24
3.7. Tahapan Persiapan Percobaan 3.7.1 Pembuatan Larutan Tirode
Larutan buffer fisiologis yang digunakan adalah larutan Tirode. Untuk membuat 1 liter larutan Tirode ditimbang:
CaCl
2
: 0,20 gram MgCl
2
: 0,10 gram KCl
: 0,20 gram NaCl
: 8,00 gram NaH
2
PO
4
: 0,05 gram NaHCO
3
: 1,00 gram D-Glukosa
: 1,00 gram Bahan NaCl, KCl, MgCl
2
, NaH
2
PO
4
, CaCl
2
dilarutkan terpisah dengan akuades sampai larut. NaHCO
3
dan D-Glukosa ditambahkan terakhir setelah semua bahan tercampur agar tidak terjadi pengendapan garam kalsium yang
ditandai dengan kekeruhan. Setelah semua bahan tercampur, larutan diaerasi dengan karbogen O2 95, CO2 5. Selanjutnya larutan diatur pada pH 7,4.
Larutan tirode dapat bertahan selama 24 jam Kitchen, 1984.
3.7.2 Pembuatan Larutan Asetilkolin Klorida
Dalam penelitian ini, agonis kolinergik yaitu asetilkolin klorida digunakan sebagai penginduksi. Senyawa ini dapat menyebabkan kontraksi otot polos pada
ileum. Dibuat larutan induk dengan cara melarutkan asetilkolin klorida ke dalam akuades sehingga didapat konsentrasi 2 x 10
-1
M. Kemudian dibuat larutan yang lebih encer sampai kadar 2 x 10
-6
M dengan faktor pengenceran 5 kali. i. Pembuatan larutan baku asetilkolin klorida
Universitas Sumatera Utara
25
Timbang seksama asetilkolin klorida BM 181,60 gmol seberat 181,60 mg kemudian dilarutkan dalam 5,0 ml akuades. Diperoleh larutan asetilkolin
klorida 2 x 10
-1
M. ii. Pembuatan seri konsentrasi asetilkolin klorida
- Asetilkolin klorida 2 x 10
-2
M Dipipet 500 μl larutan baku asetilkolin 2 x 10
-1
M. Masukkan ke dalam tabung reaksi, tambahkan 4500
μl akuades. Vortex selama 3 menit. - Asetilkolin klorida 2 x 10
-3
M Dipipet 500 μl larutan baku asetilkolin 2 x 10
-2
M. Masukkan ke dalam tabung reaksi, tambahkan 4500
μl akuades. Vortex selama 3 menit. - Asetilkolin klorida 2 x 10
-4
M Dipipet 500 μl larutan baku asetilkolin 2 x 10
-3
M. Masukkan ke dalam tabung reaksi, tambahkan 4500
μl akuades. Vortex selama 3 menit. - Asetilkolin klorida 2 x 10
-5
M Dipipet 500 μl larutan baku asetilkolin 2 x 10
-4
M. Masukkan ke dalam tabung reaksi, tambahkan 4500
μl akuades. Vortex selama 3 menit. - Asetilkolin klorida 2 x 10
-6
M Dipipet 500 μl larutan baku asetilkolin 2 x 10
-5
M. Masukkan ke dalam tabung reaksi, tambahkan 4500 μl akuades. Vortex selama 3 menit.
3.7.3 Pembuatan Larutan Ekstrak Etanol Daun Titanus
Sejumlah 800 mg ekstrak etanol daun Titanus EEDT dilarutkan dengan 1 ml DMSO Dimethil sulfoxida, kemudian dicukupkan dengan larutan tirode
hingga 5 ml. Diperoleh konsentrasi ekstrak 160 mgml larutan stock. DMSO merupakan pelarut yang inert, non-toksik, dan dapat melarutkan hampir seluruh
Universitas Sumatera Utara
26
senyawa dan merupakan pelarut yang semipolar, namun masih dapat bercampur dengan media tirode Velasco, et al., 2003; Bertoluzza, et al., 1979; Brown, et al.,
1963. Batas penggunaan jumlah pelarut DMSO yang ditambahkan ke dalam organ bath
40ml adalah sebesar 400 μl atau 1 vv Husori, 2011.
3.7.4 Pembuatan Larutan Atropin Sulfat
