Desain penelitian dipaparkan di bawah ini:
1. Persiapan bakteri
a. Sumber bakteri
Bakteri yang digunakan dalam penelitian ini adalah isolat bakteri yang diperoleh dari tanah yang terkontaminasi heavy oil waste, yaitu bakteri Salipiger sp. MY7
dan Bacillus altitunidinis MY12.
b. Penyegaran Isolat
Isolat bakteri diremajakan dengan cara memindahkan kultur ke medium agar Nutrien agar, dengan cara membuat media agar, kemudian disikan sebanyak 5
ml ketiap tabung reaksi dan disterilasi dengan menggunakan autoclave. Setelah itu diletakkan miring dan dibiarkan selama satu malam hingga terbentuk agar dan
mengeras. Biakan mikroba Salipiger sp. MY7 dan Bacillus altitunidinis MY12 diambil satu ose dan digoreskan pada tiap tabung agar miring dan diinkubasi
pada suhu 30
o
c. Kultivasi dan Adaptasi
C selama 24 jam. Isolat siap digunakan untuk propagasi pada media cair menggunakan media air laut yang ditambah dengan yeast extract dan pepton.
Sebelum diaplikasikan pada limbah minyak heavy oil waste, dilakukan adaptasi isolat bakteri dengan terlebih dahulu menumbuhkan pada media kaya dan media
minimal. Tahap pertama adalah menumbuhkan bakteri pada media kaya yaitu 100 ml medium garam mineral air laut yang ditambah dengan yeast 1,5 g dan pepton
0,3 g dalam erlenmeyer 250 ml, kemudian disterilisasi pada suhu 121
o
C selama 15 menit. Secara aseptis bakteri diinokulasikan dengan ose pada media kaya
tersebut dan diinkubasi pada inkubasi goyang dengan kecepatan 180 rpm selama 3 hari. Selanjutnya sebanyak 200ul bakteri dipindahkan ke dalam media minimal
yang mengandung yeast extract 0,5 g dan pepton 0,1 g yang telah disterilisasi. Heavy oil waste sebagai limbah hidrokabon disterilisi terpisah dengan sinar UV
selama 15 menit ditambahkan pada media minimal sebanyak 5 ml. Bakteri pada media minimal diinkubasi pada inkubator goyang dengan kecepatan 180
o
C selama 7 hari. Adaptasi bakteri ini dilakukan sebanyak 3 kali dan bakteri siap di
aplikasikan pada tanah terkontaminasi heavy oil waste.
2. Penelitian skala laboratorium
Sebelum dilakukan penelitian pada skala lebih besar, reaktor 32 L, dilakukan penelitian skala laboratorium pada reaktor 500 ml, dengan menggunakan
Erlenmeyer 500 ml volume kerja 200 ml. Kultivasi dilakukan pada shaker dengan kecepatan agitasi 180 rpm pada suhu ruang 28 – 32
o
C selama 14 hari. Penentuan 14 hari berdasarkan pada penelitian yang dilakukan Charlena 2010
dimana pada hari ke 14 degradasi bakteri tertinggi. Penelitian skala laboratorium dilakukan untuk mendapatkan perlakuan terbaik dalam mendegradasi heay oil
waste.
Gambar 3 Bagan alir penelitian skala laboratorium
Terhadap perlakuan terbaik dari hasil Rancangan Respon Permukaan RSM, dilanjutkan ke tahapan skala lebih besar yang dilakukan pada reaktor berukuran 32
liter volume kerja 16 liter. Fermentasi dilakukan dengan kecepatan agitasi 120 rpm dan suhu ruang 31 – 32
o
Teknis pelaksanaan pada kedua tahap penelitian adalah sama, yaitu: limbah heavy oil waste dicampurkan sesuai dengan perlakuan tingkat cemaran dalam tanah
ww. Hasil pencampuran ini kemudian ditambahkan air sesuai dengan perlakuan
C selama 28 hari.
HOW 5, 10, 15 Padatan Tanah 10, 25, 40
Air
Bakteri salipiger sp. MY7 dan Bacillus
altitudinis MY12 Dicampur
Proses bioremediasi Reaktor 500 ml, 180 rpm, suhu ruang
Pengamatan dan Analisis
Kategori