang gelombang analisis didasarkan pada nilai absorbansi ketiga larutan pada panjang gelombang tersebut.

panjang gelombang analisisnya adalah pada 244,20 nm. Panjang gelombang analisis efedrin HCl yang dipakai adalah 213,80 nm karena pada panjang gelombang tersebut, nilai absorbansi dari teofilin adalah nol, sedangkan untuk efedrin HCl dan larutan campuran teofilin dan efedrin HCl memiliki nilai serapan hampir sama yaitu 0,0023 untuk efedrin HCl dan 0,0022 untuk campuran. Spektrum serapan penentuan panjang gelombang analisis teofilin dan efedrin HCl dapat dilihat pada Lampiran 9 halaman 73.

4.5 Hasil Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi 4.5.1 Kurva Kalibrasi

Linearitas kurva kalibrasi menunjukkan hubungan yang linier antara absorbansi dengan konsentrasi. Persamaan regresi teofilin, Y = 0,00029X + 0.00001 dengan korelasi r = 0,9999 dan efedrin HCl, Y = 0.00057X + 0,00005 dengan korelasi r = 0,9993. Nilai r > 0,995 menunjukkan adanya korelasi linier antara X dan Y (Moffat, 2005). Kurva kalibrasi teofilin dan efedrin HCl pada masing-masing panjang gelombang 244,20 nm dan 213,80 nm dapat dilihat pada Gambar 26 dan 27. Data kalibrasi, persamaan regresi dan koefisien korelasi dapat dilihat pada Lampiran 10 halaman 74-75 dan Lampiran 11 halaman 76-77.

Gambar 4.17 Kurva kalibrasi efedrin HCl pada panjang gelombang 213,80 nm

4.5.2 Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi

Batas deteksi dan batas kuantitasi dihitung dari persamaan regresi yang diperoleh dari kurva kalibrasi. Batas deteksi teofilin dan efedrin HCl adalah 0,1715 μg/mL dan 0,2658 μg/mL secara berturut-turut dan batas kuantitasi teofilin dan efedrin HCl adalah 0,5718 μg/mL dan 0,8859 μg/mL secara berturut-turut. Perhitungan batas deteksi dan batas kuantitasi tersebut dapat dilihat pada Lampiran 12 halaman 78 dan Lampiran 13 halaman 79.

Hal tersebut menunjukkan bahwa penentuan kadar teofilin dengan

konsentrasi 8 μg/mL danefedrin HCl dengan konsentrasi 4 μg/mL dapat dideteksi

dan diukur menggunakan metode spektrofotometri derivatif.

Batas deteksi adalah konsentrasi analit terendah dalam sampel yang masih dapat dideteksi. Batas kuantitasi didefenisikan sebagai konsentrasi analit terendah dalam sampel yang masih dapat memenuhi kriteria cermat dan seksama (Rohman,

4

4.6 Hasil Penentuan Kadar Teofilin dan Efedrin HCl dalam Sediaan Tablet

Penentuan penetapan kadar teofilin dan efedrin HCl dalam tablet yang beredar diapotik mengandung masing-masing teofilin 130 mg dan efedrin HCl 10 mg. Sedangkan pengukuran teofilin dan efedrin HCl baku pada keduasediaan masing-masing teofilin 8 μg/mL dan efedrin HCl 4 μg/mL.

Sampel yang telah dipreparasi kemudian diukur pada panjang gelombang 200 – 400 nm. Selanjutnya spektrum hasil serapan ditransformasikan menjadi

spektrum serapan derivat kedua dengan Δλ = 2 nm. Berdasarkan spektrum

tersebut dapat ditentukan absorbansi teofilin dan efedrin HCl pada panjang gelombang analisis yang telah diperoleh sebelumnya, yaitu panjang gelombang 244,20 nm dan 213,80 nm.

Absorbansi efedrin HCl dalam sampel yang dianalisis didapat nilai negatif, serapan ini disebut sebagai serapan background. Absorbansi efedrin HCl pada sampel berbeda dengan absorbansi efedrin HCl baku, dimana absorbansi efedrin HCl baku yang diukur memiliki nilai positif. Hal tersebut kemungkinan disebabkan karena:

(i) Tidak terdapat kandungan efedrin HCl dalam tablet yang diuji.

(ii) Terdapatnya gangguan matriks dengan konsentrasi lebih besar sehingga menutupi

spektrum absorbansi efedrin HCl dalam sampel.

sehingga pengukuran jumlah zat pada panjang gelombang awal tidak bisa dilakukan.

Absorbansi teofilin dan efedrin HCl sebelum penambahan baku efedrin HCl dapat dilihat pada Tabel 4.2. Spektrum tumpang tindih teofilin konsentrasi 8

μg/ml dan efedrin HCl 4 μg/ml pada tablet sebelum penambahan baku dapat

dilihat pada Gambar 4.18 dan Gambar 4.19.

Tabel 4.2 Absorbansi teofilin dan efedrin HCl sebelum penambahan baku efedrin

HCl pada derivat kedua

Sampel Absorbansi Teofilin _{pada λ} 244,20 nm

Absorbansi Efedrin HCl sebelum penambahan baku

pada λ 213,80 nm

Grafasma® 0,00232 -0,00013

Ifasma® 0,00234 -0,00017

nm .

200.00 210.00 220.00 230.00 240.00 250.00

Ab

s.

0.01500

0.01000

0.00500

0.00000

-0.00500

Menurut Nurhidayati (2007), kontribusi gangguan serapan background, yang dapat digambarkan sebagai polynomial derivatif kedua dan ketiga hilang pada derivatif keempat. Pada prakteknya, matriks pengganggu tidak selalu bisa dihilangkan dengan menaikkan orde. Pada kondisi tertentu metode standar adisi perlu digunakan untuk mengkompensasikan pengaruh matriks, oleh karena itu penetapan kadar efedrin HCl dalam sampel dilanjutkan dengan teknik adisi yaitu penambahan sejumlah baku ke dalam sampel dan diukur secara spektrofotometri derivatif ultraviolet pada panjang gelombang analisisnya.

Prinsip adisivitas menurut hukum Lambert-Beer adalah absorbansi sebanding dengan jumlah molekul yang menyerap radiasi pada panjang gelombang tertentu. Prinsip ini berlaku jika ada lebih dari satu senyawa yang dapat menyerap radiasi. Semua metode kuantitatif multikomponen didasarkan pada prinsip bahwa absorbansi pada setiap panjang gelombang campuran adalah sama dengan jumlah absorbansi dari masing-masing komponen dalam campuran pada panjang gelombangnya (Owen, 1995).

Berdasarkan hasil pengukuran, penambahan baku efedrin HCl dalam sampel dapat mengembalikan serapan efedrin HCl pada panjang gelombang 213,80 nm ke daerah absorbansi positif dan hasil pengukuran ini tidak mempengaruhi absorbansi teofilin. Hasil pengukuran teofilin dan efedrin HCl dengan metode penambahan baku tersebut setelah dihitung kadarnya selanjutnya

Tabel 4.3 Absorbansi teofilin dan efedrin HCl setelah penambahan baku efedrin

HCl pada derivat kedua

Sampel Absorbansi Teofilin

pada λ 244,20 nm

Absorbansi Efedrin HCl setelah penambahan baku

pada λ 213,80 nm

Grafasma® 0,00232 0,00222

Ifasma® 0,00234 0,00228

nm .

200.00 210.00 220.00 230.00 240.00 250.00

Ab

s.

0.01500

0.01000

0.00500

0.00000

-0.00500

HCl pada sediaan dengan nama dagang Grafasma® dan Ifasma® setelah dilakukan analisa secara statistik (data dan perhitungan pada Lampiran 14 – Lampiran 20) dapat dilihat pada Tabel 4.4.

Tabel 4.4 Kadar teofilin dan efedrin HCl dalam tablet

No Kadar Grafasma® Ifasma® Persyaratan

1. Teofilin (%) 99,89 ± 1,67 99,35 ± 2,74 94,00-106,00 2. Efedrin HCl (%) 98,88± 3,21 96,59 ± 2,32 92,50-107,50

Dapat dilihat pada Tabel 4.4 kadar teofilin dan efedrin HCl dalam tablet Grafasma® dan Ifasma® memenuhi persyaratan.

4.7 Hasil Uji Validasi 3.7.1 Hasil Uji Akurasi

Uji akurasi dengan parameter persen perolehan kembali dilakukan dengan menggunakan tablet Grafasma®. Metode penambahan baku dilakukan dengan menambahkan sejumlah tertentu larutan baku ke dalam sampel yang telah diadisi. Kemudian larutan diukur serapannya sesuai panjang gelombang analisis yang digunakan. Spektrum serapan uji perolehan kembali teofilin dan efedrin HCl dalam tablet Grafasma® dapat dilihat pada Lampiran 21 halaman 98-100. Sedangkan data dan perhitungan uji perolehan kembali teofilin dan efedrin HCl dalam tablet dapat dilihat pada Lampiran 22 halaman 101 dan Lampiran 23

prosedur analitik karena rata-rata berada di antara rentang 98-102% (Harmita, 2004).

Tabel 4.5 Hasil perolehan kembali teofilin dan efedrin HCl dengan metode

penambahan baku standar (standard addition method) pada tablet Grafasma® Rentang Spesifik % Perolehan kembali Teofilin (%) Perolehan kembali Efedrin HCl (%) 80

100,55 99,46

99,26 99,96

101,33 98,45

100

98,49 99,51

99,93 99,11

98,90 101,37

120

100,90 100,25

99,86 100,82

98,32 101,70

Rata-rata (% recovery)

Standard Deviation (SD) Relative Standard Deviation (RSD) (%)

99,67 1,07 1,07 100,07 1,07 1,07

3.7.2 Hasil Uji Presisi

Uji presisi dilakukan dengan perhitungan simpangan baku relatif. Berdasarkan data perhitungan terhadap kadar teofilin dan efedrin HCl, diperoleh simpangan baku relatif untuk teofilin dan efedrin HCl yaitu 1,07 % . Hasil simpangan baku relatif untuk teofilin dan efedrin HCl memenuhi persyaratan yaitu ≤ 2% (Harmita, 2004). Perhitungan dan data simpangan baku relatif untuk teofilin dan efedrin HCl dapat dilihat pada Lampiran 25 dan Lampiran 26.

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 Kesimpulan

Berdasarkan penelitian yang dilakukan, maka dapat disimpulkan:

a. Metode spektrofotometri derivatif dengan zero crossing dapat digunakan untuk menetapkan kadar campuran teofilin dan efedrin HCl, dimana diperlukan metode tambahan untuk menetapkan kadar efedrin HCl menggunakan teknik adisi.

b. Kadar teofilin pada tablet Grafasma® dan Ifasma® memenuhi persyaratan pada USP 30-NF 25 (2007) dan efedrin HCl pada tablet Grafasma® dan Ifasma® memenuhi persyaratan Farmakope Indonesia edisi V (2014).

c. Uji validasi yang dilakukan pada tablet Grafasma® menunjukkan bahwa metode spektrofotometri derivatif memenuhi persyaratan validasi.

5.2 Saran

Disarankan agar dilakukan penelitian lebih lanjut pada penetapan kadar campuran teofilin dan efedrin HCl pada sediaan tablet dengan menggunakan pelarut yang berbeda pada metode spektrofotometri derivatif dengan zero crossing.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Uraian Bahan

2.1.1 Teofilin

Menurut Ditjen BKAK (2014): Rumus struktur :

O

CH3

N

NH O

N

N

CH3

Gambar 2.1 Struktur Teofilin

Nama Kimia : 1,3-dimethyl-1H-purine-2,6-dione Rumus Molekul : C7H8N4O2

Berat Molekul : 180,17

Pemerian : Serbuk hablur, putih, tidak berbau, rasa pahit, stabil di udara Kelarutan : Sukar larut dalam air, tetapi lebih mudah larut dalam air panas,

mudah larut dalam larutan alkali hidroksida dan dalam amonium hidroksida, agak sukar larut dalam etanol, dalam kloroform dan dalam eter.

Teofilin mempunyai efek samping berupa mual dan muntah, baik pada penggunaan oral maupun parenteral. Pada overdose terjadi efek sentral (gelisah, sukar tidur, tremor dan konvulsi) serta gangguan pernafasan, juga efek kardiovaskuler, seperti tachycardia, aritmia dan hipotensi (Tan dan Rahardja, 2007).

2.1.2 Efedrin Hidroklorida

Menurut Ditjen BKAK (2014): Rumus Struktur :

H OH

NH

CH3

.

HCl

H CH3

Gambar 2.2 Struktur Efedrin Hidroklorida

Nama Kimia : (1R,2S)-2-(methylamino)-1-phenylpropan-1-ol hydrochloride Rumus Molekul : C10H15NO.HCl

Berat Molekul : 201,70

Pemerian : Serbuk atau hablur halus, putih, tidak berbau.

Kelarutan : Mudah larut dalam air, larut dalam etanol, tidak larut dalam eter.

Efek samping dari efedrin HCl yaitu pada orang yang peka terhadap efedrin HCl, dalam dosis rendah sudah dapat menimbulkan gelisah, tremor, dan gangguan berkemih. Sedangkan pada efek sentral yaitu insomnia yang sering terjadi pengobatan kronik dan palpitasi. Saat ini, sangat banyak beredar produk obat yang mengandung kombinasi dua atau lebih bahan aktif. Kombinasi dimaksudkan agar obat dapat lebih efektif mencapai sasaran terapi. Salah satunya adalah kombinasi antara teofilin dan efedrin HCl, yang digunakan untuk meringankan gejala gangguan saluran pernapasan seperti asma bronkial, kejang bronkus dan alergi (Tan dan Rahardja, 2007).

2.2. Spektofotometri

Spektrofotometer adalah alat untuk mengukur transmitan atau serapan suatu sampel sebagai fungsi panjang gelombang. Spektrofotometer merupakan penggabungan dari dua fungsi alat yang terdiri dari spektrometer yang menghasilkan sinar dari spektrum dengan panjang gelombang tertentu dan fotometer sebagai alat pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan atau yang diabsorpsi. Jika suatu molekul sederhana dikenakan radiasi elektromagnetik maka molekul tersebut akan menyerap radiasi elektromagnetik. Interaksi antara molekul dengan radiasi elektromagnetik ini akan meningkatkan energi dari tingkat dasar ke tingkat tereksitasi (Rohman, 2007).

Bagian molekul yang bertanggung jawab terhadap penyerapan cahaya disebut kromofor dan terdiri atas ikatan rangkap dua atau rangkap tiga, terutama jika ikatan rangkap tersebut terkonjugasi. Semakin panjang ikatan rangkap dua atau rangkap tiga terkonjugasi di dalam molekul, molekul tersebut akan lebih mudah menyerap cahaya (Cairns, 2008).

Gugus fungsi seperti –OH, -O, -NH2 dan –OCH3 yang memberikan transisi n → π* disebut gugus auksokrom. Gugus ini adalah gugus yang tidak dapat menyerap radiasi ultraviolet-sinar tampak, tetapi apabila gugus ini terikat pada gugus kromofor mengakibatkan pergeseran panjang gelombang ke arah yang lebih besar atau pergeseran batokromik (Rohman, 2007). Efek hipsokromik atau pergeseran biru adalah pergeseran panjang gelombang kearah yang lebih pendek. Efek hipokromik adalah efek yang menyebabkan penurunan intensitas serapan (Sudjadi dan Rohman, 1985).

Radiasi ultraviolet diabsorpsi oleh molekul organik aromatik, molekul yang mengandung elektron-π terkonjugasi atau atom yang mengandung elektron -n, menyebabkan transisi elektron di orbit terluarnya dari tingkat energi elektron dasar ke tingkat energi tereksitasi lebih tinggi. Besarnya absorbansi radiasi tersebut berbanding dengan banyaknya molekul analit yang mengabsorpsi dan dapat digunakan untuk analisis kuantitatif (Satiadarma, dkk., 2004).

Beer, sehingga diperoleh bahwa serapan berbanding lurus terhadap konsentrasi dan ketebalan sel, hukum Lambert-Beer menyatakan bahwa intensitas yang diteruskan oleh larutan zat penyerap berbanding lurus dengan tebal dan konsentrasi larutan (Rohman, 2007).

Hukum Lambert-Beer umumnya dikenal dengan persamaan sebagai berikut:

A = abc

Dimana: A = absorbansi a = absorptivitas b = tebal kuvet (cm) c = konsentrasi

Absorptivitas (a) merupakan suatu konstanta yang tidak tergantung pada konsentrasi, tebal kuvet dan intensitas radiasi yang mengenai larutan sampel. Absorptivitas tergantung pada suhu, pelarut, struktur molekul dan panjang gelombang radiasi (Rohman, 2007).

Absorbansi yang terbaca pada spektrofotometer hendaknya antara 0,2 sampai 0,6. Anjuran ini berdasarkan anggapan bahwa pada kisaran nilai absorbansi tersebut kesalahan fotometrik yang terjadi adalah paling minimal (Rohman, 2007).

2.2.2. Kegunaan Spektofotometri

dilakukan (Satiadarma, dkk., 2004). Akan tetapi, jika digabung dengan cara lain seperti spektroskopi inframerah, resonansi magnet inti dan spektroskopi massa, maka dapat digunakan untuk identifikasi atau analisis kualitatif senyawa tersebut (Rohman, 2007).

Metode spektrofotometri memiliki beberapa keuntungan antara lain kepekaan yang tinggi, ketelitian yang baik, mudah dilakukan, cepat pengerjaannya dan dapat digunakan untuk menentukan senyawa campuran (Munson, 1991).

Pada analisis kuantitatif dengan cara penetapan kadar, larutan standar obat yang akan dianalisis disiapkan, serapan sampel dan standar dapat ditentukan (Cairns, 2008), dimana konsentrasi zat dalam sampel dihitung dengan rumus sebagai berikut:

Ct

Cs

At

As

=

Keterangan: As = Absorbansi baku pembanding At = Absorbansi zat dalam sampel Cs = Konsentrasi baku pembanding Ct = Konsentrasi zat dalam sampel

Penentuan kadar senyawa organik yang mempunyai struktur kromofor atau mengandung gugus kromofor, serta mengabsorpsi radiasi ultraviolet penggunaanya cukup luas (Satiadarma, dkk., 2004).

dengan panjang gelombang, derivat kedua dibuat dengan memplotkan d2A / dλ2 dengan panjang gelombang dan seterusnya (Ditjen POM, 1995).

Konsep derivatif telah diperkenalkan pertama kali pada tahun 1950, dimana terlihat memberikan banyak keuntungan. Aplikasi utama spektrofotometri derivatif ultraviolet – visibel adalah untuk identifikasi kualitatif dan analisis senyawa dalam sampel. Metode spektrofotometri derivatif sangat cocok untuk analisis pita absorpsi yang overlapping atau tumpang tindih (Owen, 1995).

Spektrum derivatif diperoleh dengan membuat absorban atau transmitan derivatif orde pertama atau orde lebih tinggi yang terkait dengan panjang gelombang (ΔA / Δλ) sebagai fungsi dari panjang gelombang. Spektrum dapat menunjukkan kembali detail spektrum yang hilang dalam spektrum absorpsi biasa dan pada pengukuran konsentrasi analit yang bercampur dengan zat yang mengganggu, analisis dipermudah dan dapat ditentukan lebih akurat pada beberapa bagian dari daerah spectrum. Pengukuran absorban derivatif dapat dilakukan dengan men-scan monokromator yang terpasang pada panjang gelombang tetap, tetapi dengan perbedaan panjang gelombang yang sedikit, sehingga berguna jika analit adalah dua komponen yang mengabsorpsi radiasi pada sisi pita absorpsi dari komponen yang mengganggu (Satiadarma, dkk., 2004).

Pada spektrofotometri konvensional, spektrum serapan merupakan plot serapan (A) terhadap panjang gelombang (λ). Pada spektrofotometri derivatif, plot serapan terhadap panjang gelombang dimana:

d2A / dλ2 = f ″ (λ), order kedua dan seterusnya ( Owen, 1995).

Kurva serapan derivat pertama sampai derivat keempat dapat dilihat pada Gambar 2.3.

Gambar 2.3. Kurva serapan derivat pertama sampai derivat keempat (Talsky,

1994).

Menurut Talsky (1994) sesuai dengan hukum Lambert-Beer, maka ada hubungan linier antara konsentrasi dengan absorbansi untuk semua orde pada spektrofotometri derivatif adalah:

xi

4.3.1 Penentuan Zero Crossing pada Serapan Derivat

Pertama ... 33

4.3.2 Penentuan Zero Crossing pada Serapan Derivat Kedua ... 34

4.4 Hasil Penentuan Panjang Gelombang Analisis Teofilin dan Efedrin HCl ... 36

4.5 Hasil Penentuan Linieritas Kurva Kalibrasi ... 40

4.5.1 Kurva Kalibrasi ... 40

4.5.2 Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi ... 41

4.6 Hasil Penentuan Kadar Teofilin dan Efedrin HCl dalam Sediaan Tablet ... 42

4.7 Hasil Uji Validasi ... 46

4.7.1 Hasil Uji Akurasi ... 46

4.7.2 Hasil Uji Presisi ... 47

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 48

5.1 Kesimpulan ... 48

5.2 Saran ... 48

DAFTAR PUSTAKA ... 49

LAMPIRAN ... 52

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

4.1 Panjang gelombang analisis dan absorbansi pada derivat

kedua ... 39 4.2 Absorbansi teofilin dan efedrin HCl sebelum penambahan

baku efedrin HCl pada derivat kedua ... 43 4.3 Absorbansi teofilin dan efedrin HCl setelah penambahan

baku efedrin HCl pada derivat kedua ... 44 4.4 Kadar Teofilin dan Efedrin HCl dalam tablet ... 46 4.5 Hasil perolehan kembali Teofilin dan Efedrin HCl dengan

xiii

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman 2.1 Struktur Teofilin ... 5 2.2 Struktur Efedrin HCl ... 6 2.3 Kurva Serapan Derivat Pertama sampai derivat keempat . 12 2.4 Kurva Sederhana Aplikasi Zero Crossing ... 14 4.1 Spektrum Serapan Maksimum Teofilin Konsentrasi

8 µg/mL ... 30 4.2 Spektrum Serapan Maksimum Efedrin HCl Konsentrasi

10 µg/mL ... 30

4.3 Spektrum Tumpang Tindih Serapan maksimum

Maksimum Teofilin Konsentrasi 8 µg/mL dan Efedrin HCl Konsentrasi 10 µg/mL ... 30 4.4 Spektrum Serapan Teofilin Konsentrasi 8 µg/mL ... 32 4.5 Spektrum Serapan Efedrin HCl Konsentrasi 10 µg/mL .. 32

4.6 Spektrum Tumpang Tindih Serapan Teofilin dan

Efedrin HCl ... 32 4.7 Spektrum Serapan Teofilin Konsentrasi 8 µg/mL pada

Derivat Pertama ... 33 4.8 Spektrum Serapan Efedrin HCl Konsentrasi 10 µg/mL

pada Derivat Pertama ... 34

4.9 Spektrum Tumpang Tindih Serapan Teofilin dan

Efedrin HCl pada Derivat Pertama ... 34 4.10 Spektrum Serapan Teofilin Konsentrasi 8µg/mL pada

Derivat Kedua ... 35 4.11 Spektrum Serapan Efedrin HCl Konsentrasi 10 µg/mL

pada Derivat Kedua ... 35 4.12 Zero Spektrum Tumpang Tindih Serapan Teofilin dan

Efedrin HCl pada Derivat Kedua ... 36

4.13 Spekrum Tumpang Tindih Serapan Derivatif Kedua Teofilin dan Efedrin HCl dan Campuran Teofilin dan Efedrin HCl ... 37 4.14 Panjang Gelombang Analisis Teofilin λ = 244,2 nm ... 37 4.15 Panjang Gelombang Analisis Efedrin HCl λ=213,80nm . 38

4.16 Kurva Kalibrasi Teofilin Pada Panjang Gelombang

244,20 nm ... 40 4.17 Kurva Kalibrasi Efedrin HCl Pada Panjang Gelombang

213,80 nm ... 41

4.18 Spekrum Tumpang Tindih Teofilin 8 µg/mL dan

Efedrin HCl 4 µg/mL pada tablet Grafasma® sebelum penambahan baku ... 44

4.19 Spekrum Tumpang Tindih Teofilin 8 µg/mL dan

Efedrin HCl 4 µg/mL pada tablet Ifasma® sebelum penambahan baku ... 45

4.20 Spekrum Tumpang Tindih Teofilin 8 µg/mL dan

Efedrin HCl 4 µg/mL pada tablet Grafasma® setelah penambahan baku ... 45

4.21 Spekrum Tumpang Tindih Teofilin 8 µg/mL dan

Efedrin HCl 4 µg/mL pada tablet Ifasma® setelah penambahan baku ... 45

xv

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1. Sampel Grafasma® dan Ifasma® Tablet ... 52

2. Komposisi Tablet Grafasma® dan Ifasma® ... 53

3. Gambar Alat ... 54

4. Perhitungan Pembuatan HCl 0,1N ... 55

5. Bagan Alir Prosedur Penelitian ... 56

6. Spektrum Serapan Teofilin Baku dan Efedrin HCl Baku ... 61

7. Spektrum Serapan Derivat Pertama Teofilin Baku dan Efedrin HCl Baku ... 65

8. Spektrum Serapan Derivat Kedua Teofilin Baku dan Efedrin HCl Baku ... 69

9. Spektrum Serapan Panjang Gelombang Analisis Teofilin Baku dan Efedrin HCl Baku... 73

10. Data Kalibrasi Teofilin BPFI, Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi ... 74

11. Data Kalibrasi Efedrin HCl BPFI, Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi ... 76

12. Perhitungan Batas Deteksi (Limit of Detection, LOD) dan Batas Kuantitasi (Limit of Quantitation, LOQ) Teofilin ... 78

14. Perhitungan Batas Deteksi (Limit of Detection, LOD) dan Batas Kuantitasi (Limit of Quantitation, LOQ) Efedrin HCl ... 79

14. Spektrum Serapan Derivat Kedua Sampel ... 80

15. Hasil Analisis Kadar Teofilin dan Efedrin HCl dalam Sediaan Tablet ... 84

16. Contoh Perhitungan Kadar Teofilin dan Efedrin HCl dalam Sediaan Tablet ... 86

17. Perhitungan Statistik Teofilin pada Tablet Grafasma® .... 90

18. Perhitungan Statistik Efedrin HCl pada Tablet Grafasma® ... 92

19. Perhitungan Statistik Teofilin pada Tablet Ifasma® ... 94

20. Perhitungan Statistik Efedrin HCl pada Tablet Ifasma® .. 96

21. Spektrum Serapan Grafasma® pada Uji Perolehan Kembali ... 98

22. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Teofilin pada Tablet Grafasma® dengan Metode Penambahan Baku (Standard Addition Method) ... 101

24. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Efedrin HCl pada Tablet Grafasma® dengan Metode Penambahan Baku (Standard Addition Method)® ... 102

24. Perhitungan Persen Perolehan Kembali ... 103

25. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar deviasi Perolehan Kembali Teofilin pada Tablet Grafasma® ... 108

26. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar deviasi Perolehan Kembali Efedrin HCl pada Tablet Grafasma® ... 109

27. Daftar Nilai Distribusi t ... 110

28. Sertifikat Pengujian Teofilin ... 111