Kultivasi dilakukan selama 96 jam dengan aerasi sebesar 0,2 vvm, agitasi 150 rpm, pH 6,5-7,5 dan suhu bioreaktor 37
C. Pengecekan kondisi proses dilakukan setiap 12 jam dan bila timbul busa yang cukup
banyak di dalam bioreaktor dapat ditambahkan larutan anti busa secukupnya. Pengendalian pH dilakukan secara otomatis, larutan alkali
yang disiapkan adalah NaOH 4 M sedangkan larutan asamnya adalah H
3
PO
4
1,33 N.
c. Proses Hilir PHA Modifikasi dari Atifah 2006, Hahn et al. 1994, dan
Ramsay et al. 1992
Setelah proses kultivasi selesai jam ke 96, cairan kultivasi disentrifugasi sebanyak empat tahapan. Setiap tahapan sentrifugasi
dilakukan pada kecepatan 13.000 rpm selama sepuluh menit pada suhu 4
C. Kecepatan sentrifugasi 13.000 rpm ini setara dengan 27.504 G. Sentrifugasi tahap pertama bertujuan untuk mengendapkan biomassa
dari cairan kultivasi. Endapan yang diperoleh kemudian dibilas dengan aquades untuk pembersihan, kemudian dilakukan sentrifugasi tahap
kedua. Hasil bilasan ditambah NaOCl 0,2 , kemudian dilakukan proses digest selama satu jam untuk menghancurkan materi sel selain
PHA. Proses digest dilakukan di dalam labu erlenmeyer 250 ml yang ditempatkan pada water bath shaker dengan suhu 37
C dan kecepatan putar 120 rpm.
PHA dapat dikeluarkan dari dalam sel dan terpisah dari materi sel setelah proses digest dengan NaOCl. Sentrifugasi tahap ketiga
dilakukan untuk memisahkan hasil digest PHA dari cairannya NaOCl dan materi sel terlarut. Hasil sentrifugasi tahap ketiga kemudian dibilas
dengan metanol. Metanol berguna untuk melarutkan sisa NaOCl dan materi sel lain yang masih tersisa sehingga terpisah dari PHA.
Pemisahan PHA dari metanol dilakukan dengan sentrifugasi tahap keempat. Endapan hasil sentrifugasi keempat diambil dan diletakkan
diatas cawan petri, kemudian dikeringkan di dalam oven pada suhu 50 C sampai kering. PHA berbentuk padatan kering setelah pengeringan
dengan oven, namun PHA ini masih mengandung pengotor seperti protein, lemak, dan media kultivasi yang tersisa, sehingga perlu
dimurnikan lebih lanjut. Diagram alir proses hilir PHA dapat dilihat pada Lampiran 4.
Polimer PHA yang telah dikeringkan dan ditumbuk sampai halus dilarutkan ke dalam kloroform dengan perbandingan 1:50 bv.
Campuran tersebut kemudian direfluks pada suhu 50 C dengan
pengadukan menggunakan magnetic stirer selama 20-24 jam. Setelah selesai, campuran kemudian disaring dengan corong Buchner
menggunakan kertas saring Whatman 42. Cairan yang lolos kertas saring kemudian ditampung di atas cawan petri dan pelarut diuapkan
pada suhu ruang. PHA yang didapatkan dari proses ini sudah berbentuk lembaran seperti plastik dan siap digunakan pada penelitian utama.
2. Pembuatan Film Bioplastik Juari, 2006
