Kesimpulan S a r a n

daya toksisitas δ-endotoksin yang dihasilkan efektif untuk Lepidoptera dan diduga pada Diptera 4. Peningkatan skala berbasis tenaga per volume PgV produksi bioinsektisida dari skala 3 liter menjadi skala 40 liter membutuhkan aerasi sebesar 0,7 vvm dengan kecepatan agitasi 111,57 rpm. Nilai tenaga per unit volume PgV sebesar 0,037 HPm 3 , dengan demikian tingkat agitasi impeler dalam penelitian termasuk lemah. Kultivasi pada bioreaktor 40 L berjalan pada range pH 6,5 – 7 dimana jumlah total sel maksimum sebesar 10,35 x 10 8 cfumL dan jumlah spora sebesar 3,90 x 10 8 cfumL. Efisiensi pemanfaatan substrat sebesar 68,21 dengan nilai LC 50 3,19 mgL atau 2357 IUmg. Dengan demikian pengembangkan teknik produksi bioinsektisida dari bioreaktor 3 L ke 40 L memberikan hasil toksisitas yang sama, tetapi lebih rendah daripada hasil toksisitas Bt kultivasi menggunakan erlenmeyer.

5.2 S a r a n

1. Bioinsektisida yang dihasilkan dalam penelitian ini memperlihatkan adanya δ-endotoksin berbentuk bulat Cyt1Aa yang efektif terhadap Diptera, sehingga disarankan pada penelitian selanjutnya untuk mempelajari daya toksisitas galur B2 terhadap jenis Diptera. 2. Perlu adanya perlakuan pendahuluan berupa penyaringan media padat ampas tahu sebelum dilakukan kultivasi, atau kultivasi dilakukan dengan metode fermentasi padat. DAFTAR PUSTAKA Agaisse, H., D. Lereclus. 1995. How does Bacillus thuringiensis produce so much insecticidal crystal protein., J. Bacteriol., 177, 6027-6032. Aiba, S., A. E. Humprey, N. F. Millis. 1973. Biochemical Engineering. Academic Press, Inc., New York. Apaydin, O. 2004. Isolation And Characterization Of Bacillus thuringiensis Strains From Different Grain Habitats. [Disertasi]. Department of Biotechnology and Bioengineering Institute of Technology Turkey. Aprifianto, G.F. 2005. Kajian Pengaruh Agitasi dan Aerasi Produksi Bioinsektisida oleh Bacillus thuringiensis var. israelensis Menggunakan Substrat Onggok Tapioka. [Skripsi]. Bogor: Fakultas Teknologi Pertanian.Institut Pertanian Bogor. Apriyantono, A. Dkk. 1989. Petunjuk Laboratorium Analisis Pangan. PAU Pangan dan Gizi. Institut Pertanian Bogor. Aranson, A.I. dan W. Beckman dan P. Dunn. 1986. Bacillus thuringiensis and Related Insect Pathogen. Microbial Rev. 501:1-24. Aronson, J.N., Boms., D.P., Doerner, J.F., and Akers, E. 1975. -Aminobutiric Acid Pathway and Modified Tricarboxylic Acid Cycle Activity During Growth and Sponilation of Bacillus thuringiensis. Di Dalam Rivera, David. 1999. Growth kinetics of Bacillus thuringiensis Batch, Fed-batch and Continuous Bioreaktor Cultures. [Disertasi]. Ontario London. Faculty of Engineering Science Department of Chemical and Biochemical Engineering The University of Western Ontario. Banks, G.T. 1979. Scale up of Fermentation Process. Di dalam A. Wiseman ed. Topics in Enzymes Technology. Vol. 3 John Waley and Sons, New York. BBC. 2010. Bio pesticides: The Global Market www.bccresearch.comreportbiopesticides-market-chm029c.html. [diakses 29 Juli 2011]. Bernhard, K. dan R. Utz. 1993. Production of Bacillus thuringiensis Insecticides for Experimental and Commercial Uses, Hlm. 255 – 265. Di dalam P. F. Entwilse, J. S. Cory, M. J. Bailey, dan S. Higgs Penyunting. Bacillus thuringiensis An Environmental Biopesticide : Theory and Practice . John Wiley and Sons, Chichester. Buchner, G.E. 1981. Identification of Bacteria Found in Insect.Di dalam H.D. Burges editor. Microbial Control of Pest and Plant Diseases 1970-1980. Academic Press, New York. Bulla, L.E., Julian, G.S., and Rodhes, R.A., and Hesseltine, C.W. 1969. Physiology of Sporeforming Bacteria Associated with Insects. I. Glucose Catabolism in Vegetative Cells. Cahyati, A. 1998. Optimasi Media Sumber Karbon dan Nitrogen pada Produksi Bahan Aktif Bioinsektisida Bacillus thuringiensis subsp. Israelensis. [Skripsi]. Bogor: Fakultas Teknologi Pertanian.Institut Pertanian Bogor. Capinera, J.L. 2009. Diamond back Moth, Plutella xylostella Linnaeus Insecta: Lepidoptera: Plutellidae. http:edis.ifas.ufl.eduin276. Diakses tanggal 2 Desember 2010. Cetinkaya, F. T. 2002. Isolation of Bacillus thuringiensis and Investigation of Its Crystal Protein Genes. [Disertasi].Turkey. Department: Biotechnology and Bioengineering, İzmir Institute of Technology. CPL Business Consultant. 2010. http:marketpublishers.comreportindustryagriculture2010_biopesticide s_market_in_asia_australasia_n_russia.html. The 2010 Biopesticides Market in Asia, Australasia and Russia. [diakses 29 Juli 2011]. Dulmage dan Rhodes. 1971. Production of Pathogen in Artificial Media. Di dalam Burgess HD dan Hussey NW. 1971. Microbial Control of Insects Mites. London. New York. Academic Press. hlm. 507-540. Dulmage, T. 1993. Development of Isolates of Bacillus thuringiensis and Similar Aerobic Microbes for Use in Developing Countries. Proceedings of an International Workshop organised by NRC-Cairo, Agriculture Canada and IDRC National Research Centre, Cairo, Egypt and International Development Research Centre IDRC, Ottawa, Canada. Dulmage, T., Yousten, A.A., Singer, S., Lacey, L.A. 1990. Guidelines for Production of Bacillus thuringiensis H-14 and Bacillus sphaericus. UNDPWHO Special Programme for Research and Training in Tropical DiseasesTDR. Dunn, m.J. 1989. Determination of total Protein Concentration . di dalam : Protein Purification Methods. Harris, E.L.V. dan S. Angal eds.. IRL Press, Oxford, England. Ellis, Jodie A., 2004. Commonly Asked Questions About B. thuringiensis k. Bacillus thuringiensis var. kurstaki. Exotic Insects Education Coordinator Department of Entomology, Purdue University. Farrera, R. R., Perez-Guevara, F., de la Torre, M. 1998. Carbon:Nitrogen Ratio Interacts with Initial Concentration of Total Solids on Insecticid Crytal Protein and Spore Production in Bacillus thuringiensis HD-73. Appl. Microbiol. Biotechnol. 49, 758-765. Fast P. G. 1981. The Crystal Toxin of Bacillus thuringiensis, pp. 223-247. In H.D. Burges, ed. Microbial Control of Pest and Plant Diseases 1970-1980. Acad. Press, New York. Federici, Brian A., Park, Hyun-Woo., and Bideshi Dennis K. 2010. Overview of the Basic Biology of Bacillus thuringiensis with mphasis on Genetic Engineering of Bacterial Larvicides for Mosquito Control. The Open Toxinology Journal, , 3, 83-100. Ferdian, H., 2006. Potensi Protease Bacillus Subtilis Natto sebagai Pengempuk Daging. [Skripsi]. Bogor. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Intitut Teknologi Bogor. Foda, M. S., Salama, H. S., Selim, M. 1985. Factors Affecting the Growth Physiology of Bacillus thuringiensis. Appl. Microbiol. Biotechnol. 22, 50- 52. Glazer, A.N. and H. Nikaido. 1994. Microbial Biotechnology, Freeman Publishers. Hanafiah, K., A. 2005. Rancangan Percobaan: Teori dan Aplikasi. Jakarta, Rajawali Pers. Edisi kedua. HiMedia Laboratories. http:www.himedialabs.comTDM002.pdf . [diakses 30 Januari 2012] Hoffmann, W. C., P. S. Lingren, J. R. Coppedge, and I. W. Kirk. 1998. Application Parameter Effects on Efficacy of a Semiochemical-based Insecticide. App. Engr. Agric. 14:459-463. Hofte, H. dan H.R. Whiteley. 1989. Insecticidal crystal proteins of Bacillus thuringeinesis . Microbiol. Review 53:242-255. Kalshoven, L.E.G. 1981. The Pest of Crops In Indonesia. Translated by Van der Lann, P.A. P.T. Ikhtiar Baru Van Houve. Jakarta. 701 p. Kang, B.C., Lee., S.Y., and Chang, H. N. 1993. Production of Bacillus thuringinensis Spores in Total Cell Retention Culture and Two-Stage Continuous Culture Using an Internal Ceramic Filter System. Biotechnology anf Bioengineering, 42, 1107-1112. Kawalek MD, Benjamin S., Lee HL, Gill SS. 1995. Isolation and Identification of Novel Toxins from a New Mosquitocidal Isolate from Malaysia, Bacillus thuringiensis subsp. jegathesan. Appl Environ Microbiol 61: 2965-2969. Knowles, B. H., Thomas, W. E., Ellar, D. J. 1987. Lectin-like Binding of Bacillus thuringiensis var. kurstaki Lepidopteran Specific Toxin is an Initial Step in Insecticidal Action. FEBS Lett. 168, 197-202. Lopez-Meza, J.E., Ibarra, J.E. 1996. Characterization of a novel strain of Bacillus thuringiensis , Applied and Environmental Microbiology, 62, 1306-1310. Maheswaran S., Sreeramanan S., C.M. Reena Josephine, Marimuthu K and Xavier R.. 2010. Occurrence of Bacillus thuringiensis in Faeces of Herbivorous Farm Animals. Full Length Research Paper. African Journal of Biotechnology Vol. 947, 8013-8019. Moo Young, M. 1985. Comprehensive Biotechnology. Editor: A.T. Bull dan H. Dalton. Pergamon Press, Oxford. 113-280. Morris, O. N., P. Kanagaratman, and Converse. 1996. Suitability of 30 Agricultural Products and By-Products as Nutrient Sources for Laboratory Productions of Bacillus thuringiensis subsp. aizawai HD133. Journal of Pathology 70 : 113 – 120. Mummigati dan Raghunatan, 1990. Influence of Media Composition on The Production of Deltaendotoxin by Bacillus thuringiensis var. Israelensis. J. Invertebr. Pathol 55:147-155. Norris, J.R. 1971. The Protein Crystal Toxin of Bacillus thuringiensis : Biosynthesis and Physical Structure. Di dalam H.D. Burges dan N.W. Nugrahani, W. 2005. Pemanfaatan Wheat Pollard dan Wheat Bran Sebagai Substrat pada Produksi Bioinsektisida Bacillus thuringiensis Subsp. kurstaki . [Skripsi]. Bogor: Fakultas Teknologi Pertanian.Institut Pertanian Bogor. Nuraida L. 1985. Pengamatan terhadap rangkaian produksi tahu pada industri kecil tahu di Bondongan Kodya Bogor. [laporan KKN] Bogor: Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor. Othman, N. 1982. Biology of Crocidolomia binotalis Zell. Lepidoptera: Pyralidae and its parasites from Cipanas area West Java. Di Dalam Sastrosiswojo, S. dan Setiawati, W., 1989. Biology and Control of Crocidolomia binotalis in Indonesia. Bull. Penel. Hort., 20, 81-87. Pearson, D., and O. P.Ward. 1988. Effect of Culture Conditions on Growth and Sporulation Of Bacillus thuringiensis subsp israelensis and Development of Media for Production of The Protein Crystal Endotoxin. Biotechnol. Lett. 107 : 451-456. Purnawati, R. 2007. Pengembangan Produksi Bioinsektisida oleh Bacillus thuringiensis subsp. israelensis Secara Curah Menggunakan Substrat Onggok. [Tesis]. Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. Rahayuningsih M. 2003. Toksisitas dan Aktivitas Dipterosidal Bioinse ktisida Bacillus thuringiensis israelensis Tipe Liar dan Mutan pada Berbagai Formulasi Media dan Kondisi Kultivasi, [disertasi]. Bogor: Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanuan Bogor. Rathinam Xavier1, R., Nagarathinam, P., Gopalakrishnan, Murugan, V., Jayaraman K. 2007. Isolation of Lepidopteran Active Native Bacillus thuringiensis Strains Through PCR Panning. AsPac J. Mol. Biol. Biotechnol., Vol. 15 2,: 61-67. Rivera, David. 1999. Growth kinetics of Bacillus thuringrènsis Batch, Fed-batch and Continuous Bioreaktor Cultures. [Disertasi]. Ontario London. Faculty of Engineering Science Department of Chemical and Biochemical Engineering The University of Western Ontario. Rusmana, I. dan Hadioetomo, R.S. 1994. Isolasi Bacillus thuringiensis Berl. Dari Peternakan Ulat Sutera dan Toksisitasnya terhadap Larva Crocidolomia binotalis Zell. dan Spodoptera litura F. Jurnal Hayati, Vol. I No. I. Juni 1994, hlm 21-23. Saputra, D. 2008 . Pembuatan Pepton Ikan Selar Caranx leptolepis Hasil Tangkap Sampingan HTS pada Kondisi Post Rigor dan Busuk.[Skripsi]. Departemen Peikanan dan Kelautan Institut Pertanian Bogor. Sarfat, M.S., 2010. Produksi Bioinsektisida dari Bacillus thuringiensis subsp. aizawai Menggunakan Limbah Industri Tahu sebagai Substrat. [skripsi]. Bogor. Fakultas Teknologi Industri Pertanian, Institut Teknologi Bogor. Scherrer, P., Luthy, P., Trumpi, B. 1972. Production of Delta-endotoxin by Bacillus thuringiensis as a Function of Glucose Concentrations. Appl. Microbiol. Biotechnol. 254, 644-646. Schnepf EN, Crickmore J, Van Rie D, et al. 1998. Bacillus thuringiensis and Its Pesticidal Crystal Proteins. Di Dalam : Apaydin, O. 2004. Isolation And Characterization Of Bacillus Thuringiensis Strains From Different Grain Habitats. [Disertasi]. Department of Biotechnology and Bioengineering Institute of Technology Turkey. Schuler, T.H., G.M. Poppy, B.R. Kerry, dan I. Denholm. 1999. Potential Side Effects of Insect-Resistant Transgenic Plants on Arthropod Natural Enemies. B. thuringiensis Tech 17:210- 216. Shurtleff, W., and A. Aoyagi. 1975. The Book of Tofu, Food for Mankind. Sikdar, D.P., M.K. Majumdar dan S.K. Majumdar., 1993. Optimation of Process for Production of Delta Endotoxin by Bacillus thuringiensis var. israelensis in a 5 Liter Fermentation. Biochemical Archives 9: 119-123. Sinta, Dwi Ari. 2010. Pengaruh Lama Perendaman Kedelai Dan Jenis Zat Penggumpal Terhadap Mutu Tahu. [Tesis]. Semarang: Universitas Diponegoro. Sneath, P. H. A. 1986. Endospore-forming gram-positive Rods and Cocci, Hlm. 1104 – 1139. Di dalam P. H. A. Sneath, N. S. Mair, M. E. Sharpe, and J. G. Holt Penyunting. Bergey’s Manual of Systematic Bacteriologi. Volume 2 Baltimore, USA. Stanbury, P.F. dan Whitaker, A. 1984. Principle of Fermentation Technology. Oxford: Pergamon Press. Sukmadi, B., Haryanto, B. dan Ratna, S.H. 1996. Pengaruh Konsentrasi Dekstrosa pada Produksi Bahan Aktif Bioinsektisida Bacillus thuringiensis subsp. aizawai. Majalah BPPT No. LXXII : 17-23. Sumardi dan L.P.S. Patuan. 1983. Kandungan Unsur-unsur Mineral Essensial dalam Limbah Pertanian dan Industri Pertanian di Pulau Jawa. Bandung: Proceeding Seminar. Lembaga Kimia Nasional-LIPI. Syamsu, K., Rahayuningsih, M. dan Yulianti, F. 2003. Pengaruh Aerasi Terhadap Produksi Bioinsektisida oleh Bacillus thuringiensis subsp. israelensis pada Bioreaktor Tangki Berpengaduk dan Kolom Gelembung. Jurnal Teknologi Pertanian Vol. 113.92 – 100. Bogor: Jurusan Teknologi Industri Pertanian. Fakultas Teknologi Pertanian. IPB. Tirado-Montiel, M., Tyagi , R. D., Valero, J. R. 2001. Wastewater Treatment Sludge as a Raw Material for The Production of Bacillus thuringiensis Based Biopesticides. Water Research, New York, v. 35, p. 3807- 3816. Tokcaer, Zeynep. 2003. Response Surface Optimization of Bacillus thuringiensis israelensis Fermentation.[Tesis]. The Middle East Technical University. Vandekar, M., dan H.T Dulmage. 1982. Guidelines for Production of Bacillus thuringiensis H-14. Special Programme for Research and Training in Tropical Diseases. Geneva, Switzerland. Wang, D.I.C., Cooney C.L.,Demain, A.L., Dunnill P., Humprey A.E., dan Lilly M.D. 1978. Fermentation and Enzyme Technology. New York : John Wiley and Sons. Wicaksono. Y. 2002. Pemanfaatan Onggok Tapioka dan Urea Sebagai Media Sumber Karbon dan Nitrogen dalam Produksi Bioinsektisida oleh Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki. [Skripsi]. Bogor: Fakultas Teknologi Pertanian.Institut Pertanian Bogor. Wilson K. 1994. Protein and enzyme techniques In Practical Biochemistry, ed. Wilson K and Walker JM, Cambridge University Press. p.161 ‐226. Wiseman, A. 1979. Topics in Enzyme Technology vol. 3. New York: John Wiley and Sons. Yamamoto, T. dan Iizuka, I. 1983. Two Types of Entomocidal Toxins in The Parasporal Crystals of B. thuringiensis kurstaki. Archives of Biochemitry. 2271: 233-241. Yang, X. M., and S. S. Wang. 1998. Development of Bacillus thuringiensis fermentation and process control from a practical perspective. Biotechnol. Appl. Biochem. 28:95-8. Yanus. 1988. Protease dari Bacillus subtilis dan penerapannya sebagai pengempuk daging. [skripsi]. Bogor: Fakultas Teknik Pertanian, Institut Pertanian Bogor. Yulianti, F. 2001. Pengaruh Aerasi dan Jenis Bioreaktor Terhadap Produksi Bioinsektisida oleh Bacillus thuringiensis subsp. israelensis. [Skripsi]. Bogor: Fakultas Teknologi Pertanian.Institut Pertanian Bogor. L A M P I R A N Lampiran 1 Analisis Bahan Baku Media Kultivasi 1. Penetapan Kadar Air dengan Metode Oven AOAC, 1984 Cawan alumenium kosong dipanaskan dengan oven 105 C selama 15 menit, kemudian didinginkan dengan desikator selama 30 menit dan ditimbang. Prosedur pengeringan cawan ini diulang sampai didapatkan bobot tetap. Sampel sebanyak 4 – 5 gram ditimbang dalam cawan tersebut, kemudian dipanaskan dalam oven pada suhu 105 C selama 3 -5 jam. Setelah cawan dikeluarkan dari oven dan didinginkan, diulang sampai didapatkan bobot tetap bahan. Presentase kadar air dapat dihitung dengan menggunakan rumus sebagai berikut : Kadar Air = A − B C x 100 Keterangan : A : Bobot cawan berisi sampel sebelum dioven g B : Bobot cawan berisi sampel setelah dioven g C : Bobot sampel basah g

2. Penetapan Kadar Abu dengan Metode Oven AOAC, 1984

Sampel sebanyak 4 – 5 gram ditimbang dalam cawan yang bobotnya konstan. Dibakar sampai tak berasap di atas Bunsen dengan api kecil, kemudian dimasukkaan ke dalam tanur pada suhu 600 C sampai menjadi abu. Cawan didinginkan di dalam desikator selama 15 menit kemudian ditimbang. Pengabuan diulangi, dengan cara dimasukkan ke dalam tanur pada suhu 600 C selama 1 jam sampai didapat bobot yang tetap. Presentase kadar abu dapat dihitung dengan menggunakan rumus sebagai berikut : Kadar Abu = A − B C x 100 Keterangan : A : Bobot cawan berisi abu sampel g B : Bobot cawan g C : Bobot sampel basah g

3. Penetapan Kadar Protein Nitrogen dengan Metode Kjedhal

Sampel sebayak 0,2 gram, ditambahkan dengan 1 gram CuSO 4 , 1,2 gram Na 2 SO 4 , dan 2,5 larutan H 2 SO 4 pekat dan didestruksi dalam labu Kjedhal selama 1 jam. Setelah dingin ditambahkan larutan NaOH 50 sebanyak 15 ml dan didestilasi. Destilat ditampung dalam Erlenmeyer yang berisi larutan asam borat 0,02 N. destilat dititrasi dengan larutan H 2 SO 4 0,02 N yang sebelumnya telah ditambahkan indicator mensel. Penentuan kadar nitrogen berdasarkan volume larutan NaOH 0,02 N yang digunakan untuk titrasi. Blangko disiapkan seperti prosedur penentuan kadar nitrogen dengan metode Kjedhal. Penentuan kadar nitrogen dihitung berdasarkan rumus sebagai berikur : Total N = ml H SO sampel − ml H SO blangko x N H SO x 0,014 x FP gr am sampel x 100 Pr otein = Total N + Faktor Konver si FK Keterangan : FP : Faktor Pengencer FK : Faktor Konversi 6,25

4. Penetapan Kadar Lemak dengan Metode Ekstraksi Langsung dengan

Alat Soxhlet SNI 01-2891-1992 Sebanyak 1 – 2 gram contoh, dimasukkan ke dalam selongsong kertas saring yang dialasi dengan kapas. Kemudian selongkong kertas saring berisi contoh disumbat dengan kapas lalu dikeringkan di dalam oven pada suhu tidak lebih dari 80 C selama lebih kurang 1 jam. Kemudian selongsong kertas yang telah di oven dimasukkan ke dalam alat soxhlet yang telah dihubungkan dengan labu lemak berisi batu didih yang telah dikeringkan dan telah diketahui bobotnya. Kemudian diekstraksi dengan heksana atau pelarut lemak lainnya selama lebih kurang 6 jam. Kemulian heksana disuling dan ekstrak lemak dikeringkan di dalam oven pada suhu 105 C sampai bobotnya tetap. Didinginkan dan ditimbang. Penentuan kadar lemak dihitung berdasarkan rumus sebagai berikur : Total lemak = W2 − W1 W x 100 Keterangan : W : bobot contoh g W1 : Bobot labu lemak kosong g W2 : Bobot labu lemak dan lemak g

5. Penetapan Kadar Serat Kasar AOAC, 1984

Sebanyak 2 gram contoh dimasukin ke dalam Erlenmeyer 500 ml dan ditambahkan 100 ml H 2 SO 4 0,325 N. kemudian dihidroolisis di dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 105 C. Didinginkan lalu ditambahkan NaOH 1,25 N sebanyak 50 ml. hidrolisis kembali ke dalam autoklaf selama 15 menit. Kemudian contoh disaring dengan kertas saring yang telah dikeringkan dan diketahui bobot tetapnya. Contoh dicuci berturut-turut dengan air panas menggunakan 25 ml H 2 SO 4 0,325 N, kemudian dicuci dengan air panas terakhir menggunakan alkohol 25 ml. kertas saring dikeringkan di dalam oven pada suhu 105 C sampai bobotnya tetap. Penentuan kadar serat dihitung berdasarkan rumus sebagai berikur : Kadar Ser at = Bobot ker tas dan ser at − Bobot ker tas Bobot contoh aw al x 100

6. Penetapan Kadar Karbohidrat by different

a. Penentuan karbohidrat by different dihitung berdasarkan rumus sebagai berikut : KKh = 100 − K air − K abu − K lemak − K ser at kasar Keterangan : K = Kadar Kh = Karbohidrat b. Penentuan Karbohidrat Gula Total dan gula Sisa dengan Metode Fenol Apriyantono et.al 1989 Pembuatan Kurva Standar Larutan glukosa dengan konsentrasi 0, 10, 20, 30, 40, 50 dan 60 mgl diambil sebanyak 2 ml dan masing-masing dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 1 ml larutan fenol 5 dan ditambahkan 5 ml larutan H 2 SO 4 pekat dengan cepat. Setelah dibiarkan selama 10 menit, larutan dipanaskan dalam penangas air selama 15 menit. Larutan diukur absorbansinya pada λ = 490 nm. Tabel 20 Data kurva standar glukosa Gambar 24 Kurva standar glukosa Penentuan Fermentable Sugar - Penentuan Sampel Limbah Cair Tahu Sebanyak 2, g sampel dilarutkan 20 -30 ml air dan ditambah 0,2 g CaCO 3 ; didihkan selama 30 menit. Selama pendidihan ditambahkan air secukupnya agar volumenya tetap. Larutan kemudian didinginkan ditambahkan Pb-asetat jenuh sampai jernih. Untuk mengendapkan Pb selanjutnya ditambahkan Na-oksalat. Larutan selanjutnya dipindahkan ke dalam labu ukur 50 ml dan ditera, dikocok dan dibiarkan selama 24 y = 0,0108x - 0,0192 R² = 0,9946 -0,2 0,2 0,4 0,6 0,8 10 20 30 40 50 60 70 Absorbansi 490 nm Konsentrasi mg L Absorban Linear Absorban Konsentrasi mgL Absorban 20 0.184 30 0.277 40 0.409 50 0.533 60 0.632 sampai mengendap sempurna. Supernatan yang berwarna bening selanjutnya siap dianalisis. - Sampel Ampas Tahu Sejumlah 2 gr sampel ditambahkan air dengan perbandingan 1 : 2 dan dipanaskan hingga mendidih. Sampel dihancurkan sampai semua gula terekstrak. Selanjutnya sampel disaring menggunakan kapas, filtrat dtempatkan pada gelas piala. Sisa padatan pada kapas dicuci dengan air sampai seluruh gula terlarut dalam filtrat. pH filtrat diukur, jika asam ditambahkan CaCO 3 sampai cukup basa. Selanjutnya dididihkan pada penangas air selama 30 menit, jika alkohol kering ditambahkan air secukupnya. Jika ada endapan maka sampel perlu disaring dan dilakukan penambahan Pb-asetat dan Na-oksalat seperti sampel cair.

7. Pengukuran Mineral

a. Penyiapan sampel padat

Ampas tahu dihaluskan terlebih dahulu kemudian dicuci dengan air dan dikeringkan dengan tisu. Sample dimasukan dalam mortar kemudian dihaluskan sampai 100 mesh. Timbang cuplikan atau sample masing-masing ±200 mg dengan menggunakan neraca analitik. Pada teflon bom digester yang berisi sampel di tambah HNO 3 65 ± 5 ml dan HF ±0,5 ml, kemudian teflon bom digester ditutup rapat dan panaskan pada suhu ±150 o C selama 8 jam dalam furnace. Sample yang ada pada teflon bom digester ke beker teflon ditambah aquades sampai kurang lebih setengah dari volume beaker teflon, dan dipanaskan di atas kompor penangas pasir. Setelah larutan sampel tersebut menguap hingga ±10 ml, kemudian ditambah aquades lagi sekitar setengah dari volume beaker teflon, secara berulang-ulang. Lalu ditera pada labu ukur 10 ml dengan labu ukur hingga tanda batas. Selanjutnya dilakukan pengukuran dengan AAS.

b. Sample cair

Untuk pengukuran kadar makro dan mikro elemen pada sampel cair harus disaring terlebih dahulu kemudian dapat langsung dilakukan pengukuran dengan AAS. Lampiran 2 Metode Analisis Sebelum dan Setelah Kultivasi a. Pengukuran pH Pengukuran pH cairan dilakukan dengan menggunakan pH-meter yang telah dikalibrasi dengan menggunakan buffer standar 4, 7, dan 10. Sampel cairan kultur diambil pada waktu yang telah ditentukan dan langsung diukur dengan pH-meter tanpa dilakukan pengenceran terlebih dahulu.

b. Pengamatan Jumlah Spora Hidup Viable Spore CountVSC

Cairan fermentasi diambil sebanyak 1 ml dan dilakukan pengenceran dengan 9 ml larutan garam fisiologis. Cairan selanjutnya diberikan renjatan panas pada suhu 80 C selama 15 menit. Bahan yang telah direnjat selanjutnya diambil 1 ml dan dilakukan sederetan pengenceran dengan 9 ml larutan garam fisiologis. Setiap pengenceran diambil 1 ml dan ditumbuhkan pada medium agar dalam cawan petri dan diinkubasi pada suhu 30 C selama 24 jam. Jumlah koloni yang tumbuh kemudian dihitung.

c. Pengamatan Jumlah Sel Hidup Total Plate CountTPC

Cairan fermentasi diambil sebanyak 1 ml dan dilakukan pengenceran dengan 9 ml larutan garam fisiologis. Cairan yang sudah diencerkan selanjutnya diambil 1 ml dan dilakukan sederetan pengenceran dengan 9 ml larutan garam fisiologis. Setiap pengenceran diambil 1 ml dan ditumbuhkan pada medium agar dalam cawan petri dan diinkubasi pada suhu 30 C selama 24 jam. Jumlah koloni yang tumbuh kemudian dihitung.

d. Prosedur Pengukuran Bobot Kering Biomassa

Pengukuran bobot biomassa kering menggunakan metode penentuan kadar air. Cawan alumunium kosong dipanaskan dalam oven pada suhu 105°C selama 15 menit, kemudian didinginkan dalam desikator selama 30 menit dan ditimbang. Prosedur pengeringan cawan ini diulang sampai didapatkan bobot tetap. Cairan fermentasi sebanyak 5 ml ditimbang dalam cawan tersebut, kemudian dipanaskan dalam oven pada suhu 105°C selama 3-5 jam. Setelah itu cawan dikeluarkan dari oven dan didinginkan, diulangi sampai didapatkan bobot tetap bahan. Persentase bobot biomassa kering dihitung dengan rumus sebagai berikut :