BAB III METODOLOGI PENELITIAN
3.1 Desain Penelitian
Peneliti menggunakan desain eksperimental dengan teknik disc diffusion untuk melihat uji efektivitas ekstrak biji jintan hitam Nigella sativa
terhadap pertumbuhan bakteri Pseudomonas aeruginosa.
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian
Peneliti melakukan penelitian pada bulan Februari – Juli 2014 di
Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Jintan hitam didapat dari distributor di daerah
Bogor. Determinasi tanaman yang digunakan dalam penelitian dilakukan di Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia LIPI Bogor pada bulan Februari,
sedangkan proses ekstraksi jintan hitam Nigella sativa dilakukan di balai penelitian tanaman rempah dan obat BALITRO Bogor pada bulan
Februari.
3.3 Bahan Uji
3.3.1 Bahan yang Diuji
Jintan hitam dibeli dari distributor di daerah Bogor kemudian di determinasi lembaga ilmu pengetahuan Indonesia LIPI Bogor.
Selanjutnya Jintan Hitam diekstraksi di balai penelitian tanaman rempah dan obat BALITRO Bogor.
3.3.2 Sampel Bakteri
Bakteri yang diuji yaitu Pseudomonas aeruginosa yang diisolasi pada media nutrien agar dan dilakukan inkubasi selama 24 jam
dengan suhu 37˚C.
3.4 Alat dan Bahan penelitian
3.4.1 Alat Penelitian
Alat penelitian berupa tabung reaksi, mikro pipet, bunsen, korek api, ose, spatula besi, cawan petri, rak tabung, autoclave, tabung
15
reaksi, baki, swab kapas steril, stop watch, inkubator, penggaris, cakram uji kosong, label, alat tulis, kamera, tisu, pinset, alkohol,
laminar airflow.
3.4.2 Bahan Penelitian
Bahan penelitian berupa ekstrak jintan hitam, media nutrien agar, Larutan McFarland 0,5, pelarut etanol 96, cakram uji, biakan
bakteri Pseudomonas aeruginosa, NaCl steril.
3.5 Alur Penelitian
Persipan pembiakan kultur bakteri Pseudomonas aeruginosa
Pembuatan inokulum: 1 ose Pseudomonas aeruginosa dimasukan
ke dalam larutan NaCl steril
NaCl steril dan Pseudomonas aeruginosa divortex hingga homogen dan
distandarisasi menggunakan larutan standarisasi McFarland konsentrasi 0,5
Persiapan nutrien agar: nutrien agar beku dipanaskan kemudian dituang ke
dalam 4 cawan petri Pembuatan konsentrasi ekstrak Jinten
hitam dalam berbagai konsentrasi yaitu 100, 75, 50, 25
Konsentrasi ektrak kemudian dipindahkan ke cawan petri
Rendam blank disc ke dalam konsentrasi ekstrak dalam cawan petri selama 15-30
menit
Kontrol positif cakram gentamisin
10µg Rendam blank disc ke
dalam etanol 96 di dalam cawan petri
Pembuatan kontrol negatif
Disc diletakkan di nutrien agar yang telah terdapat biakan Pseudomonas aeruginosa
Inkubasi selama 24 jam
Hitung diameter zona terang di sekitar disc
dan tentukan potensi antibakteri
Simpan di lemari bersuhu 4
o
C selama 2 jam hingga mengeras
Oleskan inokulum dengan swab steril
Keluarkan dari lemari Disc diletakkan di nutrien agar yang telah
terdapat biakan Pseudomonas aeruginosa
Analisis Statistik
3.6 Perhitungan Sampel
Jumlah sampel dihitung dengan menggunakan rumus federer
23
:
t=jumlah kelompok konsentrasi dan r=jumlah pengulangan t=6, sehingga r≥4. Oleh karena itu, dalam penelitian ini, digunakan 4 cawan
petri yang didalamnya akan diletakan 6 konsentrasi yaitu konsentrasi 25, 50, 75, 100, kontrol negatif, dan kontrol positif
3.7 Cara Kerja Penelitian
Kategori