Analisis campuran siproheptadin HCI dan ketotifen fumarat dengan metode spektrofotometri ultraviolet [EV] aplikasi derivatif.

(1)

x INTISARI

Siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat merupakan obat antihistamin. Siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat memiliki struktur kimia yang mirip dan keduanya larut dalam metanol, sehingga akan sulit dipisahkan secara konvensional, oleh karena itu kadar kedua senyawa dapat ditentukan secara simultan dengan metode spektrofotometri UV aplikasi derivatif. Tujuan dari penelitian untuk mengetahui akurasi, presisi, LOD dan LOQ dari metode yang digunakan.

Penelitian ini bersifat non-eksperimental deskriptif. Campuran siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat dibuat dalam 2 seri perbandingan dengan 6 kali pengulangan yaitu 2:1 dan 1:1. Penelitian dilakukan dengan membuat spektra serapan, baik spektra normal maupun spektra derivat pertama. Spektra derivatif pertama merupakan plot dA/dλ_lawanλ_{. Panjang gelombang} _zero crossing siproheptadin HCl pada derivat pertama ada pada 287 nm, sedangkan panjang gelombang zero crossing ketotifen fumarat ada pada 297 nm. Persamaan kurva baku dibuat dengan persamaan regresi antara konsentrasi vs amplitudo.

Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa metode spektrofotometri UV dengan aplikasi derivatif terhadap campuran siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat memiliki akurasi dan presisi yang baik. LOD dan LOQ untuk siproheptadin HCl sebesar 9,13 ppm dan 23,78 ppm, sedangkan untuk ketotifen fumarat sebesar 9,08 ppm dan 29,86 ppm.

Kata kunci : siproheptadin HCl, ketotifen fumarat, aplikasi derivatif

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(2)

xi ABSTRACT

Cyproheptadine HCl and ketotifen fumarate are antihistamine. Cyproheptadine HCl and ketotifen fumarate have similar chemical structure and both soluble in methanol. So, it will be very difficult to separate them conventionally. That’s why the dose from both substances can be conducted simultaneously by using derivative application with ultraviolet spectrophotometry method. This research was aimed to determine the accuracy, precision, LOD and LOQ of the method which is used.

This research was non-experimental descriptive. Cyproheptadine HCl and ketotifen fumarate was made in two comparison of series with six replication, they were 2:1 and 1:1. This research was done by make the absorbance spectra, both normal spectrum or first derivative spectrum. The first derivative spectrum is a plot of dA/dλ_vsλ_{. Cyproheptadine HCl’s zero crossing was at 287 nm at first}

derivative spectrum and ketotifen fumarate’s zero crossing was at 297 nm at first derivative. The standart equation curve was made by regression equation between concentration vs amplitude.

The result shows that determination using derivative application of ultraviolet spectrophotometry method towards the mixture of cyproheptadine HCl and ketotifen fumarate has good accuracy and precision. LOD and LOQ of cyproheptadine HCl are 9.13 ppm and 23.78 ppm respectively, while LOD and LOQ of ketotifen fumarate are 9.08 ppm and 29.86 ppm respectively.

Keywords: Cyproheptadine HCl, ketotifen fumarate, derivative application

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(3)

ANALISIS CAMPURAN SIPROHEPTADIN HCl DAN KETOTIFEN FUMARAT DENGAN METODE SPEKTROFOTOMETRI

ULTRAVIOLET (UV) APLIKASI DERIVATIF

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)

Progam Studi Ilmu Farmasi

KATA PENGANTAR

Oleh :

Maria Kartika Rachmawatie

NIM: 048114046

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA

2008

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(4)

ANALISIS CAMPURAN SIPROHEPTADIN HCl DAN KETOTIFEN FUMARAT DENGAN METODE SPEKTROFOTOMETRI

ULTRAVIOLET (UV) APLIKASI DERIVATIF

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)

Progam Studi Ilmu Farmasi

KATA PENGANTAR

Oleh :

Maria Kartika Rachmawatie

NIM: 048114046

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA

2008

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(5)

iii

Skripsi Berjudul

ANALISIS CAMPURAN SIPROHEPTADIN HCl DAN KETOTIFEN FUMARAT DENGAN METODE SPEKTROFOTOMETRI

ULTRAVIOLET(UV) APLIKASI DERIVATIF

Yang disusun oleh: Maria Kartika Rachmawatie

NIM: 048114046

telah disetujui oleh:

Pembimbing I

Christine Patramurti, M.Si., Apt. Tanggal 27 Mei 2008

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(6)

Pengesahan Skripsi Berjudul

ANALISIS CAMPURAN SIPROHEPTADIN HCl DAN KETOTIFEN FUMARAT DENGAN METODE SPEKTROFOTOMETRI

ULTRAVIOLET (UV) APLIKASI DERIVATIF

Oleh:

Maria Kartika Rachmawatie NIM: 048114046

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(7)

BERDOA DAN BEKERJA

Kita tidak perlu khawatir akan masa depan... Karena Tuhan akan memenuhi kebutuhan kita... Bila kita bekerja keras tiap hari.

”

No

GAINS

without

PAINS

_”

NO ONE IS INDISPENSABLE. NO ONE IS TOTALLY INDEPENDENT

Karya ini saya persembahkan untuk:

Orang tua, kakak, adek, keluarga besar, masku dan sahabat

Seluruh teman-teman angkatan 2004 dan satu kelompok penelitian khususnya, Dan untuk almamater yang Tika cintai dan hormati

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(8)

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS

Yang bertanda tangan di bawah ini, saya mahasiswa Universitas Sanata Dharma: Nama : Maria Kartika Rachmawatie

NIM : 048114046

Demi pengembangan ilmu pengetahuan, saya memberikan kepada Perpustakaan Universitas Sanata Dharma karya ilmiah saya yang berjudul:

ANALISIS CAMPURAN SIPROHEPTADIN HCl DAN KETOTIFEN

FUMARAT DENGAN METODE SPEKTROFOTOMETRI

ULTRAVIOLET (UV) APLIKASI DERIVATIF

Dengan demikian saya memberika kepada Perpustakaan Universitas Sanata Dharma hak untuk menyimpan, mengalihkan dalam bentuk media lain, mengelolanya dalam bentuk pangkalan data, mendistribusikan secara terbatas, dan mempublikasikan ke internet atau media lain untuk kepentingan akademis tanpa meminta ijin dari saya maupun memberikan royalti kepada saya selama tetap mencantumkan nama saya sebagai penulis.

Demikian pernyataan ini saya buat dengan sebenarnya. Dibuat di Yogyakarta

Pada tanggal 26 Mei 2008 Yang menyatakan

Maria Kartika Rachmawatie

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(9)

vii

KATA PENGANTAR

Puji dan syukur kepada Tuhan Yang Maha Kasih untuk rahmat-Nya yang sangat besar sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi berjudul

”Analisis Campuran Siproheptadin HCl dan Ketotifen Fumarat dengan

Metode Spektrofotometri Ultraviolet (UV) Aplikasi Derivatif”.

Skripsi ini dibuat untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.) program studi Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

Selama penyusunan skripsi ini, penulis banyak sekali mendapat banyak bantuan dan dukungan dari berbagai pihak. Maka dalam kesempatan ini penulis ingin mengucapkan banyak terima kasih kepada:

1. Ibu Rita Suhadi, M. Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Drama.

2. Ibu Christine Patramurti, M. Si., Apt. selaku dosen pembimbing yang selalu sabar membimbing penelitian dan penyusunan skripsi.

3. Bapak Drs. Sulasmono, Apt. dan Ibu Lucia Wiwid Wijayanti, M. Si. selaku dosen penguji untuk semua saran dan masukan yang telah diberikan kepada penulis.

4. Pak Mukmin, Pak Prapto, Mas Sarwanto, Pak Parlan, Mas Kunto, Mas Narto, Pak Tatmo, dan Mbak Sari untuk semua bantuannya.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(10)

viii

5. Mama, Papa, Mbak Mesya, Gilang, dan keluarga besar untuk dukungan baik moril dan materil. Mas Stev buat pantun n joke-nya yang KATRO abiezz

6. Yosef Bayu Adi yang selalu sabar ngadepin Tika, thanks buat dukungan dan perhatiannya.

7. Sahabat-sahabat tersayang: Nono, Chika, Vinna, Yoana Rissa M, S.Farm, Noer, Rintul, Nopheng, Thomas Arian Adrianto, S.Farm. Thanks…

8. Sahabat-sahabat terbaik selama perjalanan: Rian “Ndoet” (untuk diskusi n data), Nopheng, Ci Lyd, A Cin, dan Ismiyati “Reni”, semuanya Thanks...!!!!

9. Teman-teman kelompok praktikum A dan B juga teman-teman angkatan 2004 (FST dan FKK), salam kompak selalu!!!!!

10.Teman-teman KKN: Dita, Yo2k, Tuti, Mami Sita, Dhiyan, Lupe, Teguh, Donnie, dan Rian “Ndoet”.

Dan terima kasih pula kepada semua pihak yang telah membantu yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu.

Penulis menyadari masih banyak kekurangan dalam penyelesaian skripsi ini. Oleh karena itu, penulis menerima semua kritik dan saran yang membangun demi kesempurnaan skripsi ini. Semoga skripsi ini bermanfaat bagi pembaca dan bagi perkembangan ilmu pengetahuan.

Yogyakarta, Maret 2008 Penulis

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(11)

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA

Saya menyatakan dengan sesungguhnya bahwa skripsi yang saya tulis ini tidak memuat karya atau bagian karya orang lain, kecuali yang telah disebutkan dalam kutipan dan daftar pustaka, sebagaimana layaknya karya ilmiah.

Yogyakarta, Maret 2008

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(12)

INTISARI

crossing siproheptadin HCl pada derivat pertama ada pada 287 nm, sedangkan panjang gelombang zero crossing ketotifen fumarat ada pada 297 nm. Persamaan kurva baku dibuat dengan persamaan regresi antara konsentrasi vs amplitudo.

Kata kunci : siproheptadin HCl, ketotifen fumarat, aplikasi derivatif

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(13)

ABSTRACT

derivative spectrum and ketotifen fumarate’s zero crossing was at 297 nm at first derivative. The standart equation curve was made by regression equation between concentration vs amplitude.

Keywords: Cyproheptadine HCl, ketotifen fumarate, derivative application

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(14)

xii

DAFTAR ISI

HALAMAN SAMPUL ... i

HALAMAN JUDUL ... ii

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ... iii

HALAMAN PENGESAHAN ... . ... iv

HALAMAN PERSEMBAHAN ... v

PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI... vi

KATA PENGANTAR ...vii

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ... ix

INTISARI ... x

ABSTRACT ... xi

DAFTAR ISI ... xii

DAFTAR TABEL ...xv

DAFTAR GAMBAR ... xvi

DAFTAR LAMPIRAN...xviii

BAB I. PENDAHULUAN ... 1

A. Latar Belakang... 1

B. Permasalahan ... 3

C. Keaslian penelitian ... 3

D. Manfaat Penelitian ... 3

E. Tujuan Penelitian ... 4

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ... 5

A. Siproheptadin HCl ... 5

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(15)

xiii

B. Ketotifen fumarat ... 6

C. Spektrofotometri Ultraviolet ... 7

D. Analisis multikomponen secara spektrofotometri UV ... 13

E. Spektrofotometri Derivatif………17

F. Parameter Validitas Metode ... 18

G. Keterangan Empiris ... 21

BAB III. METODOLOGI PENELITIAN ... 23

A. Jenis Rancangan Penelitian ... 23

B. Definisi Operasional ... 23

C. Bahan – bahan Penelitian... 24

D. Alat – alat Penelitian... 24

E. Tata Cara Penelitian... 24

1. Pembuatan larutan stok siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat ... 24

2. Pembuatan seri larutan baku siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat ... 25

3. Pengamatan spektra masing – masing senyawa ... 25

4. Penentuan zero crossing masing – masing senyawa ... 25

5. Pembuatan persamaan kurva baku... 25

6. Pengamatan amplitudo larutan sampel dan perhitungan kadar campuran siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat (2:1) dan (1:1)... 26

F. Analisis Hasil ... 27

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(16)

xiv

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ... 29

A. Pembuatan Larutan Baku ... 29

B. Pengamatan Spektra masing – masing Senyawa... 30

C. Penentuan Zero Crossing masing – masing Senyawa ... 32

D. Pembuatan Persamaan Kurva Baku... 36

E. Penetapan Kadar Sampel dalam Campuran ... 40

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN …... 47

DAFTAR PUSTAKA ... 48

LAMPIRAN ... 51

BIOGRAFI PENULIS ... 66

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(17)

DAFTAR TABEL

Tabel I. Pelarut untuk daerah ultraviolet dan daerah tampak ... 11

Tabel II. Parameter validitas metode... 21

Tabel III. Data Kurva Baku Siproheptadin HCl ... 38

Tabel IV. Data Kurva Baku Ketotifen Fumarat... 39

Tabel V. Kadar siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat dalam sampel 2:1 ... 43

Tabel VI. Kadar siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat dalam sampel 1:1 ... 44

Tabel VII. LOD dan LOQ siproheptadin HCl dan Ketotifen fumarat... 45

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(18)

xvi

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Rumus Bangun Siproheptadin HCl ... 5

Gambar 2. Rumus Bangun Ketotifen Fumarat... ……... ...…. ...6

Gambar 3. Diagram tingkat energi elektronik... 8

Gambar 4. Sistem kromofor dari siproheptadin HCl... 10

Gambar 5. Sistem kromofor dan auksokrom dari ketotifen fumarat... 10

Gambar 6. Spektra serapan yang pada panjang gelombang terjadinya serapan maksimum masing-masing komponen tidak saling tumpang tindih... 14

Gambar 7. Spektra serapan tumpang tindih satu daerah... 15

Gambar 8. Spektra serapan tumpang tindih dua daerah ... 16

Gambar 9. Spektrogram derivatif pertama sampai keempat suatu pita gauss ... 18

Gambar 10. Spektra serapan normal dari tiga konsentrasi siproheptadin HCl ... 30

Gambar 11. Spektra serapan normal dari tiga konsentrasi ketotifen fumarat ... 31

Gambar 12. Spektra tumpang tindih dari siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat... 32

Gambar 13. Spektra derivat pertama siproheptadin HCl delta panjang gelombang 1 nm dan 2 nm ... 33

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(19)

xvii

Gambar 14. Spektra derivat pertama ketotifen fumarat delta panjang gelombang 1 nm dan 2 nm ... 34 Gambar 15. Spektra gabungan derivat pertama siproheptadin HCl dan

ketotifen fumarat dengan delta panjang gelombang 1 nm ... 34 Gambar 16. Spektra gabungan derivat pertama siproheptadin HCl dan

ketotifen fumarat dengan delta panjang gelombang 2 nm ... 35 Gambar 17. Kurva baku siproheptadin HCl... 38 Gambar 18. Kurva baku ketotifen fumarat ... 39 Gambar 19. Spektra normal siproheptadin HCl, ketotifen fumarat dan

sampel 2:1... 41 Gambart 20. Spektra normal siproheptadin HCl, ketotifen fumarat dan

sampel 1:1... 41 Gambar 21. Spektra gabungan derivat pertama siproheptadin HCl,

ketotifen fumarat dan sampel 2:1 ... 42 Gambar 22. Spektra gabungan derivat pertama siproheptadin HCl,

ketotifen fumarat dan sampel 1:1 ... 42

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(20)

xviii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Sertifikat analisis ketotifen fumarat ... 49 Lampiran 2. Sertifikat analisis siproheptadin HCl ... 50 Lampiran 3. Tabel penimbangan baku siproheptadin HCl dan contoh

perhitungan seri larutan baku siproheptadin HCl... 51 Lampiran 4. Tabel penimbangan baku siproheptadin HCl dan contoh

perhitungan seri larutan baku ketotifen fumarat ... 53 Lampiran 5. Data persamaan kurva baku Siproheptadin HCl... 55 Lampiran 6. Data persamaan kurva baku ketotifen fumarat ... 56 Lampiran 7. Tabel penimbangan baku siproheptadin HCl dan ketotifen

fumarat (2:1) dan contoh perhitungan konsentrasi sampel... 57 Lampiran 8. Tabel penimbangan baku siproheptadin HCl dan ketotifen

fumarat (1:1) dan contoh perhitungan konsentrasi sampel... 59 Lampiran 9. Contoh perhitungan kadar siproheptadin HCl dan ketotifen

fumarat dalam campuran 2:1... 61 Lampiran 10. Contoh perhitungan kadar siproheptadin HCl dan ketotifen

fumarat dalam campuran 1:1 ... 61 Lampiran 10. Contoh perhitungan kadar ,recovery, koevisien variansi

(KV) siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat... 61 Lampiran 11. Hasil perhitungan kadar, recovery, KV dari sampel... 61 Lampiran 12. Penentuan zero crossing replikasi II ... 65

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(21)

xix

Lampiran 13. Penentuan zero crossing replikasi III... 65

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(22)

BAB I PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Saat ini patient safety merupakan isu kritis yang harus ditangani dengan tepat karena menyangkut keselamatan pasien. Patient safety salah satunya berkaitan dengan kesesuaian antara dosis, bentuk sediaan dan umur pasien. Pasien anak umumnya sulit menerima sediaan dalam bentuk padat, sehingga lebih sering diberikan dalam bentuk sirup atau pulveres. Sirup merupakan sediaan yang paling cocok untuk pasien anak karena rasanya yang dapat diterima, tetapi tidak semua obat dapat diberikan dalam bentuk sirup hal ini terkait dengan masalah stabilitas dan kelarutannya dalam larutan. Hal ini dapat diatasi dengan pemberian obat dalam bentuk pulveres yang lebih mudah ditelan daripada tablet.

Kelebihan bentuk sediaan pulveres yaitu dokter dapat mengkombinasikan beberapa zat aktif menjadi satu untuk mencapai tujuan terapi. Salah satu contoh bentuk kombinasi obat yang sering diberikan oleh Rumah Sakit X di Yogyakarta untuk pengobatan asma pada pasien anak yaitu kombinasi antara siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat (2:1) sebagai obat anti-histamin.

Pulveres yang merupakan kombinasi dari siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat (2:1) dibuat dengan cara menggerus tablet kemudian dibagi secara visual sesuai dengan dosis yang diinginkan dan dikemas. Pembagian obat secara visual tidak menjamin adanya keseragaman dari sediaan.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(23)

Obat hasil racikan yang digunakan di Rumah Sakit X di Indonesia umumnya tidak melalui pemeriksaan secara kualitatif maupun kuantitatif, sehingga tidak ada jaminan keamanannya. Menurut KEPMENKES NO. 1197/MENKES/SK/X/2004 mengenai STANDAR PELAYANAN FARMASI DI RUMAH SAKIT (Anonim, 2007) menyatakan bahwa standar pelayanan farmasi harus sesuai dengan CPOB (Cara Pembuatan Obat yang Baik), sehingga obat jadi hasil produksi suatu industri obat merupakan produk akhir dan tidak diperkenankan mengalami formulasi ulang di dalam penggunaannya. Adanya perubahan bentuk sediaan dari tablet menjadi pulveres di dalam produksinya akan mempengaruhi stabilitas dari sediaan yang dibuat, baik stabilitas fisika maupun stabilitas kimia. Stabilitas fisika dapat dilihat baik dari segi warna, bau, rasa, dan bentuknya. Stabilitas kimia dapat dilihat dari kandungan zat aktif yang dapat diketahui melalui pemerikasaan kuantitatif.

Metode analisis yang sesuai sangat dibutuhkan di dalam pemeriksaan kuantitatif. Salah satu metode yang dapat digunakan untuk menganilisis suatu zat dalam campuran yaitu secara spekrofotometri baik dengan teknik tunggal ataupun simultan tergantung dari spektra masing-masing komponen. Siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat memiliki struktur kimia yang mirip dan keduanya larut dalam alkohol sehingga sangat sulit dipisahkan secara konvensional, oleh karena itu untuk penetapan kadarnya dapat dilakukan secara simultan. Salah satu teknik penetapan kadar secara simultan dengan spektrofotometri yaitu metode derivatif. Spektra derivat pertama merupakan plot dA/dλ_lawan λ_{, sedangkan spektra}

derivatif ke dua merupakan plot d2A/dλ2_lawanλ_{. Persamaan kurva baku dibuat}

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(24)

dengan persamaan regresi antara kadar vs amplitudo. Agar metode ini memberikan hasil yang dapat dipertanggungjawabkan, perlu dilakukan validasi metode. Suatu metode dikatakan memiliki validitas baik maka akurasi, presisi, koefisien korelasi (r) harus memenuhi persyaratan validitas yang didukung oleh LOD dan LOQ masing-masing senyawa.

1. Permasalahan

Bagaimanakah akurasi, presisi, linearitas, LOD dan LOQ dari metode spektrofotometri ultraviolet (UV) dengan aplikasi derivatif untuk penetapan kadar siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat?

2.Keaslian Penelitian

Penetapan kadar campuran menggunakan spektrofotometri ultraviolet (UV) dengan aplikasi derivatif sudah banyak dilakukan, akan tetapi, penetapan kadar siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat menggunakan spektrofotometri ultraviolet (UV) aplikasi derivatif belum pernah dilakukan.

3. Manfaat Penelitian

a. Manfaat metodologis : Metode ini diharapkan dapat digunakan sebagai metode alternatif di dalam menetapkan kadar senyawa dalam campuran.

b. Manfaat praktis : Dengan adanya penelitian ini, penulis berharap

memberikan solusi mengenai metode yang cepat dan praktis yang dapat digunakan untuk penetapan kadar.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(25)

B. Tujuan

Untuk mengetahui akurasi, presisi, linearitas, LOD dan LOQ dari metode spektrofotometri ultraviolet (UV) dengan aplikasi derivatif di dalam menetapkan kadar siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat dalam campuran.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(26)

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Siproheptadin HCl

Siproheptadin HCl mengandung tidak kurang dari 98,5% dan tidak lebih dari 100,5% C21H21N.HCl, dihitung terhadap zat yang telah dikeringkan. Pemerian : serbuk hablur, putih sampai agak kuning; tidak berbau atau praktis tidak berbau. Siproheptadin HCl sukar larut dalam air, mudah larut dalam metanol, larut dalam kloroform, agak sukar larut dalam etanol, praktis tidak larut dalam eter (Anonim, 1995). Siproheptadin HCl dapat ditetapkkan kadarnya dengan metode spektrofotometri ultraviolet, didasarkan adanya serapan siproheptadin HCl pada daerah ultraviolet. Hal ini dapat dilihat bahwa dalam larutan asam, siproheptadin HCl memiliki panjang gelombang serapan maksimum 286 nm (Clarke, 1986).

CH₃

H Cl

C21H21N.HCl.11/2H2O; BM 350,89

Gambar 1. Rumus bangun Siproheptadin HCl (Anonim, 1995)

Siproheptadin HCl memiliki indikasi sebagai hay fever, migren dan urtikaria. Efek samping dari penggunaan siproheptadin HCl antara lain mual,

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(27)

muntah, anemia hemolitik, trombositopenia, leukopenia, agranulositosis. Dosis siproheptadin HCl 4 mg 3-4 kali sehari, rentang dosis: 4-20 mg sehari maksimal 32 mg sehari; untuk anak dibawah 2 tahun tidak dianjurkan; anak 2-6 tahun 2 mg 2-3 kali sehari maksimal 12 mg sehari; anak 7-14 tahun 4 mg 2-3 kali sehari maksimal 16 mg sehari. Dosis yang diberikan unutk migren adalah 4 mg diikuti 4 mg setelah 30 menit jika diperlukan; dosis penunjang 4 mg tiap 4-6 jam (Anonim, 2000).

B. Ketotifen fumarat

Ketotifen fumarat berbentuk serbuk kristal berwarna putih dengan titik leleh antara 190˚ sampai dengan 196˚. Ketotifen larut dalam air, etanol, praktis tidak larut dalam kloroform. Ketotifen fumarat dapat ditetapkan kadarnya dengan metode spektrofotometri ultraviolet, didasarkan adanya serapan ketotifen fumarat pada daerah ultraviolet. Hal ini dapat dilihat bahwa dalam larutan asam, ketotifen fumarat memiliki panjang gelombang serapan maksimum 297 nm (Clarke, 1986).

S O

CH3

C19H19NOS; BM 309,43

Gambar 2. Rumus bangun Ketotifen Fumarat (Anonim, 1989)

Sebagai antihistamin, ketotifen fumarat dilaporkan tidak memiliki manfaat klinis pada asma bronkial dan terbukti mengecewakan. Efek samping dari

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(28)

penggunaan ketotifen fumarat antara lain mulut kering, mengantuk, pusing, dan stimulasi susunan saraf pusat. Ketotifen diberikan dengan dosis 1 mg 2 kali sehari waktu makan, jika perlu dosis dinaikkan 2 mg 2 kali sehari, sedangkan untuk anak diatas 2 tahun dosis yang diberikan yaitu 1 mg 2 kali sehari (Anonim, 2000).

C. Spektrofotometri Ultraviolet (UV)

Spektrofotometer UV-Vis adalah anggota teknik analisis spektroskopik yang memakai sumber radiasi elektromagnetik ultraviolet dekat (190-380 nm) dan sinar tampak (380-780 nm) dengan memakai instrumen spektrofotometer (Mulja dan Suharman, 1995). Spektrofotometer menghasilkan sinar dari spektra dengan panjang gelombang tertentu, dan fotometer adalah alat pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan yang diabsorpsi (Khopkar, 1990).

Prinsip kerja spektrofotometri berdasarkan atas interaksi yang terjadi antara radiasi elektromagnetik dengan atom atau molekul (Mulya dan Suharman, 1995). Adanya interaksi tadi akan menyebabkan terjadinya perpindahan energi dari sinar radiasi ke materi yang disebut absorpsi. Absorpsi oleh atom akan menyebabkan terjadinya transisi elektronik, yaitu peningkatan energi elektron dari tingkat dasar (ground state) ke tingkat yang lebih tinggi (excited state). Transisi ini akan terjadi apabila energi yang diberikan oleh radiasi sama dengan energi ynag dibutuhkan untuk melakukan transisi tersebut.

Transisi elektronik senyawa organik yang dapat terjadi yaitu transisi dari orbital σ → σ*, π → π*, n → σ* dan n → π* yang ditunjukkan oleh gambar berikut:

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(29)

σ_{* Antibonding} π* Antibonding E

n nonbonding

π_Bonding σ_Bonding

Gambar 3. Diagram tingkat energi elektron molekul (Skoog, 1985)

1. Transisi elektron n →π_*

Transisi jenis ini meliputi transisi elektron-elektron heteroatom tak berikatan ke orbital antibonding π_{* seperti Nitrogen, Sulfur, Oksigen, dan}

Halogen. Serapan ini terjadi pada panjang gelombang yang panjang dan intensitasnya rendah (Sastrohamidjojo, 2001).

2. Transisi elektron n →σ_*

Senyawa-senyawa jenuh yang mengandung heteroatom seperti Nitrogen, Sulfur, Oksigen, dan Halogen yang memiliki nonbonding elektron (elektron yang tidak berikatan) di samping elektron σ_{. Elektron} _nonbonding_{ini dapat}

dipromosikan, pada panjang gelombang yang sangat pendek ke keadaan

antibonding σ_{*. Transisi ini terjadi panjang gelombang di bawah 200 nm}

(Christian, 2003).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(30)

3. Transisi elektron π→π_*

Transisi ini terjadi pada elektron di orbital π_{, yaitu pada ikatan rangkap}

dua dan rangkap tiga. Eksitasi ini paling mudah terbaca dan bertanggung jawab terhadap spektra elektronik dalam daerah UV dan tampak (Christian, 2003).

4. Transisi elektron σ→σ_*

Transisi ini memberikan energi yang terbesar dan terjadi pada daerah ultraviolet jauh yang diberikan oleh ikatan tunggal, sebagai contoh pada alkana. . Tingkat energi yang dibutuhkan untuk eksitasi sangat besar (Mulja dan Suharman, 1995).

Transisi elektronik yang berguna dalam penelitian adalah transisi π → π_*

dan n → π_{* karena memberikan spektra pada 200-700 nm. Kedua transisi ini}

membutuhkan adanya kromofor dalam struktur molekulnya, yaitu suatu gugus fungsional tidak jenuh yang meyediakan orbital π yang dapat meyerap pada daerah ultraviolet (Skoog, 1985).

Selain kromofor, dikenal juga istilah auksokrom. Auksokrom merupakan gugus jenuh yang bila terikat pada kromofor mengubah panjang gelombang dan intensitas serapan maksimum, cirinya adalah heteroatom yang langsung terikat pada kromofor (Sastrohamidjojo, 2001). Gugus auksokrom paling sedikit memiliki sepasang elektron bebas yang dapat berinteraksi dengan elektron π_,

misalnya -OH, -NH2 (Skoog, 1985).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(31)

Sistem kromofor siproheptadin HCl adalah sebagai berikut:

Gambar 4. Sistem kromofor dari siproheptadin HCl

Sistem kromofor dan auksokrom ketotifen fumarat adalah sebagai berikut:

Gambar 5. Sistem kromofor dan auksokrom dari ketotifen fumarat

Keterangan = --- dan --- : kromofor

--- : auksokrom

Spektrofotometri UV-Vis dapat melakukan penentuan terhadap sampel yang berupa larutan, gas atau uap (Mulja dan Suharman, 1995). Pengaruh pelarut dan substitusi gugus dapat menggeser intensitas dan panjang gelombang. Pergeseran menuju panjang gelombang yang lebih panjang disebut sebagai pergeseran batokromik, sedangkan pergeseran menuju panjang gelombang yang lebih pendek disebut pergeseran hipsokromik. Pergeseran intensitas menuju intensitas yang lebih besar disebut pergeseran hiperkromik, sedangkan pergeseran menuju intensitas yang lebih kecil disebut hipokromik (Sastrohamidjojo, 2001).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(32)

Menurut Mulya dan Suharman, untuk sampel yang berupa larutan perlu diperhatikan beberapa persyaratan pelarut yang dipakai, antara lain :

1. Pelarut yang dipakai tidak mengandung sistem ikatan rangkap terkonjugasi pada struktur molekulnya dan tidak berwarna.

2. Tidak terjadi interaksi dengan molekul senyawa yang dianalisis. 3. Kemurniannya harus tinggi atau derajat unutk analisis.

Pelarut yang sering digunakan pada umumnya dalam analisis Spektrofotometri UV-Vis adalah air, etanol, sikloheksan, dan isopropanol. Namun demikian perlu diperhatikan serapan pelarut yang dipakai di daerah UV-Vis (penggal UV = UV

cut off) (Mulja dan Suharman, 1995).

Tabel 1. Pelarut untuk daerah ultraviolet dan daerah tampak (Day and Underwood, 1996)

Spektrofotometri dapat digunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif. Transisi elektron ditentukan oleh konfigurasi elektron dari molekul yang bersangkutan, maka transisi ditentukan oleh struktur molekul. Sehingga molekul yang berbeda struktur akan memiliki level energi yang berbeda dan setiap jenis molekul menyerap radiasi pada daerah spektra tertentu. Hal inilah yang menjadi dasar analisis kualitatif dengan metode spektrofotometri. Banyaknya cahaya yang diserap pada panjang gelombang tertentu sesuai dengan jumlah molekul yang ada.

Jenis pelarut UV cut off (nm) Jenis pelarut UV cut off (nm) Air Metanol Sikloheksana Heksana Dietil eter p-Dioksan Etanol 190 210 210 210 220 220 220 Kloroform Karbon tetraklorida Benzena Toluena Piridina Aseton Karbon disulfida 250 265 280 285 305 330 380

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(33)

Hal inilah yang menjadi dasar analisis kuantitatif dengan metode spektrofotometri (Willard, Merrit, Dean, Settle, 1988).

Analisis dengan spektrofotometri UV-Vis selalu melibatkan pembacaan serapan radiasi elektromagnetik oleh molekul atau radiasi elektromagnetik yang diteruskan. Keduanya dikenal sebagai serapan (A) tanpa satuan dan transmitan dengan satuan persen (%T).

Apabila suatu suatu radiasi elektromagnetik dikenakan kepada suatu larutan dengan intensitas radiasi yang datang (I0), maka sebagian radiasi tersebut akan diteruskan (It), diapantulkan (Ir) dan diabsorpsi (Ia), sehingga :

I0 = Ir + Ia + It (1)

Harga Ir (± 4%) dengan demikian dapat diabaikan karena pengerjaan dengan metode spektrofotometri UV-Vis dipakai larutan pembanding sehingga :

I0 = Ia + It (2)

Bouguer, Lambert dan Beer membuat formula secara matematik hubungan antara transmitan (T) atau serapan (A) terhadap intensitas radiasi atau konsentrasi zat yang dianalisis dan panjang sel. Bila konsentrasi (c) dinyatakan dalam mol/liter, dan panjang sel (b) dinyatakan dalam cm, persamaan menjadi:

bc T

A₌_log 1 ₌_!_. _. ₍₃₎

Istilah ! didefinisikan sebagai daya serap molar. Bila c dinyatakan dalam gram/liter, persamaan menjadi:

c b a

A₌ . . ₍₄₎

(Mulja dan Suharman, 1995)

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(34)

Serapan jenis didefinisikan sebagai serapan dari larutan 1% zat terlarut dalam sel dengan ketebalan 1 cm dan diberi lambang A (1cm, 1%) (Anonim, 1995). Menurut Rohman (2007), hubungan antara ε denganE₁1%_cm_yaitu:

"= E₁1%_cmxBM 10 (5)

Harga ε bergantung pada luas penampang senyawa yang terkena radiasi (a) dan probabilitas terjadinya transisi energi yang diserap (p). Hubungan ε_dan

variabel tersebut adalah sebagai berikut :

ε_{= k.p.a (5)}

Keterangan :

ε_{= daya serap molar}

k = suatu tetapan 1020 atau 8,7 !1019 p = probabilitas (0-1)

a = area molekul sasaran, untuk molekul zat organik (a = 10A2)

Transisi elektronik yang diperbolehkan (allowed transition) adalah transisi elektronik yang memberikan harga ε_{> 10}4_{atau harga p = 0,1–1. Sedangkan untuk}

harga ε_{< 10}3_{atau harga p < 0,01 merupakan transisi yang terlarang (}_{for bidden}

transition). Secara umum dapat dikatakan bahwa harga sangat mempengaruhi puncak spektra suatu zat. Rincian harga ε_{terhadap puncak spektra adalah sebagai}

berikut : 1-10 : sangat lemah; 10-102 : lemah; 102-103 : sedang; 103-104 : kuat; 104-105 : sangat kuat (Mulja dan Suharman, 1995).

D. Analisis Multikomponen secara Spektrofotometri Ultraviolet (UV)

Analisis kunatitatif multikomponen merupakan pengembangan analisis komponen tunggalnya. Prinsipnya adalah mencari serapan atau beda serapan tiap-tiap komponen yang memberikan korelasi yang linier terhadap konsentrasi,

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(35)

sehingga dapat dihitung kadar-kadar masing-masing campuran zat secara serentak atau salah satu komponen dalam campurannya dengan komponen lainnya (Mulja dan Suharman, 1995). Pemilihan metode analisis multikomponen didasarkan pada profil kurva serapan masing-masing komponen. Ada tiga kemungkinan profil spektra serapan yang diperoleh dari suatu larutan yang mengandung dua komponen penyerap.

1. Kemungkinan pertama

Spektra tidak saling tumpah tindih atau dimungkinkan untuk menemukan panjang gelombang saat X menyerap dan Y tidak menyerap (λ_{1) serta panjang}

gelombang saat Y menyerap dan X tidak (λ_{2). Oleh sebab itu, komponen X dan Y}

masing-masing dapat diukur pada panjang gelombang tersebut (Day and Underwood, 1996). Spektra ini terlihat pada gambar berikut:

X Y S

e r a p a n

_λ1 _λ2

Panjang gelombang

Gambar 6. Spektra serapan yang pada panjang gelombang terjadinya serapan maksimum masing-masing komponen tidak saling tumpang tindih

(Day and Underwood, 1996)

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(36)

2. Kemungkinan kedua

Spektra yang tumpang tindih satu daerah, seperti pada gambar berikut:

S X Y e

r a p a n

_λ1 λ2

Panjang gelombang

Gambar 7. Spektra serapan tumpang tindih satu daerah (Day and Underwood, 1996)

Y tidak mengganggu pengukuran X pada λ_{1, X menyerap cukup banyak}

bersamaan dengan Y pada λ_{2. Konsentrasi Y dihitung dari serapannya pada}λ₂

yang dapat diperoleh dengan mengurangkan serapan terukur dengan sumbangan serapan larutan X pada λ_{2 yang dihitung dari serapan molar yang telah diketahui}

sebelumnya.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(37)

3. Kemungkinan ketiga

Spektra tumpang tindih dua daerah pada gambar berikut : Ac(λ 2)

Ac(λ 1) AY(λ 2) Y AX(λ1) X AX(λ 2)

AY(λ 1)

Gambar 8. Spektra serapan tumpang tindih dua daerah (Skoog et al.,

1994)

Persamaan simultan untuk spektra tumpang tindih dua daerah: Pada λ_{1 : A1}λ1₌ ε₁λ1_{b C1 dan AII}λ1₌ε_1Iλ1_{b C1I}

Aλ1 = AIλ1 + AIIλ1 = ε₁λ1_{b C1 +}ε₁λ1_{b C1I}

Pada λ_{2 : A1}λ2₌ ε₁λ2_{b C1 dan AII}λ1₌ε_1Iλ2_{b C1I}

Aλ2 = AIλ2 + AIIλ2 = ε₁λ1_{b C1 +}ε_1Iλ2_{b C1I}

Keterangan:

Aλ1 dan Aλ2 = serapan campuran pada λ_{1 dan}λ₂

λ₁

dan A1

λ₂

= serapan komponen I dalam campuran pada λ₁_danλ₂

AIIλ1 dan AIIλ2 = serapan komponen II dalam campuran pada λ_{1 dan}λ₂ ε₁λ1_,ε₁λ2_,ε_1Iλ1_,ε_1Iλ2 _{= serapan molar komponen I dan II pada}λ_{1 dan}λ₂

CI dan CII = konsentrasi componen I dan II dalam campuran

Serapan molar ditentukan dengan menentukan spektra serapan dari tiap komponen secara terpisah dalam larutan yang telah diketahui konsentrasinya. Kemudian dua konsentrasi yang tidak diketahui ditetapkan dengan menyelesaikan persamaan simultan yang diperoleh dari pengukuran serapan pada dua panjang gelombang yang berbeda (Sastrohamidjojo, 2001).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(38)

E. Spektrofotometri Derivatif

Spektrofotometri derivatif merupakan metode manipulatif terhadap spektra pada spektrofotometri ultraviolet dan tampak (Connors, 1982). Pada spektrofotometri konvensional, spektra ini merupakan plot serapan, A, terhadap panjang gelombang, λ_{. Pada metode derivatif, plot A vs}λ_,_{ini ditransformasikan}

menjadi plot !

d dA

vs λ_{, untuk derivatif pertama, dan d}2_{A/ d}λ2_vsλ_{, untuk derivatif}

kedua. Derivasi dapat dibuat yang lebih tinggi, dengan demikian spektrogram akan bertambah dengan sejumlah pemecahan puncak-puncak yang lebih terinci, dan puncak spektra yang melebar, terpecah menjadi dua. Metode ini dapat digunakan untuk analisis campuran tanpa pemisahan terlebih dahulu (Willard et al., 1988).

Analisis kuantitatif spektra derivatif dilakukan dengan jalan menggambarkan selisih serapan (Δ_{A) dua panjang gelombang (}Δ_{A = A}λ₁_{– A}λ₂₎

terhadap rata-rata dua panjang gelombang tersebut yang berderet teratur, yaitu :

! " # $

& + =

2 2

1 '

'm (6)

(Mulja dan Suharman, 1995) Profil penurunan spektra derivat dari spektra normal sampai derivat ke empat tampak pada gambar berikut ini:

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(39)

Gambar 9. Bentuk spektrogram derivatif pertama sampai keempat suatu pita Gauss (Rattenbury, 1981)

Berdasarkan gambar 9 dapat dibaca bahwa pada spektra derivat pertama, garis akan melewati nol pada saat y = 0. Pada panjang gelombang zero crossing

suatu senyawa tidak mempunyai serapan atau ₌0 !

d dA

. Derivatif yang lebih tinggi

dari serapan sering kali dimaksudkan untuk mendapatkan spektra yang lebih spesifik. Dalam spektra derivatif, kemampuan unutk mendeteksi dan mengukur gambaran spektra dinaikkan cukup besar. Bentuk spektra yang karakteristik ini mampu membedakan antara spektra yang sangat mirip dalam sebuah spektrogram. Lebih jauh spektra ini dapat digunakan unutk analisis kuantitatif, untuk mengukur konsentrasi dari analit yang mempunyai puncak yang tersembunyi, misalnya yang bertumpang tindih dengan puncak analit lain dalam sampel (Willard et al. 1988)

F. Parameter Validitas Metode Analisis

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(40)

Validitas metode analisis merupakan suatu ukuran untuk membuktikan bahwa metode yang digunakan memberikan hasil seperti yang diharapkan dengan ukuran akurasi serta presisi yang memadai (Mulja dan Suharman, 1995). Ada berbagai parameter untuk menilai apakah suatu metode valid atau tidak, diantaranya:

1. Akurasi atau kecermatan

Akurasi suatu metode adalah keterdekatan nilai pengukuran dengan nilai sebenarnya dari analit dalam sampel. Indikasi yang paling umum untuk menyatakan akurasi ysng tinggi adalah perolehan kembali (% recovery). Akurasi bahan obat dengan kadar kecil yang masih dapat diterima adalah 90-110%, akurasi untuk kadar yang lebih besar lagi yaitu 95-105%, akurasi untuk bahan baku yaitu 80-120% (Mulja dan Hanwar, 2003).

2. Presisi atau ketelitian

Presisi suatu metode analisis yaitu sejumlah pancaran hasil yang diperoleh dari analisis berulangkali pada suatu sampel homogen. Presisi biasanya dinyatakan dengan Koefisien Variansi (KV). Suatu metode dikatakan memiliki presisi yang bagus apabila memiliki nilai KV<2%, tetapi kriteria ini fleksibel tergantung dari kondisi analit yang diperiksa, jumlah sampel dan kondisi laboratorium. Untuk bioanalisis KV = 15-20% masih diterima (Mulja dan Hanwar, 2003).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(41)

3. Linearitas

Linearitas dari suatu metode analisis merupakan kemampuan untuk mendapatkan hasil uji yang secara langsung proporsional dengan konsentrasi analit pada kisaran yang diberikan (Rohman, 2007). Data linearitas dapat diterima jika memenuhi nilai koefisien korelasi (r) > 0,99 (Anonim, 2004).

4. Limit of Detection (LOD) dan Limit of Quantitation (LOQ)

Limit deteksi (Limit of Detection) adalah konsentrasi analit terendah dalam sampel yang masih dapat dideteksi, meskipun tidak dapat dikuantitasi. LOD seringkali diekspresikan sebagai suatu konsentrasi pada rasio signal terhadap derau (signal to noise ratio) yang biasanya 2 atau 3:1 (Rohman, 2007).

Sedangakan limit kuantitasi (Limit of Quantitation) merupakan konsentrasi analit terendah dalam sampel yang dapat ditentukan dengan presisi dan akurasi yang dapat diterima pada kondisi operasional metode yang digunakan. Rasio signal to noise LOQ umumnya 10:1 (Rohman, 2007).

5. Range

Range merupakan interval antara kadar terendah sampai dengan kadar tertinggi dari suatu analit yang masih dapat diukur secara kuantitatif menggunakan metode tertentu yang masih dapat menghasilkan akurasi serta presisi yang memadai. Biasanya range memiliki satuan yang sama dengan satuan yang digunakan pada metode analisis, misalnya persen atau ppm (Rohman, 2007; Anonim, 2005).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(42)

Metode analisis dibedakan menjadi empat kategori menurut The United States Pharmacopea (USP) (2005), yaitu:

1. Kategori I

Mencakup metode-metode analisis kuantitatif, untuk menetapkan kadar komponen utama bahan obat atau zat aktif dalam sediaan farmasi.

2. Kategori II

Mencakup metode-metode analisis kualitatif dan kuantitatif yang digunakan untuk menganalisis impurities (cemaran) ataupun degradation compounds dalam sediaan farmasi.

3. Kategori III

Mencakup metode-metode analisis yang digunakan untuk menentukan karakteristik penampilan suatu sediaan farmasi.

4. Kategori IV (tes identifikasi)

Tabel II. Parameter validitas metode yang dipersyaratkan untuk setiap kategori (Anonim, 2005)

Kategori 2 Parameter

analisis Kategori 1 Kuantitatif Kualitatif Kategori 3 Kategori 4

Akurasi Ya Ya * * Tidak

Presisi Ya Ya Tidak Ya Tidak

LOD Tidak Tidak Ya * Ya

LOQ Tidak Ya Tidak * Tidak

Linearitas Ya Ya Tidak * Tidak

Range Ya Ya * * Tidak

* = Mungkin tidak diperlukan (tergantung sifat spesifik tes)

G. Keterangan empiris

Siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat masih digunakan sebagai obat anti-histamin, keduanya dapat ditetapkan kadarnya menggunakan spektrofotometri ultraviolet (UV). Baik siproheptadin HCl maupun ketotifen

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(43)

fumarat larut dalam alkohol, sehingga akan sangat sulit dipisahkan secara konvensional. Secara teoritis siproheptadin HCl memiliki serapan maksimum pada panjang gelombang 286 nm, sedangkan ketotifen fumarat pada 297 nm. Dengan adanya serapan maksimum pada panjang gelombang yang berdekatan tersebut memungkinkan terjadinya spektra yang tumpang tindih. Sehingga untuk penetapan kadar kedua senyawa dalam campuran dapat dilakukan secara spektrofotometri ultraviolet (UV), salah satunya menggunakan aplikasi derivatif.

Validitas suatu metode dapat dilihat dari akurasi, presisi, linearitas, LOD dan LOQ. Suatu metode dikatakan valid apabila menghasilkan akurasi pada rentang 90-110% dan presisi kurang dari 2%

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(44)

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian non-eksperimental deskriptif karena tidak ada subjek uji yang dimanipulasi atau dikenai perlakuan.

B. Definisi Operasional

1. Spektrofotometri derivatif merupakan metode manipulatif terhadap spektra pada spektrofotometri ultraviolet dan tampak. Pada metode derivatif, plot

absorban versus panjang gelombang ditransformasikan menjadi plot !

d dA

vs λ

untuk derivat pertama, dan d2A/ dλ2_vsλ_{untuk derivat kedua.}

2. Panjang gelombang zero crossing merupakan panjang gelombang yang memberikan amplitudo nol pada spektra derivatif.

3. Amplitudo merupakan laju perubahan serapan terhadap panjang gelombang (dnA/ dλn_),_{diturunkan dari hukum Lambert-Beer, memiliki hubungan yang}

linear terhadap konsentrasi.

4. Campuran siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat yang digunakan memiliki perbandingan 2:1, seperti komposisi dalam pulveres yang diproduksi oleh Rumah Sakit X di Yogyakarta. Kadar yang dipakai menggunakan satuan ppm.

5. Pengukuran siproheptadin HCl dilakukan pada zero crossing ketotifen fumarat dan pengukuran ketotifen fumarat dilakukan pada zero crossing siproheptadin HCl

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(45)

6. Parameter kesahihan metode analisis yang digunakan yaitu akurasi, presisi, LOD dan LOQ.

C. Bahan-bahan Penelitian

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah siproheptadin HCl (Pharos), ketotifen fumarat (Dankos), metanol pro analisis (E.Merck).

D. Alat-alat Penelitian

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah Genesis Spectrofotometer

10UV, kuvet Quartz, neraca analitik merk Scaltec, mikropipet Biohit, dan seperangkat alat gelas.

E. Tatacara Penelitian

1. Pembuatan larutan stok

a. Pembuatan larutan stok Siproheptadin HCl 1000 ppm

Lebih kurang 10,0 mg baku siproheptadin HCl ditimbang seksama kemudian dilarutkan dengan metanol pro analysis sampai volume 10,00 ml.

b. Pembuatan larutan stok ketotifen fumarat 1000 ppm

Lebih kurang 10,0 mg baku ketotifen fumarat ditimbang seksama kemudian dilarutkan dengan metanol pro analysis sampai volume 10,00 ml.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(46)

2. Pembuatan seri larutan baku

a. Pembuatan seri larutan baku siproheptadin HCl

Larutan stok siproheptadin HCl dipipet 0,200; 0,250; 0,300; 0,350; 0,400; 0,450; 0,500 ml dimasukkan kedalam labu takar 10,00 ml, kemudian diencerkan dengan metanol pro analysis hingga tanda sehingga didapat larutan siproheptadin HCl dengan konsentrasi 20,00; 25,00; 30,00; 35,00; 40,00; 45,00; 50,00 ppm.

b. Pembuatan seri larutan baku ketotifen fumarat

Larutan stok ketotifen fumarat dipipet 0,200; 0,250; 0,300; 0,350; 0,400; 0,450; 0,500 ml dimasukkan kedalam labu takar 10,00 ml, kemudian diencerkan dengan metanol pro analysis hingga tanda sehingga didapat larutan ketotifen fumarat dengan konsentrasi 20,00; 25,00; 30,00; 35,00; 40,00; 45,00; 50,00 ppm.

3. Pengamatan spektra masing-masing senyawa

Diambil 1 seri konsentrasi larutan terbesar, kemudian dibaca serapannya pada rentang panjang gelombang 240-380 nm, kemudian dibuat spektra serapan

normal (panjang gelombang vs absorbansi), spektra derivat pertama ( ! d dA

panjang gelombang).

4. Penentuan zero crossing masing-masing senyawa

Dari spektra derivat pertama masing-masing senyawa, ditentukan panjang

gelombang amplitudonya

[

(

)

]

2 1

! !

" " =

#A A A

memiliki harga nol.

5. Pembuatan persamaan kurva baku

Dibuat kurva baku antara amplitudo terhadap konsentrasi senyawa dari derivat pertama untuk larutan baku siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(47)

Pengukuran amplitudo siproheptadin HCl dibaca pada zero crossing ketotifen fumarat, sedangkan amplitudo ketotifen fumarat dibaca pada zero crossing

siproheptadin HCl. Dengan persamaan regresi, akan diperoleh persamaan kurva baku untuk masing-masing senyawa.

6. Pengamatan amplitudo larutan sampel dan perhitungan kadar campuran

siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat (2:1) dan (1:1)

a. Pembuatan sampel campuran siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat Lebih kurang 20 mg siproheptadin HCl dan 10 mg ketotifen fumarat (2:1) yang ditimbang seksama dilarutkan dalam metanol sampai 10,00 ml. Sebanyak 0,220 ml larutan tersebut diencerkan dengan metanol sampai 10,00 ml. Setelah itu larutan sampel dibaca serapannya pada panjang gelombang 240-380 nm. Dari

serapan normal dibuat derivat pertama ( ! d dA

Lebih kurang 10 mg siproheptadin HCl dan 10 mg ketotifen fumarat (1:1) yang ditimbang seksama dilarutkan dalam metanol sampai 10,00 ml. Sebanyak 0,350 ml larutan tersebut diencerkan dengan metanol sampai 10,00 ml. Setelah itu larutan sampel dibaca serapannya pada panjang gelombang 240-380 nm. Dari

serapan normal dibuat derivat pertama ( ! d dA

b. Penentuan kadar masing-masing senyawa campuran

Dari spektra derivat pertama sampel, amplitudo sampel dibaca pada zero crossing yang telah ditetntukan sebelumnya, dimasukkan ke dalam persamaan kurva baku masing-masing senyawa. Persamaan kurva baku y = bx + a, dimana y

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(48)

adalah amplitudo, b adalah koefisien regresi, x adalah kadar senyawa (ppm) dan a adalah konstanta.

F. Analisis Hasil

Validitas dari metode yang digunakan dalam penetapan kadar siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat dalam campuran secara spektrofotometri

ultraviolet dengan aplikasi metode derivatif dapat ditentukan berdasarkan parameter berikut:

1. Akurasi

Akurasi metode analisis dinyatakan dengan recovery yang dihitung dengan cara berikut:

recov_ery₌ kadar terukur kadar diketahuix

100%

Jika nilai recovery berada pada rentang 90-110%, maka metode ini dinilai memiliki akurasi yang baik.

2. Presisi

Presisis metode analisis dinyatakan dengan koefisien variasi (KV) yang dihitung dengan cara berikut:

100% kur

kadar teru rerata

SE =

KV x

Jika nilai koefisien variasi kurang dari sama dengan 2%, maka metode ini dinilai memiliki presisi yang baik (Mulja dan Suharman, 1995).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(49)

3. Linearitas

Linearitas dilihat dari harga r (koefisien korelasi) dari pengukuran seri baku pada panjang gelombang zero crossing masing-masing senyawa.

4. LOD dan LOQ

LOD dihitung dari : Y-Yb = 3Sb

LOQ dihitung dari : Y-Yb = 10 Sb

Dimana Y merupakan absorban pada panjang gelombang spektra normal, Yb merupakan intersep dari pengukuran seri larutan baku pada panjang gelombang spektra normal dan Sb merupakan Sx/y. Y dari masing-masing senyawa pada panjang gelombang spektra normal dirata-rata kemudian dimasukkan kedalam persamaan garis panjang gelombang zero crossing masing-masing senyawa.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(50)

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Pembuatan Larutan Baku

Siproheptadin HCl memiliki kelarutan dalam metanol (Anonim, 1995) sedangkan ketotifen fumarat memiliki kelarutan dalam etanol (Clarke, 1986), tetapi dalam penelitian pelarut yang digunakan adalah metanol. Hal ini dikarenakan siproheptadin HCl sukar larut dalam etanol (Anonim, 1995), sedangkan ketotifen fumarat memiliki kelarutan yang cukup baik dalam metanol. Metanol yang digunakan sebagai pelarut memiliki kualitas pro analysis, diperlukan kemurnian cukup tinggi sehingga hasil yang diperoleh diharapkan cukup akurat.

Larutan baku dari masing-masing senyawa dibuat dalam 7 seri kadar. Larutan baku siproheptadin HCl dibuat dengan konsentrasi 20,00; 25,00; 30,00; 35,00; 40,00; 45,00 dan 50,00 ppm. Larutan baku ketotifen fumarat dibuat dengan konsentrasi yang sama dengan ketotifen fumarat yaitu 20,00; 25,00; 30,00; 35,00; 40,00; 45,00 dan 50,00 ppm. Pembuatan seri kadar larutan baku dibuat dalam rentang yang cukup besar, yaitu 20,00-50,00 ppm baik untuk siproheptadin HCl maupun ketotifen fumarat, dengan tujuan untuk mendapatkan nilai amplitudo serapan yang cukup besar, sehingga dapat terlihat jelas kenaikan amplitudo tersebut. Harga amplitudo (dnA/ dλn_{) sangat bergantung pada beda serapan (dA)} karena dλ_{bernilai tetap. Sehingga untuk mendapatkan nilai beda serapan yang} cukup signifikan maka konsentrasi larutan diperbesar.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(51)

B. Pengamatan Spektra masing-masing Senyawa

Menurut Day dan Underwood (1996) metanol memiliki UV cut off pada panjang gelombang 210 nm sehingga metanol memiliki kemampuan untuk meneruskan sinar pada panjang gelombang lebih panjang dari 210 nm, oleh karena itu penentuan spektra masing-masing senyawa dilakukan pada panjang gelombang 220 – 380 nm agar pada saat pengukuran serapan tidak dipengaruhi oleh metanol.

Penentuan spektra normal untuk masing-masing senyawa dilakukan pada penelitian ini untuk melihat apakah terjadi spektra yang tumpang tindih antara siproheptadin HCl dengan ketotifen fumarat sehingga dapat dikuantifikasi menggunakan derivatif, dengan menghubungkan serapan sebagai fungsi panjang gelombang akan diperoleh spektra serapan normal dari masing-masing senyawa. Penentuan spektra normal dilakukan menggunakan tiga seri konsentrasi yang berbeda untuk memastikan reprodusibilitas dari data yang dihasilkan.

Gambar 10. Spektra serapan normal tiga konsentrasi siproheptadin HCl

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(52)

Berdasarkan spektra serapan normal siproheptadin HCl pada gambar 10 dapat dilihat bahwa bentuk spektranya stabil walaupun siproheptadin HCl yang digunakan hanya memiliki kualitas working standart. Puncak serapan maksimum siproheptadin HCl ada pada panjang gelombang 286 nm. Menurut Clarke (1986), serapan maksimum siproheptadin HCl ada pada panjang gelombang 286 nm. Hal ini berarti panjang gelombang yang didapatkan dari penelitian sesuai dengan teori.

Gambar 11. Spektra serapan normal tiga konsentrasi ketotifen fumarat

Berdasarkan spektra serapan normal ketotifen fumarat pada gambar 11 dapat dilihat bahwa bentuk spektranya stabil walaupun ketotifen fumarat yang digunakan hanya memiliki kualitas working standart. Puncak serapan maksimum ketotifen fumarat ada pada panjang gelombang 298 nm. Menurut Clarke (1986), serapan maksimum ketotifen fumarat ada pada panjang gelombang 297 nm, meskipun panjang gelombang maksimum lebih panjang 1 nm dari teoritis tetapi masih memenuhi persyaratan Farmakope Indonesia IV (1995) bahwa panjang gelombang serapan maksimum yang boleh digunakan adalah ± 2 nm.

Penggabungan antara spektra normal siproheptadin HCl dengan ketotifen fumarat akan terlihat seperti gambar berikut ini:

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(53)

Gambar 12. Spektra tumpang tindih antara siproheptadin HCl dan

ketotifen fumarat. (a) spektra siproheptadin HCl (λmax 286 nm); (b) spektra

ketotifen fumarat (λmax 298 nm)

Berdasarkan spektra gabungan di atas dapat dilihat tumpang tindih spektra siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat terjadi pada panjang gelombang 220-380 nm.

C. Penentuan Zero Crossing masing-masing Senyawa

Spektrofotometri derivatif merupakan metode manipulatif terhadap spektra pada spektrofotometri ultraviolet dan tampak (Connors, 1982). Pada spektrofotometri konvensional, spektra merupakan plot antara serapan, A, dengan panjang gelombang, λ_{. Pada spektrofotometri derivatif, plot} _A_vs λ

ditransformasikan menjadi plot ! d dA

vs λ_{, untuk derivatif pertama, dan d}2_A/dλ2 _vs λ_{, untuk derivatif kedua. Pembacaan serapan suatu senyawa dilakukan pada}

panjang gelombang zero crossing yang sudah ditetapkan sebelumnya. Panjang

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(54)

gelombang zero crossing suatu senyawa merupakan panjang gelombang saat senyawa tersebut tidak memberikan sinyal atau amplitudonya bernilai nol tetapi senyawa lain memberikan sinyal.

Berdasarkan spektra normal, dibuat spektra derivat pertama, yaitu dengan memplotkan amplitudo dA/dλ_vs λ_{. Penentuan amplitudo dA/d}λ_dilakukan

dengan cara selisih serapan (Δ_{A = A}λ_{1 – A}λ_{2) yang berderet teratur dibagi dengan}

delta panjang gelombang. Penggunaan delta panjang gelombang yang optimum akan meminimalkan pengaruh derau atau noise sehingga pengaruhnya tidak terlalu besar terhadap bentuk spektra dan juga dapat menunjukkan kejelasan dari bentuk spektra suatu senyawa.

Spektra derivat pertama dari siproheptadin HCl dengan menggunakan delta panjang gelombang 1 nm dan 2 nm tampak pada gambar berikut ini:

-0.14 -0.12 -0.1 -0.08 -0.06 -0.04 -0.02 0 0.02 0.04 0.06 0.08

220 225 230 235 240 245 250 255 260 265 270 275 280 285 290 295 300 305 310 315 320 325

Panjang gelombang (nm)

lit

Delta panjang gelom bang 2 nm Delta panjang gelom bang 1 nm

Gambar 13. Spektra derivat pertama siproheptadin HCl delta panjang gelombang 1 nm dan 2 nm

Berdasarkan gambar 13, pengukuran siproheptadin HCl dengan menggunakan delta panjang gelombang 1 nm masih banyak terdapat peak jika dibandingkan spektra derivat dengan delta panjang gelombang 2 nm yang lebih halus.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(55)

Spektra derivat pertama dari ketotifen fumarat dengan delta panjang gelombang 1 nm dan 2 nm tampak pada gambar berikut ini:

-0.14 -0.12 -0.1 -0.08 -0.06 -0.04 -0.02 0 0.02 0.04 0.06 0.08

220 225 230 235 240 245 250 255 260 265 270 275 280 285 290 295 300 305 310 315 320 325

Panjang gelombang (nm)

A m p lit u d o

Delta panjang gelom bang 2 nm Delta panjang gelom bang 1 nm

Gambar 14.Spektra derivat pertama ketotifen fumarat delta panjang gelombang 1 nm dan 2nm

Berdasarkan gambar 14, pengukuran ketotifen fumarat dengan menggunakan delta panjang gelombang 1 nm masih banyak terdapat peak jika dibandingkan spektra derivat dengan delta panjang gelombang 2 nm yang lebih halus.

Spektra gabungan akan diperoleh jika kedua spektra derivat pertama masing-masing senyawa dengan delta panjang gelombang 1 nm digabungkan menjadi satu seperti gambar berikut ini:

-0.14 -0.12 -0.1 -0.08 -0.06 -0.04 -0.02 0 0.02 0.04 0.06 0.08

220 225 230 235 240 245 250 255 260 265 270 275 280 285 290 295 300 305 310 315 320 325

Panjang gelombang (nm)

A m p li tu d o

Siproheptadin HCl Ketotifen fumarat

Gambar 15. Spektra gabungan derivat pertama siproheptadin HCl dan

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(56)

ketotifen fumarat dengan delta panjang gelombang 1 nm

Pembacaan spektra dengan menggunakan delta panjang gelombang 1 nm belum menghasilkan pemisahan spektra yang jelas seperti terlihat pada gambar 15, hal ini dapat mengakibatkan terjadinya kesalahan dalam menentukan panjang gelombang zero crossing yang akan digunakan untuk mengukur senyawa.

Spektra gabungan akan diperoleh jika kedua spektra derivat pertama masing-masing senyawa dengan delta panjang gelombang 2 nm digabungkan menjadi satu seperti yang terlihat pada gambar berikut ini:

-0.14 -0.12 -0.1 -0.08 -0.06 -0.04 -0.02 0 0.02 0.04 0.06 0.08

220 225 230 235 240 245 250 255 260 265 270 275 280 285 290 295 300 305 310 315 320 325

Panjang gelombang (nm)

lit

Siproheptadin HCl Ketotifen fum arat

Gambar 16. Spektra gabungan derivat pertama siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat dengan delta panjang gelombang 2 nm

Berdasarkan gambar 16, jika menggunakan delta panjang gelombang 2 nm untuk pembacaan serapan lebih menghasilkan pemisahan spektra yang jelas, sehingga delta panjang gelombang 2 nm merupakan delta panjang gelombang yang optimum untuk pengukuran. Selain itu terdapat titik potong terhadap absisnya yang disebut dengan zero crossing. Pada panjang gelombang zero crossing tersebut spektra derivatnya menunjukkan amplitudo bernilai nol. Apabila kedua spektra digabungkan, dapat dilihat bahwa pada zero crossing suatu

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(57)

senyawa, senyawa tersebut tidak memberikan sinyal sedangakan senyawa yang lain memberikan sinyal.

Spektra derivat pertama siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat sudah menunjukkan pemisahan yang jelas seperti tampak pada gambar 16. Maka untuk menentukan zero crossing siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat dapat langsung menggunakan spektra derivat pertama selain itu pita serapan untuk masing-masing senyawa tidak memiliki panjang gelombang yang hampir sama.

Zero crossing siproheptadin HCl ada pada 265 nm dan 287 nm. Sedangkan zero crossing ketotifen fumarat ada pada 257 nm dan 297 nm. Panjang gelombang yang digunakan dalam penelitian ini yaitu 287 nm dan 297 nm. Pada panjang gelombang 287 nm ketotifen fumarat memberikan sinyal sedangkan siproheptadin HCl tidak memberikan sinyal, karena amplitudonya bernilai nol maka pengukuran ketotifen fumarat pada panjang gelombang zero crossing

siproheptadin HCl sehingga tidak akan terganggu siproheptadin HCl dan begitu juga sebaliknya. Siproheptadin HCl diukur pada panjang gelombang zero crossing

ketotifen fumarat yaitu pada 297 nm.

D. Pembuatan Persamaan Kurva Baku

Berdasarkan panjang gelombang zero crossing yang telah ditetapkan, seri kadar larutan baku siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat yang telah dibuat diukur amplitudo serapan derivat pertamanya pada panjang gelombang tersebut. Pengukuran seri larutan baku dilakukan sebanyak tiga kali, tetapi hanya satu persamaan kurva baku yang akan digunakan untuk penetapan kadar siproheptadin

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(58)

HCl dan ketotifen fumarat. Konsentrasi larutan dan amplitudo masing-masing senyawa dimasukkan ke dalam persamaan regresi linier sehingga diperoleh persamaan kurva baku, yaitu sebagai berikut ini:

Y = b X + a Di mana y = amplitudo (dA/dλ_{), b = koefisien regresi,}

x = konsentrasi, dan a = konstanta.

Persamaan tersebut analog dengan hukum Lambert-Beer, di mana semakin besar konsentrasi maka semakin besar pula harga amplitudo, sehingga ada hubungan yang linier antara konsentrasi dengan amplitudo (dA/dλ_{). Parameter}

linearitas dilihat dari harga koefisien korelasi (r). Persamaan kurva baku dikatakan memiliki linearitas yang baik bila harga koefisien korelasinya melebihi r tabel pada derajat bebas dan tingkat signifikansi tertentu. Dari setiap pengulangan yang dilakukan, diperoleh harga r yang melebihi harga r tabel yaitu 0,874 dengan df 5 dan tingkat signifikansi 99%.

Selain berdasarkan r tabel, pemilihan persamaan kurva baku juga didasarkan pada harga r yang mendekati 1. Harga koefisien korelasi yang mendekati satu menunjukkan hubungan yang linier antara konsentrasi dengan amplitudo, sehingga persamaan Lambert-Beer dapat terpenuhi. Berikut ini merupakan hasil pengukuran amplitudo dan perhitungan koefisien korelasi masing-masing senyawa.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(59)

Tabel III. Data kurva baku siproheptadin HCl pada 297 nm

Replikasi I Replikasi II Replikasi III

Konsentrasi (ppm)

Amplitudo Konsentrasi (ppm)

Amplitudo 20,20 - 0,0130 20,20 - 0,0120 20,04 - 0,0140 25,25 - 0,0175 25,25 - 0,0155 25,05 - 0,0190 30,30 - 0,0195 30,30 - 0,0185 30,06 - 0,0210 35,35 - 0,0280 35,35 - 0,0230 35,07 - 0,0270 40,40 - 0,0290 40,40 - 0,0260 40,08 - 0,0300 45,45 - 0,0300 45,45 - 0,0285 45,09 - 0,0315 50,50 - 0,0400 50,50 - 0,0330 50,01 - 0,0355

r 0,971 r 0,998* r 0,991

B -8,168.10-4 B -6,825.10-4* B -7,036.10-4

A 3,589.10-3 A - 1,768.10-3* A -7,631.10-4

Berdasarkan tabel III, masing-masing replikasi menghasilkan harga r yang melebihi r tabel. Persamaan kurva baku dikatakan memiliki linearitas yang baik selain memiliki harga r yang mendekati 1 juga > 0,99 (Anonim, 2004), karena menandakan adanya korelsi yang baik antara konsentrasi dengan amplitudo. Replikasi kedua memiliki harga r yang telah memenuhi persyaratan linearitas. Didapatkan persamaan kurva baku siproheptadin HCl :

Y = -6,825.10-4 X – 1,768.10-3

Gambar 17. Kurva baku siproheptadin HCl

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(60)

Tabel IV. Data kurva baku ketotifen fumarat pada 287 nm

Replikasi I Replikasi II Replikasi III

Konsentrasi (ppm)

Amplitudo Konsentrasi (ppm)

Amplitudo

20,06 0,0125 20,02 0,0130 20,20 0,0130

25,08 0,0160 25,02 0,0170 25,25 0,0180

30,09 0,0210 30,03 0,0205 30,30 0,0210

35,11 0,0230 35,04 0,0230 35,35 0,0230

40,12 0,0270 40,14 0,0280 40,40 0,0275

45,14 0,0285 45,04 0,0290 45,45 0,0295

50,15 0,0335 50,05 0,0340 50,50 0,0340

r 0,993 r 0,995* r 0,994

B 6,694.10-4 B 6,740.10-4* B 6,542.10-4

A - 4,296.10-4 A - 1,227.10-4* A 5,893.10-4

Berdasarkan tabel IV, masing-masing replikasi menghasilkan harga r yang melebihi r tabel. Persamaan kurva baku dikatakan memiliki linearitas yang baik selain memiliki harga r yang mendekati 1 juga > 0,99 (Anonim, 2004), karena menandakan adanya korelsi yang baik antara konsentrasi dengan amplitudo. Replikasi kedua memiliki harga r yang telah memenuhi persyaratan linearitas. Didapatkan persamaan kurva baku ketotifen fumarat:

Y = 6,740.10-4 X - 1,227.10-4

Gambar 18. Kurva baku ketotifen fumarat

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(61)

E. Penetapan Kadar Sampel dalam Campuran

Sampel campuran yang digunakan adalah siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat masing-masing sebesar 20 mg dan 10 mg (2:1) serta 10 mg dan 10 mg (1:1). Komposisi pulveres yang diberikan Rumah Sakit X di Yogyakarta untuk pasien anak dengan perbandingan siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat sebesar 1 mg dan 0,5 mg (2:1). Dosis maksimum untuk siproheptadin HCl adalah 4 mg sedangkan ketotifen fumarat adalah 1 mg. Efek lain dari siproheptadin HCl yang diharapkan muncul pada pasien anak selain sebagai anti-histamin adalah penambah nafsu makan, oleh karena itu dosis siproheptadin HCl yang diberikan paling tidak sama atau lebih besar dari ketotifen fumarat, sehingga dosis lain yang masih mungkin dapat diberikan kepada pasien anak adalah dengan perbandingan 1:1. Sampel yang telah dibuat diukur serapannya.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(62)

-1 0 1 2 3 4 5

250 255 260 265 270 275 280 285 290 295 300 305 310 315 320 325 330 335 340

Panjang gelombang (nm)

Absorbansi

Siproheptadin HCl Ketotifen fum arat Sam pel 2:1

Gambar 19. Spektra normal Siproheptadin HCl (40,40 ppm), ketotifen fumarat (20,02 ppm), dan sampel 2:1

-0.1 0.4 0.9 1.4 1.9 2.4 2.9

250 255 260 265 270 275 280 285 290 295 300 305 310 315 320 325 330 335 340

Panjang gelombang (nm)

Absorbansi

Siproheptadin HCl Ketotifen fum arat Sam pel 1:1

Gambar 20. Spektra normal siproheptadin HCl(20,20 ppm), ketotifen fumarat (20,02 ppm), dan sampel 1:1

Berdasarkan gambar 19 dan 20 dapat dilihat bahwa serapan sampel lebih besar daripada serapan masing-masing senyawa murni. Hal ini dikarenakan serapan sampel pada masing-masing panjang gelombang merupakan serapan total dari masing-masing komponen, akibatnya dalam spektra normal terbentuk spektra yang melebar. Jika spektra normal diderivatkan, puncak spektrogram pemisahan diubah menjadi lebih jelas. Hal ini dapat dilihat pada gambar berikut ini:

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

(1)

Lampiran 8. Tabel penimbangan sampel siprohepatdin HCl dan ketotifen fumarat (1:1) dan contoh perhitungan konsentrasi sampel

Replikasi III Replikasi IV

Siproheptadin Ketotifen Siproheptadin Ketotifen Berat kertas

Berat kertas + zat Berat kertas + zat

(analitik) Berat kertas + sisa

0,2344 gram 0,2445 gram 0,24457 gram 0,23447 gram

0,2336 gram 0,2436 gram 0,24377 gram 0,23368 gram

0,2363 gram 0,2463 gram 0,24633 gram 0,23625 gram

0,2328 gram 0,2428 gram 0,24287 gram 0,23281 gram Berat Zat 0,01010 gram 0,01009 gram 0,01008 gram 0,01006 gram

Replikasi V Replikasi VI

Siproheptadin Ketotifen Siproheptadin Ketotifen Berat kertas

Berat kertas + zat Berat kertas + zat

(analitik) Berat kertas + sisa

0,2400 gram 0,2500 gram 0,25012 gram 0,2400 gram

0,2329 gram 0,2429 gram 0,24295 gram 0,23288 gram

0,2310 gram 0,2411 gram 0,24107 gram 0,23096 gram

0,2343 gram 0,2443 gram 0,24427 gram 0,23418 gram Berat Zat 0,01012 gram 0,01007 gram 0,01011 gram 0,01009 gram Contoh perhitungan konsentrasi larutan stok sampel (1:1):

Replikasi I ml 10 ditimbang yang zat berat = din siprohepta stok larutan i konsentras ml 10 mg 10,07

= = 1,007 mg/ml = 1007 ppm

ml 10 ditimbang yang zat berat = ketotifen stok larutan i konsentras ml 10 mg 10,12

= = 1,012 mg/ml = 1012 ppm

Replikasi I Replikasi II

Siproheptadin Ketotifen Siproheptadin Ketotifen Berat kertas

Berat kertas + zat Berat kertas + zat (analitik)

Berat kertas + sisa

0,2337 gram 0,2438 gram 0,24403 gram 0,23396 gram

0,2304 gram 0,2404 gram 0,24045 gram 0,23033gram

0,2243 gram 0,2345 gram 0,23459 gram 0,22451 gram

0,2211 gram 0,2312 gram 0,23131 gram 0,22120 gram Berat Zat 0,01007 gram 0,01012 gram 0,01008 gram 0,01012 gram

(2)

Contoh perhitungan konsentrasi sampel yang digunakan untuk pengukuran: Siproheptadin → Vstok sampel . Cstok sample = V1 . C1

0,350 ml . 1007 ppm = 10,00 ml . C1

C1 = 35,24 ppm

Ketotifen→ Vstok sampel . Cstok sample = V1 . C1

0,350 ml . 1012 ppm = 10,00 ml . C1

(3)

Lampiran 9. Contoh perhitungan kadar siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat dalam campuran (2:1)

Sampel Amplitudo pada 297 nm Amplitudo pada 287 nm

Replikasi I -0,0270 0,0135

Replikasi II -0,0285 0,0145

Replikasi III -0,0275 0,0140

Replikasi IV -0,0260 0,0140

Replikasi V -0,0265 0,0140

Replikasi VI -0,0275 0,0140

Lampiran 10. Contoh perhitungan kadar siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat dalam campuran (1:1)

Sampel Amplitudo pada 297 nm Amplitudo pada 287 nm

Replikasi I -0,0220 0,0220

Replikasi II -0,0215 0,0225

Replikasi III -0,0240 0,0215

Replikasi IV -0,0215 0,0225

Replikasi V -0,0225 0,0230

Replikasi VI -0,0225 0,0220

Lampiran 11. Tabel hasil perhitungan kadar, Recovery, Koefisien Variansi (KV)

Recovery = !100%

sebenarnya kadar

terukur kadar

% KV = _!100%

terukur kadar

rerata SE

• Kadar siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat dalam campuran 2:1 Siproheptadin HCl Ketotifen fumarat Sampel

nomor kadar terhitung

(ppm)

kadar terukur

(ppm)

Recovery (%)

kadar terhitung

(ppm)

kadar terukur

(ppm)

Recovery (%)

1 44,29 42,15 95,18 22,15 20,21 91,20

2 44,18 44,35 100,39 22,13 21,69 97,99

3 44,29 42,89 96,84 22,13 20,94 94,65

4 43,98 40,69 92,52 22,24 20,94 94,18

5 44,15 41,42 93,81 22,22 20,94 94,27

6 44,35 42,89 96,69 22,15 20,94 94,52

Rata-rata

Recovery

SE % KV

42,39 95,91 + 1,13

1,13 1,17

Rata-rata

Recovery

SE % KV

20,94 94,47 + 0,88

0,88 0,93

(4)

• Kadar siproheptadin HCl dan ketotifen fumarat dalam campuran 1:1 Siproheptadin HCl Ketotifen fumarat Sampel

nomor kadar terhitung

(ppm)

kadar terukur

(ppm)

Recovery (%)

kadar terhitung

(ppm)

kadar terukur

(ppm)

Recovery (%)

1 35,24 34,83 98,81 35,42 32,81 92,63

2 35,28 34,09 96,64 35,38 33,55 94,82

3 35,35 37,76 106,81 35,31 32,07 90,81

4 35,28 34,09 96,64 35,21 33,55 95,29

5 35,42 35,56 100,39 35,24 34,29 97,30

6 35,08 35,56 100,49 35,31 32,81 92,91

Rata-rata

Recovery

SE % KV

35,31 99,96 + 1,53

1,54 1,54

Rata-rata

Recovery

SE % KV

33,18 93,96 + 0,94

0,94 0,99

(5)

Lampiran 12. Penentuan zero crossing replikasi II

-0.14 -0.12 -0.1 -0.08 -0.06 -0.04 -0.02 0 0.02 0.04 0.06 0.08

220 225 230 235 240 245 250 255 260 265 270 275 280 285 290 295 300 305 310 315 320 325

Panjang gelombang

siproheptadin ketotifen

Lampiran 13. Penentuan zero crossing replikasi III

-0.14 -0.12 -0.1 -0.08 -0.06 -0.04 -0.02 0 0.02 0.04 0.06 0.08

220 225 230 235 240 245 250 255 260 265 270 275 280 285 290 295 300 305 310 315 320 325

Panjang gelombang

siproheptadin ketotifen

(6)

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi berjudul “Analisis Campuran Siproheptadin HCl dan Ketotifen Fumarat dengan Metode Spektrofotometri Ultraviolet (UV) Aplikasi Derivatif” ini memiliki nama lengkap Maria Kartika Rachmawatie. Penulis dilahirkan di Jakarta tanggal 23 Maret 1986 sebagai putrid kedua dari tiga bersaudara dari pasangan Bapak Zakharia Untung Hariartono, S.H. dan Ibu Elizabeth Wieke Rachmawatie, S.H. Pendidikan formal yang telah ditempuh oleh penulis tahun 1990-1992 di TK St. Maria Cirebon, tahun 1992-1998 di SD St. Maria Cirebon, tahun 1992-1998-2001 di SMP St. Maria Cirebon, tahun 2001-2004 di SMU St. Maria I Cirebon.

Pada tahun 2004 penulis melanjutkan pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Selama menjadi mahasiswi, penulis aktif dalam kegiatan kemahasiswaan diantaranya tergabung dalam keanggotaan JMKI (Jaringan Mahasiswa Kesehatan Indonesia). Penulis juga pernah terlibat dalam kepanitian PIMFI (Pekan Ilmiah Mahasiswa Farmasi Indonesia), Pelepasan Wisuda, dan Pharmacy Performance. Penulis juga pernah menjadi asisten praktikum Kimia Analisis, Kromatografi, Farmakologi Dasar, Analisis Makanan, dan Analisis Kosmetik.