3.8.1. Prosedur Pengamatan Kandungan Kalsium dalam Darah
.
Pengamatan kadar kalsium dalam darah dilakukan dengan alat Photometer Olympus 400. Darah mencit diambil dari jantung mencit intrakardial dengan menggunakan spuit 1
cc yang sebelumnya telah dibilas dengan heparin, kemudian diputar centrifuge dengan kecepatan 3500 rpm selama 5 menit untuk diambil plasmanya. Kemudian diperiksa dengan
alat fotometer Olympus 400, dengan memakai reagen kalsium. Sebelum melakukan pemeriksaaan kalsium lakukan kalibrasi dan kontrol terlebih dahulu. Kalibrator dan kontrol
dilarutkan dengan aquabidestilata 5 ml dan dicampur dengan sampai homogen, dibagi dalam cup 300µl kemudian disimpan dalam freezer. Kalibrator dan kontrol dalam kit
disimpan pada suhu 2-8 ºC. Selanjutnya lakukan kalibrasi bersamaan dengan kontrol dan sampel, sbb :
- Pipet 1000 µl Blankko Aquabides ke dalam cup serum dan diletakan pada rak
Blanko yang telah ditentukan. -
Pipet 300 µl Kalibrator kalsium dan kontrol ke dalam cup serum dan letakkan pada rak kalibrator yang
telah ditentukan. -
Jalankan kalibrator dan kontrol dalam alat fotometer Olympus 400. Jika hasil berada dalam range yang ditentukan, baru sampel dimasukkan dalam alat fotometer.
- Sampel dimasukkan dalam Spektrofotometer untuk penetapan kadar kalsium dalam
darah.
Universitas Sumatera Utara
3.8.2. Pengamatan Kadar Kalsium dalam Mandibula dan Tibia
Analisis kadar ion kalsium dalam mandibula dan tibia dilakukan di Laboratorium Lingkungan BLH Badan Lingkungan Hidup Medan, dengan menggunakan alat AAS
Atomic Absorbantion Spectrophotometry dengan merk Perkin Elmer 3110. Tulang dikeluarkan dari lemari pendingin dan dibiarkan hingga kondisisnya mencapai kira-kira
suhu ruang. Kemudian tulang dimasukkan kedalam cawan porselen dan diberi label sesuai dengan perlakuannya dan dimasukkan kedalam oven dengan suhu 95⁰C selama 24 jam.
Tulang diabukandimineralisasi dalam tungkutanur muffle furnace pada suhu 600 ⁰C
metode kering selama 25 jam atau dalam 5 hari pengerjaan. Setelah tulang menjadi abu, cawan porselen dikeluarkan kemudian ditambahkan 2 ml asam nitrit HNO
3
65, kemudian abu tulang dicuci dengan aquades dan ditambahkan 2 ml HCl 30 untuk menghilangkan
mineral-mineral yang tidak diinginkan, lalu sampel disaring dengan kertas saring hingga larutan sampel menjadi 10 ml. Sampel dimasukkan ke dalam labu ukur yang berukuran10
ml. Penetapan kadar kalsium di ukur menggunakan alat AAS Perkin Elmer 3110, dengan panjang gelombang -422.7nm Rahnama, 2004.
3.9. Analisis Data dan Pengujian Hipotesis
Kategori