Analisis pola ekspresi gen Oshox4

75 Gambar 34 Analisis Northern tanaman transgenik mengandung konstruksi RNAi menggunakan konstruksi Hannibal. A. Analisis Northern tanaman mengandung konstruksi PO4 dan T 1 tanaman 35S-Oshox4. B. Analisis Northern tanaman transgenik Nipponbare mengandung konstruksi RNAi-Oshox4. Angka atau kode menunjukkan asal kalus. Tidak dijumpainya perubahan fenotipe yang nyata padi transgenik yang mengandung konstruksi RNAi Oshox4 menunjukkan bahwa mungkin Oshox4 tidak memiliki pengaruh pada fenotipe apabila transkripsinya levelnya diturunkan. Tanaman padi memiliki basal ekspresi Oshox4 yang berbeda-beda. Level ekspresi dibawah basal mungkin tidak memberi pengaruh pada tanaman akan tetapi membawa pengaruh pada penurunan tingkat ketahanan terhadap cekaman kekeringan.

1.6 Analisis pola ekspresi gen Oshox4

Daerah promoter gen Oshox4 yang berukuran kira-kira 2.5 kb difusikan dengan gen penanda GUS selanjutnya disebut dengan PO4. Gen GUS diekspresikan pada jaringan pada daerah daun, akar, lema dan palea, serta embrio. Gambar 35A, D, G, dan I, dibuktikan dengan adanya warna biru pada daerah tersebut. Pada daun, akar, lema dan palea, gen GUS diekspresikan pada bagian jaringan pembuluh. Pada jaringan pembuluh daun, gen GUS terekspresi khusus pada jaringan pembuluh ayak Gambar 35F. Ekspresi GUS juga tampak pada jaringan pembuluh di skutelum Gambar 35H. Ekspresi GUS tidak muncul pada ujung akar melainkan hanya pada bagian akar yang telah berdeferensiasi Gambar 35C. Pada embrio memperlihatkan Oshox4 terekspresi sejak dini. Formatted: Swedish Sweden Formatted: Swedish Sweden Formatted: Spanish Mexico 76 Gambar 35 Lokasi ekspresi gen GUS yang dikendalikan oleh promoter Oshox4 pada jaringan tanaman padi kultivar Nipponbare. A. Jaringan daun. B. Jaringan daun setelah diberikan perlakuan cekaman kekeringan 24 jam. C. Kecambah padi. D. Akar dengan potongan longitudinal. E. Akar dengan potongan transversal. F. Jaringan pembuluh pada daun. G. Lem m a dan palea. H. Potongan longitudinal benih padi. I. Embrio padi. V: jaringan pembuluh. SC: skutelum. PH: pembuluh floemayak . Tanaman yang mengandung PO4 menunjukkan penurunan ekspresi gen GUS pada saat tanaman terpapar kekeringan Tabel 9. Gen GUS masih terdeteksi pada saat 8 jam setelah tanaman mendapat cekaman kekeringan. Setelah 24 jam cekaman kekeringan gen GUS tidak berhasil dideteksi lagi, sementara tanaman yang tidak diberi cekaman kekeringan masih mengekspresikan gen GUS. Formatted: Dutch Netherlands Formatted: Dutch Netherlands Formatted: Spanish Mexico Formatted: Spanish Mexico Formatted: Spanish Mexico 77 Tanaman yang mengandung PO4 menunjukkan penurunan ekspresi gen GUS pada saat tanaman terpapar kekeringan Tabel 9. Gen GUS masih terdeteksi pada saat 8 jam setelah tanaman mendapat cekaman kekeringan. Setelah 24 jam cekaman kekeringan gen GUS tidak berhasil dideteksi lagi, sementara tanaman yang tidak diberi cekaman kekeringan masih mengekspresikan gen GUS. Tabel 9 Ekspresi GUS pada tanaman transgenik pOshox4-GUS saat terpapar cekaman kekeringan Lama Cekaman Kontrol Perlakuan 1 2 1 2 jam + + + + 4 jam + + + + 8 jam + + + + 24 jam + + - - 48 jam + + - - +: ada ekspresi gen GUS -: tidak ada ekspresi gen GUS 2 Hasil penelitian introduksi gen penyandi lintasan biosintesis asam salisilat asal bakteri ke tanaman padi Gen entC dan gen pmsB Verberne et al. 2000 yang merupakan gen penyandi lintasan biosintesis asam salisilat asal bakteri disisipkan ke dalam plasmid pC1300. Ekspresi dari kedua gen pada tanaman padi diatur oleh promoter 35S-CaMV.

2.1 Analisis Northern gen hph