5
2.3 Teknologi Protein Rekombinan
DNA rekombinan merupakan hasil dari suatu fragmen DNA yang mengandung gen yang akan diklon dan diinsersikan pada molekul DNA sirkular
yang disebut vektor Brown 2003. Vektor tersebut bertindak sebagai wahana yang membawa gen masuk ke dalam sel tuan rumah yang bisa berupa bakteri
maupun sel jenis lainnya. Dalam sel inang tersebut, vektor melakukan replikasi dan menghasilkan banyak kopi atau tiruan yang identik, baik vektor itu sendiri
maupun gen yang dibawanya. Ketika sel inang membelah, kopi molekul DNA rekombinan diwariskan pada progeni dan terjadi replikasi vektor selanjutnya.
Pembelahan sel tersebut akan menghasilkan koloni atau klon sel yang identik. Kloning dan ekspresi GH rekombinan telah berhasil didapatkan dari beberapa
ikan antara lain ikan rainbow trout Sekine et al. 1985, ikan tuna Lin et al. 1995, ikan indian catfish Anathy et al. 2001, ikan mas Li et al. 2003, ikan
mas koki Chan et al. 2003, ikan beronang Funkenstein et al. 2005, dan ikan nila merah Acosta et al. 2007.
Langkah-langkah untuk mendapatkan DNA rekombinan terdiri dari beberapa tahap yaitu isolasi gen yang akan diinsersikan, preparasi vektor,
pembuatan sel kompeten, ligasi, transformasi, isolasi plasmid ataupun cracking, dan kloning Glick Pasternak 2003. Isolasi gen merupakan langkah awal untuk
mendapatkan DNA rekombinan. Gen tersebut diisolasi dari organisme yang akan digunakan dengan menggunakan primer yang disusun berdasarkan data dari bank
gen. Jika gen yang akan diisolasi dari suatu spesies tertentu telah diketahui urutan nukleotidanya, maka primer yang akan digunakan untuk mengisolasi gen target
dapat langsung disusun berdasarkan data tersebut. Akan tetapi, jika data mengenai gen suatu spesies belum ada, maka primer dapat disusun berdasarkan data
nukleotida dari gen target yang sama tetapi berasal dari beberapa spesies yang berbeda.
Brown 2003 menyatakan bahwa vektor merupakan molekul DNA sirkular yang terdapat bebas dalam sel bakteri. Seluruh vektor memiliki paling sedikit 1
rangkaian DNA yang dapat bertindak sebagai asal replikasi sehingga mampu memperbanyak diri di dalam sel dan tidak tergantung pada kromosom bakteri.
Vektor yang terbaik untuk wahana kloning ialah vektor yang memiliki ukuran
6 kurang dari 10 kb. Akan tetapi, pada keadaan tertentu dapat digunakan plasmid
yang lebih besar untuk kloning. Salah satu vektor yang biasa digunakan sebagai vektor kloning adalah
pGEM-T Easy Gambar 2 dan sebagai vektor ekspresi adalah pCold I DNA Takara Gambar 3. Sebagai vektor kloning, pGEM-T Easy memiliki kelebihan
timin yang menggantung di ujungnya yang terbuka sehingga penempelan gen insersi tidak memerlukan enzim restriksi, sedangkan pCold I sebagai vektor
ekspresi merangsang ekspresi gen yang diinsersikan dengan memanfaatkan promotor turunan yang berasal dari gen cspA yang merupakan salah satu gen
cold-shock . Karena vektor ini memanfaatkan promotor turunan dari E. coli, maka
banyak strain E. coli yang dapat dimanfaatkan sebagai host ekspresi. pCold I mengandung TEE, sekuens His-Tag, dan situs pembelahan Faktor Xa Takara
2009.
Gambar 2. Peta vektor pGEM-T Easy Promega 2009
7 Gambar 3. Peta vektor pCold I Takara 2009
2.4 Efek rGH pada Pertumbuhan Ikan
Kategori