23
3.5.5 Pengukuran Kapasitas Antioksidan 3.5.5.1 Pembuatan Larutan Induk Baku Vitamin C
Ditimbang vitamin C sebanyak 100 mg kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 ml, dan dilarutkan dengan aquadest sampai garis tanda.
Diperoleh konsentrasi vitamin C pada Larutan Induk Baku LIB I adalah 1000 µgml.
3.5.5.2 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Dari LIB I 1000 µgml dipipet 7 ml, dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml dan diencerkan dengan aquadest sampai garis tanda
konsentrasi 140 µgml. Kemudian dipipet 0,5 ml, dimasukkan ke dalam tabung reaksi ditambahkan 5 ml larutan pereaksi fosfomolibdenum. Diperoleh
konsentrasi vitamin C pada larutan ini adalah 12,7273 µgml. Kemudian diinkubasi selama 60 menit pada suhu 90ºC dan didinginkan pada suhu kamar
kemudian diukur absorbansinya pada panjang gelombang 400-800 nm.
3.5.5.3 Penentuan Waktu Kerja
Dari LIB I 1000 µgml dipipet 7 ml, dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml dan diencerkan dengan aquadest sampai garis tanda
konsentrasi 140 µgml. Kemudian dipipet 0,5 ml, dimasukkan ke dalam tabung reaksi ditambahkan 5 ml larutan pereaksi. Diperoleh konsentrasi
vitamin C pada larutan ini adalah 12,7273 µgml. Kemudian diinkubasi selama 60 menit pada suhu 90ºC dan didinginkan pada suhu kamar kemudian diukur
absorbansinya pada panjang gelombang maksimum yang didapat pada
Universitas Sumatera Utara
24 penentuan panjang gelombang maksimum mulai menit ke-21 setelah sampel
diinkubasi hingga menit ke-50 dengan interval waktu 1 menit.
3.5.5.4 Pengukuran Kurva Kalibrasi Vitamin C
Dari LIB I dipipet 4 ml, 5 ml, 6 ml, 7 ml dan 8 ml, masing-masing dimasukkan ke dalam labu ukur 50 ml, diencerkan dengan aquadest hingga
garis tanda sehingga konsentrasi vitamin C yang diperoleh adalah 80 µgml, 100 µgml, 120 µgml, 140 µgml dan 160 µgml. Kemudian dipipet masing-
masing 0,5 ml, dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 5 ml pereaksi. Konsentrasi vitamin C yang diperoleh adalah 7,2727 µgml, 9,0909
µgml, 10,9091 µgml, 12,7273 µgml dan 14,5454 µgml. Contoh perhitungan konsentrasi larutan standar dapat dilihat pada Lampiran 3, halaman 43.
Kemudian diinkubasi pada suhu 90ºC selama 60 menit dan didinginkan pada suhu kamar kemudian diukur absorbansinya pada panjang gelombang
maksimum yang didapat pada penentuan panjang gelombang maksimum dalam waktu kerja yang diperoleh.
3.5.5.5 Uji Kapasitas Antioksidan dari Hasil Maserasi Herba Seledri
