menit lalu didinginkan. Lalu ditambahkan 0,5 mL Larutan arsenomolibdat lalu
dikocok hingga semua endapan larut. Ditambahkan 7 mL akuades dikocok hinga homogen. Diukur serapan panjang gelombang pada 400 – 800 nm. diperoleh panjang
gelombang maksimum.
3.2.4 Penyiapan Kurva Standar Glukosa
Disiapkan larutan glukosa standar dalam beberapa tabung reaksi dengan konsentrasi bertingkat dari 0,01 – 0,05 mgmL. Ditambahkan 1 mL Larutan Nelson kemudian
dipanaskan hingga mendidih selama 30 menit dan didinginkan.Ditambahkan 0,5 mL Larutan arsenomolibdat lalu dikocok. Kemudian ditambahkan 7 mL akuades lalu
dikocok hingga homogen. Diukur serapannya pada panjang gelombang 761 nm. Dibuat kurva standar yang menunjukkan hubungan antara konsentrasi gula standar
dan absorbansi.
3.2.5. Penentuan Suhu Optimum Ekstrak Kasar Enzim Selulase
Ditimbang 0,05 mg selulosa dan dimasukkan masing – masing ke dalam 5 gelas beaker dan ditambahkan 5 ml buffer asetat pH 4,5 6 ml untuk blanko. Ditambahkan
1 ml ekstrak kasar enzim selulase blanko tanpa enzim lalu ditambahkan 1 ml NaCl 1. Kemudian diinkubasi dengan variasi suhu 35
o
C; 40
o
C; 45
o
C; 50
o
C dan 55
o
C selama 1 jam. Setelah itu ditambahkan 1 ml NaOH 0,1 N lalu disentrifugasi pada 3400
rpm selama 20 menit. Diambil 1 ml supernatan lalu diencerkan dalam labu takar 10 ml kemudian dihomogenkan. Dimasukkan 1 ml hasil pengenceran kedalam tabung
reaksi kemudian ditambahkan 1 ml pereaksi Nelson dan dipanaskan dalam penangas air selama 20 menit. Kemudian diangkat dan didinginkan sampai suhunya mencapai
25
o
C. Diambahkan 0,5 ml arsenomolibdat lalu dikocok sampai semua endapan larut .Kemudian ditambahkan 7 ml akuades lalu dikocok hingga homogen. Diukur
serapannya pada panjang gelombang 761 nm. Dilakukan perlakuan yang sama untuk substrat kertas dan ampas tebu.
Universitas Sumatera Utara
3.2.6. Penentuan pH Optimum Ekstrak Kasar Enzim Selulase
Ditimbang 0,05 mg selulosa dan dimasukkan masing – masing kedalam 5 gelas beaker dan ditambahkan 5 ml buffer asetat pH 3,5; 4,0; 4,5; 5; 5,5 6 ml untuk blanko.
Ditambahkan 1 ml ekstrak kasar enzim selulase blanko tanpa enzim lalu ditambahkan 1 ml NaCl 1. Kemudian diinkubasi pada suhu 45
o
C selama 1 jam. Setelah itu ditambahkan 1 ml NaOH 0,1 N lalu disentrifugasi pada 3400 rpm selama
20 menit.. Diambil 1 ml supernatan lalu diencerkan dalam labu takar 10 ml kemudian dihomogenkan. Dimasukkan 1 ml hasil pengenceran kedalam tabung reaksi kemudian
ditambahkan 1 ml pereaksi Nelson dan dipanaskan dalam penangas air selama 20 menit. Kemudian diangkat dan didinginkan sampai suhunya mencapai 25
o
C. Diambahkan 0,5 ml arsenomolibdat lalu dikocok sampai semua endapan larut.
Kemudian ditambahkan 7 ml akuades lalu dikocok hingga homogen. Diukur serapannya pada panjang gelombang 761 nm. Dilakukan perlakuan yang sama untuk
substrat kertas dan ampas tebu.
3.2.7 Pengukuran Aktivitas Ekstrak Kasar Enzim Selulase
