Fenotipe tanaman padi dengan ekspresi gen Oshox4 yang meningkat Fenotipe tanaman padi dengan ekspresi gen Oshox4 yang meningkat

60 Hasil pencarian EST expressed sequence tag gen Oshox4 menunjukkan bahwa ekspresi Oshox4 dapat ditemu kani pada semua tahap perkembangan padi dan terinduksi oleh serangan penyakit blas Tabel 8. Tabel 8 Pencarian esxpressed sequence tag EST menggunakan cDNA gen Oshox 4 Nomor aksesi Nomor klon Deskripsi Kesamaan CB655713.1 OSJNE09g03 mRNA Oryza O. sativa 99 CX112690.1 EI077T09 Pustaka cDNA Oryza O. sativa seluruh siklus hidup 97 CB659417.1 OSJNEc16G05 cDNA Oryza O. sativa 99 CB655714.1 OSJNEc09G03 mRNA Oryza O. sativa 98 CX116407.1 EI104D09 Pustaka cDNA Oryza O. sativa seluruh siklus hidup 94 CX115337.1 EI098H2O Pustaka cDNA Oryza O. sativa seluruh siklus hidup 98 CB678883.1 OSJNEf01k19 mRNA Oryza O. sativa 98 CX102029.1 EI061D02 Pustaka cDNA Oryza O. sativa seluruh siklus hidup 98 BQ906800.1 M019F01 Pustaka cDNA Oryza O. sativa dari daun terinduksi penyakit blas 98 1.4 Peningkatan ekspresi gen Oshox4 di bawah kendali promoter konstitutif dari 35S-CaMV

1.4.1 Fenotipe tanaman padi dengan ekspresi gen Oshox4 yang meningkat

Gen Oshox4 difusikan dengan promoter 35S-CaMV selanjutnya disebut 35S-Oshox4. Gen ini lalu diintroduksikan ke dalam genom padi dan A. thaliana untuk melihat pengaruh ekspresi berlebih dari gen HD-Zip padi Oshox4 pada tanaman padi dan kemungkinan penggunaannya untuk meningkatkan ketahanan terhadap kekeringan. Tanaman transgenik padi Nipponbare yang mengandung 35S-Oshox4 memperlihatkan ekspresi gen 35S-Oshox4 lebih tinggi daripada tanaman kontrol Gambar 28A. Tanaman kontrol yang digunakan adalah tanaman transgenik yang mengandung konstruksi DR5-GUS. Konstruksi DR5- GUS adalah konstruksi ekspresi gen GUS yang diatur oleh promoter DR5. Kontrol transgenik dipakai untuk menunjukkan bahwa perubahan fenotipe yang Formatted: Spanish Mexico 61 terjadi pada padi transgenik yang mengandung gen 35S-Oshox4 bukan karena pengaruh insersi acak T-DNA. Gambar 27 Homeodomain dan motif leucine zipper pada Oshox4. Urutan asam amino didasarkan pada aksesi AP005574 untuk Oshox4 A Urutan asam amino daerah homeodomain Oshox4. Tiga heliks alfa Antennapedia Antp dari D. melanogaster ditunjukkan dengan garis. Residu protein yang umum dimiliki ditunjukkan dengan Δ warna hitam, sedangkan kesamaan Oshox4 dan Antp ditunjukkan dengan tanda -. B Urutan asam amino daerah leucine-zipper dari Oshox4 . Motif leucine yang berulang diperbandingkan dengan basic leucine zipper bZip dari CEBP mamalia yang ditunjukkan dengan garis, sementara lokasi leusin diperlihatkan dengan tanda L. C Homeodomain dan motif leucine zipper Oshox4. Posisi tiga heliks alfa dari homeodomain diletakkan pada kotak dan asam amino leusin pada urutan asam amino protein . 1.4 Peningkatan ekspresi gen Oshox4 di bawah kendali promoter konstitutif dari 35S-CaMV

1.4.1 Fenotipe tanaman padi dengan ekspresi gen Oshox4 yang meningkat

Formatted: Swedish Sweden Formatted: Swedish Sweden 62 Gen Oshox4 difusikan dengan promoter 35S-CaMV selanjutnya disebut 35S-Oshox4. Gen ini lalu diintroduksikan ke dalam genom padi dan A. thaliana untuk melihat pengaruh ekspresi berlebih dari gen HD-Zip padi Oshox4 pada tanaman padi dan kemungkinan penggunaannya untuk meningkatkan ketahanan terhadap kekeringan. Tanaman transgenik padi Nipponbare yang mengandung 35S-Oshox4 memperlihatkan ekspresi gen 35S-Oshox4 lebih tinggi daripada tanaman kontrol Gambar 28A. Tanaman kontrol yang digunakan adalah tanaman transgenik yang mengandung konstruksi DR5-GUS. Konstruksi DR5- GUS adalah konstruksi ekspresi gen GUS yang diatur oleh promoter DR5. Kontrol transgenik dipakai untuk menunjukkan bahwa perubahan fenotipe yang terjadi pada padi transgenik yang mengandung gen 35S-Oshox4 bukan karena pengaruh insersi acak T-DNA. Tabel 8 Pencarian esxpressed sequence tag EST menggunakan cDNA gen Oshox 4 Nomor aksesi Nomor klon Deskripsi Kesamaan CB655713.1 OSJNE09g03 mRNA O. sativa 99 CX112690.1 EI077T09 Pustaka cDNA O. sativa seluruh siklus hidup 97 CB659417.1 OSJNEc16G05 cDNA O. sativa 99 CB655714.1 OSJNEc09G03 mRNA O. sativa 98 CX116407.1 EI104D09 Pustaka cDNA O. sativa seluruh siklus hidup 94 CX115337.1 EI098H2O Pustaka cDNA O. sativa seluruh siklus hidup 98 CB678883.1 OSJNEf01k19 mRNA O. sativa 98 CX102029.1 EI061D02 Pustaka cDNA O. sativa seluruh siklus hidup 98 BQ906800.1 M019F01 Pustaka cDNA O. sativa dari daun terinduksi penyakit blas 98 Semua tanaman transgenik padi yang mengandung peningkatan ekspresi gen Oshox 4 memperlihatkan fenotipe kerdil dengan reduksi tinggi tanaman. Tanaman transgenik yang mengandung tingkat ekspresi Oshox4 tinggi ini dapat dikelompokkan menjadi tiga berdasarkan pertumbuhan vegetatifnya. Ketiga kelompok tersebut adalah kelompok dengan fenotipe vegetatif ringan, sedang, dan Formatted: English U.S. 63 berat Gambar 28 B-D. Kelompok vegetatif ringan diartikan sebagai kelompok yang menunjukkan fenotipe pertumbuhan tidak berbeda dengan kontrol. Kelompok dengan kategori vegetatif sedang diartikan sebagai kelompok dengan fenotipe pertumbuhan vegetatif berbeda dengan kontrol. Kelompok berat adalah kelompok dengan kondisi petrumbuhan vegetatif sangat berbeda dengan kontrol. Formatted: Dutch Netherlands Formatted: I ndent: Left: 0,95 cm 64 Gambar 27 Homeodomain dan motif leucine zipper pada Oshox4. Urutan asam amino didasarkan pada aksesi AP005574 untuk Oshox4 A Urutan asam amino daerah homeodomain Oshox4. Tiga heliks alfa Antennapedia Antp dari D. melanogasterrosophila ditunjukkan dengan garis. Residu protein yang umum dimiliki ditunjukkan dengan Δ warna hitam, sedangkan kesamaan Oshox4 dan Antp ditunjukkan dengan tanda -. B Urutan asam amino daerah leucine-zipper dari Oshox4. Motif leucine yang berulang diperbandingkan dengan basic leucine zipper bZip dari CEBP mamalia yang ditunjukkan dengan garis, sementara lokasi leusin diperlihatkan dengan tanda L. C Homeodomain dan motif leucine zipper Oshox4. Posisi tiga heliks alfa dari homeodomain diletakkan pada kotak dan asam amino leusin pada urutan asam amino protein . Formatted: Swedish Sweden Formatted: Font: I talic, Swedish Sweden Formatted: Swedish Sweden Formatted: Swedish Sweden Formatted: Swedish Sweden Formatted: Swedish Sweden Formatted: Swedish Sweden Formatted: Font: Not Bold, Swedish Sweden 65 1.4 Peningkatan ekspresi gen Oshox4 di bawah kendali promoter konstitutif dari 35S-CaMV

1.4.1 Fenotipe tanaman padi dengan ekspresi gen Oshox4 yang meningkat