2 : 31 - 60 ekspresi pada sel-sel tumor
3 : 60 ekspresi pada sel-sel tumor
4.4 Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah jaringan nasofaring penderita Karsinoma nasofaring. Bahan jaringan diperiksa
untuk mendapatkan ekspresi Latent Membrane Protein 1 LMP1 dengan pemeriksaan imunohistokimia.
4.5 Instrumen Penelitian
Penelitian ini membutuhkan beberapa bahan, reagen dan peralatan sbb : 4.5.1 Bahan untuk pemeriksaan histopatologi
Formalin 10, blok parafin, aqua destillata, hematoxyllin-eosin. 4.5.2 Bahan untuk pemeriksaan immunohistokimia
Xylol, alkohol absolut, alkohol 95, alkohol 80, alkohol 70, H2O2 0.5 dalam methanol, Phosphat Buffer Saline PBS,
antibodi LMP1, antibodi sekunder, Envision, Chromogen Diamino Benzidine
DAB, Lithium Carbonat jenuh, Tris EDTA, Hematoxylin, aqua destillata.
4.5.3 Alat untuk biopsi Blakesley nasal forcep lurusbengkok, endoskopi kaku,4 mm,0
.
Universitas Sumatera Utara
4.5.4 Alat untuk pemeriksaan immunohistokimia Sistem visualisasi immunohistokimia Envision kit, mesin
pemotong jaringan microtome, silanized slide.
Prosedur kerja immunohistokimia pada blok parafin :
1. Preparasi setelah potong jaringan sediaanslide : sediaan dipanaskan di atas slide warmer selama kurang lebih 60˚ 1 jam
2. Selanjutnya sediaan dideparafinisasi dengan xylol I-II-III masing- masing selama 5’.
3. Bloking peroksidase endogen H2O2 0.5 dalam methanol selama 30’.
4. Selanjutnya cuci dengan air mengalir selama 5’. 5. Beri Tris EDTA untuk pretreatment dalam microwave :
Cook I : power level tinggi selama 5’ Cook II : power level medium selama 5’
Lalu didinginkan kurang lebih 45’ 6. Cuci dengan PBS pH 7,4,selanjutnya lingkari jaringan PAP-PEN
7. Bloking aktivitas non spesifik dengan serum normal selama 20’. 8. Inkubasi sediaan dengan antibodi primer LMP1 selama satu malam
dalam suhu ruang. 9. Cuci dengan PBS pH 7,4
10. Selanjutnya inkubasi dengan dengan Envision selama 30’
Universitas Sumatera Utara
11. Cuci dengan PBS pH 7,4 – Twin 20 lalu PBS masing-masing selama 5’.
12. Selanjutnya sediaan diberi chromogen agar berwarna dengan DAB Diamino Benzidine selama kurang lebih 5’
13. Cuci dengan air mengalir 14. Counterstain dengan Hematoxyllin Lilie Mayers
15. Cuci dengan air mengalir 16. Lithium Carbonat jenuh 5 dalam aquadest selama 1-2 menit.
17. Cuci dengan air mengalir. 18. Selanjutnya lakukan dehidrasi dengan alkohol bertingkat alkohol
95 selama 5’, alkohol absolut I dan II masing-masing selama 5’ 19. Clearing dengan Xylol I,II,III masing-masing selama 5’
20. Tutup dengan Entellan dan cover glass dan bisa langsung di baca.
4.6 Lokasi dan Waktu Penelitian
Kategori