Metode Kultur Bersama HASIL DAN PEMBAHASAN

32

3.4 Metode Kultur Bersama

Uji in vitro kultur bersama dilakukan untuk mengetahui kemampuan bakteri kandidat dalam menghambat pertumbuhan bakteri patogen V. harveyi MR 5339 Rf R. Uji ini dilakukan dengan membandingkan jumlah kepadatan bakteri V. harveyi MR 5339 Rf R yang tumbuh di tabung kontrol dengan tabung kultur bersama. Berdasarkan hasil analisa statistik one way ANOVA, P=0,05 diketahui terdapat delapan jenis isolat yang menunjukkan kemampuan menekan pertumbuhan bakteri patogen secara berbeda nyata jika dibandingkan dengan tabung kontrol. Isolat-isolat tersebut yaitu F5, F17, F18, F19, F25, F31, F39, dan F43. Isolat F5, F17, F19 dan F43 mampu menekan populasi patogen sebesar 10 2 - 10 3 CFUml sedangkan kepadatan bakteri patogen pada tabung kontrol mencapai 10 9 CFUml. Isolat F18, F25, F31, dan F39 juga mampu menekan populasi patogen namun dengan kemampuan yang berbeda Gambar 2. 33 Gambar 2. Penghambatan V. harveyi MR 5339 Rf R oleh kandidat probiotik pada uji in vitro metode kultur bersama 7,08 ± 0,47 9,29 ± 2,17 9,23 ± 2,25 9,27 ± 2,37 7,14 ± 0,45 8,45 ± 1,30 6,85 ± 0,10 8,77 ± 1,89 9,46 ± 1,45 9,35 ± 2,30 8,36 ± 1,17 9,39 ± 1,93 8,08 ± 1,42 10,15 ± 3,30 7,84 ± 1,08 9,17 ± 2,23 9,30 ± 2,17 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 5,5 6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 8,5 9,0 9,5 10,0 10,5 11,0 11,5 12,0 12,5 13,0 13,5 14,0 F 5 F 13 F 15 F 16 F 17 F 18 F 19 F 25 F 26 F 27 F 31 F 34 F 39 F 41 F 43 F 45 Vibrio harveyi K epa da ta n ba k ter i lo g CF Um l Vibrio harveyi MR 5339 Rf R ab bc a cd bc cd a a a d cd e a cd a cd a 34 Tidak semua jenis bakteri mampu memproduksi inhibitory metabolites senyawa penghambat pada media agar karena terdapat kemungkinan produksi inhibitory metabolites akan lebih banyak jika kultur dilakukan pada media broth. Adanya perbedaan komposisi medium juga mempengaruhi produksi senyawa penghambat Verschuere et al. 2000. Hal tersebut membuktikan bahwa penghambatan pertumbuhan populasi tidak selalu dapat dilihat melalui metode zona bening Kirby Bauer Method. Lactid Acid Bacteria LAB yang diisolasi dari saluran pencernaan mampu memproduksi komponen bakteriosin yang mampu menghambat pertumbuhan mikroorganisme lainnya dan secara tidak langsung akan mempengaruhi kompetisi dalam memperoleh energi di lingkungannya. LAB yang ditemukan dalam saluran pencernaan organisme akuatik seperti ikan mampu meningkatkan status kesehatan organisme tersebut Verschuere et al. 2000. Sasanti 2005 melaporkan bahwa dari 110 isolat hasil isolasi dari terumbu karang, hanya 10 isolat saja yang potensial sebagai kandidat probiotik. Lima diantaranya terbukti mampu menghambat pertumbuhan Vibrio harveyi MR 5339 Rf R walaupun tidak menunjukkan adanya zona hambat pada uji in vitro. Untuk mengetahui tingkat kepadatan bakteri yang dikultur sebelum masuk ketahapan kultur bersama, dilakukan pengukuran kepadatan bakteri dengan menggunakan spektrofotometer. Kepadatan bakteri diketahui dengan mengukur nilai optical density OD dari populasi sel yang dikultur selama 24 jam. Pengukuran OD dilakukan pada panjang gelombang 600 nm lampiran 1.

3.5 Uji Patogenisitas Bakteri Kandidat Probiotik