3.3 Bagan Penelitian
3.3.1 Penyediaan Ekstrak Kasar Enzim Selulase
Ditambahkan 500 ml larutan NaCl 1 isotonic dingin
Diblender ± 30 detik
Disentrifugasi pada 7000 rpm selama 30 menit
Ditambah 200 ml aseton dingin
Disentrifugasi pada kecepatan 7000 rpm selama 30 menit Didekantasi dalam suasana dingin
Dikeringbekukan pada suhu -40
o
C
Diambil 0,5 gr dilarutkan dalam 50 ml buffer asetat 0,1 M pH 4,5
Di ukur aktivitasnya 250 g saluran pencernaan bekicot
Supernatan400ml pellet
Suspensi
supernatan pellet
Serbuk ekstrak kasar 8,9 gr
Ekstrak kasar enzim selulase
Hasil
Universitas Sumatera Utara
3.3.2 Penentuan Suhu Optimum Hidrolisa Selulosa Oleh Enzim Selulase
Dimasukkan masing – masing ke dalam 5 gelas beaker Ditambahkan masing – masing 5 ml larutan buffer
asetat pH 4,5 6 ml untuk blanko Ditambahkan 1 ml enzim selulaseblanko tanpa
enzim Ditambahkan 1 ml NaCl 1
Diinkubasi selama 1 jam pada suhu 35
o
C,40
o
C, 45
o
C, 50
o
C dan 55
o
C Ditambahkan 1 ml NaOH 0,1 N
Disentrifugasi pada kecepatan 3400 rpm selama 20 menit
0,05 mg selulosa
supernatan Diambil 1 ml
Diencerkan dalam labu takar 10 ml dan dihomogenkan Diambil 1 ml hasil pengenceran
Ditambahkan 1 ml pereaksi Nelson Dipanaskan pada penangas air selama 30 menit
Didinginkan pada air mengalir sampai suhu 25
o
C Ditambahkan 0,5 ml arsenomolibdat
Dikocok sampai semua endapan larut Ditambahkan 7 ml akuades
Diukur absorbansinya pada panjang gelombang 761 nm
Dilakukan perlakuan yang sama untuk substrat kertas dan ampas tebu pellet
Hasil
Universitas Sumatera Utara
3.3.3 Penentuan pH Optimum Hidrolisa Selulosa Oleh Enzim Selulase
Dimasukkan masing – masing ke dalam 5 gelas beaker Ditambahkan masing – masing 5 ml larutan buffer
asetat pH 3,5; 4,0;4,5;5,0; dan 5,5 6 ml untuk blanko Ditambahkan 1 ml enzim selulaseblanko tanpa
enzim Ditambahkan 1 ml NaCl 1
Diinkubasi selama 1 jam pada suhu 45
o
C Ditambahkan 1 ml NaOH 0,1 N
Disentrifugasi pada kecepatan 3400 rpm selama 20 menit
0,05 mg selulosa
Diambil 1 ml Diencerkan dalam labu takar 10 ml dan digomogenkan
Diambil 1 ml hasil pengenceran Ditambahkan 1 ml pereaksi Nelson
Dipanaskan pada penangas air selama 30 menit Didingiinkan pada air mengalir sampai suhu 25
o
C Ditambahkan 0,5 ml arsenomolibdat
Dikocok sampai semua endapan larut Ditambahkan 7 ml akuades
Diukur absorbansinya pada panjang gelombang 761 nm Hasil
Dilakukan perlakuan yang sama untuk substrat kertas dan ampas tebu pellet
supernatan
Universitas Sumatera Utara
3.3.4 Pengukuran Aktivitas Ekstrak Kasar Enzim Selulase Pada Kondisi Optimum
Kategori