BAB 3 BAHAN DAN METODA
3.1 Waktu dan Tempat
Penelitian ini akan dilaksanakan pada bulan Agustus 2013 sampai dengan Desember 2013 di Instalasi Biologi Lingkungan Balai Teknik Kesehatan dan
Lingkungan Pengendalian Penyakit, Medan dan Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sumatera Utara,
Medan.
3.2 Alat dan Bahan
Alat yang digunakan ialah timbangan analitik, cawan petri, blender, erlenmeyer, shaker
, oven, vortex, propipet, bunsen, jarum, ose bengkok, cotton swab, pipet serologi, autoklaf, penangas air, spektrofotometer, Bio Hazard Safety, pipet
mikro, hot plate, sentrifuse, buret, kertas cakram, statif dan klem. Bahan yang digunakan ialah isolat bakteri Bacillus cereus DA 5.2.3 yang
diisolasi dari usus udang Penaeus vannamae asal tambak udang lokal di Jawa Barat dan Pseudomonas aeruginosa sebagai kontrol positif Koleksi Laboratorium
Mikrobiologi, FMIPA USU. Media yang digunakan ialah Sea Water Complex SWC dengan komposisi air laut 750 ml, akuades 250 ml, gliserol 1,5, ekstrak
yeast 0,5, agar 20, bacto pepton 2,5 dan campuran pakan udang merk
pakan Global 850,870, minyak ikan serta media agar yang memiliki komposisi 2,5 agar, 2 Tween 80 dan 0,01 Methyl red. Reagen yang digunakan ialah,
NaOH 0,01 N, NaCl, indikator phenolftalein.
3.3 Deteksi Enzim Lipase di Media Lipid
Sebelum melakukan uji pendugaan aktivitas enzim lipase, isolat bakteri Bacillus cereus
DA 5.2.3 diremajakan terlebih dahulu untuk mendapatkan hasil yang maksimal di media SWC Sea Water Complex padat. Sebagai kontrol
positif Pseudomonas aeruginosa diremajakan juga di media Nutrient Agar NA
Universitas Sumatera Utara
Uji kualitatif ini dilakukan dengan 2 media berbeda yaitu media lipid minyak ikan dan media pakan pakan udang. Setelah dilakukan peremajaan 1 koloni
isolat bakteri Bacillus cereus DA 5.2.3 dan Pseudomonas aeruginosa lalu isolat ditotolkan di masing-masing media lipid dan pakan. Media lipid dan pakan yang
telah ditotol koloni bakteri Bacillus cereus DA 5.2.3 dan Pseudomonas aeruginosa
lalu diinkubasi selama 48 jam dan diamati perubahan warnanya.
3.4 Kemampuan Pertumbuhan Koloni dengan Konsentrasi Pakan Berbeda