Determinasi Jintan hitam Ekstraksi Jintan Hitam Pembuatan konsentrasi Ekstrak Jintan Hitam Kultur Bakteri

3.6 Perhitungan Sampel

Jumlah sampel dihitung dengan menggunakan rumus federer 23 : t=jumlah kelompok konsentrasi dan r=jumlah pengulangan t=6, sehingga r≥4. Oleh karena itu, dalam penelitian ini, digunakan 4 cawan petri yang didalamnya akan diletakan 6 konsentrasi yaitu konsentrasi 25, 50, 75, 100, kontrol negatif, dan kontrol positif

3.7 Cara Kerja Penelitian

3.7.1 Determinasi Jintan hitam

Nigella sativa Jintan hitam didapat dari distributor jintan hitam sebanyak ±1000 gram. Kemudian dilakukan determinasi di Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia LIPI Bogor untuk memastikan kebenaran dari tanaman yang digunakan adalah benar biji dari tanaman jintan hitam.

3.7.2 Ekstraksi Jintan Hitam

Nigella sativa Ekstraksi dilakukan di balai penelitian tanaman rempah dan obat dengan etanol 96. Jintan hitam yang telah dihaluskan dimesin grinder. Jintan hitam yang telah dihaluskan direndam dalam pelarut etanol 96 dengan perbandingan 1:5 1000 gram jintan hitam : 5000 ml etanol 96. Kemudian jintan hitam dan etanol 96 dicampur dengan mixer selama 2-3 jam. Campuran ini didiamkan selama 24 jam, kemudian campuran ini disaring dengan alat penyaring sehingga didapatkan filtrat hasil penyaringan. Kemudian filtrat dimasukan ke rotatory evaporator. Pada rotatory evaporator, pelarut etanol 96 divakum kemudian didestilasi sehingga akan menguap. Setelah seluruh pelarut etanol 96 sudah menguap akan didapatkan ekstrak jintan hitam kental. t-1r- 1≥15

3.7.3 Pembuatan konsentrasi Ekstrak Jintan Hitam

Variabel terikat yang digunakan berjumlah enam variabel, yaitu kontrol negatif berupa disc dengan rendaman etanol, variasi konsentrasi ektrak jinten hitam sebanyak lima yaitu disc dengan masing-masing dengan variasi konsentrasi pada disc 25, 50, 75, 100, dan yang terakhir adalah kontrol positif dengan disc berupa antibiotik yang sensitif terhadap bakteri yang diuji yaitu gentamisin 10 µg. Pembuatan konsentrasi: Secara berurutan, jumlah zat terlarut tiap konsentrasi sebanyak 250 µL 25, 500 µL50, 750 µL 75, dan 1000 µL 100 yang dilarutkan dalam 1 mL cairan etanol 96. Konsentrasi diatas dipilih berdasarkan pada penelitian yang dilakukan Asniyah pada tahun 2009 24 .

3.7.4 Kultur Bakteri

Pseudomonas aeruginosa Pembuatan kultur bakteri dilakukan dengan cara menginokulasi 1 ose biakan murni bakteri Pseudomonas aeruginosa ke nutrien agar, kemudian dilakukan inkubasi didalam inkubator selama 24 jam dengan suhu sebesar 37 o C.

3.7.5 Uji efektivitas Ekstrak Jintan Hitam terhadap pertumbuhan