3.7. Pelaksanaan Penelitian 3.7.1.
Pemeliharaan Hewan Percobaan
Mencit ditempatkan di dalam kandang berukuran 30x20x10 cm yang terbuat dari bahan plastik yang ditutup dengan kawat kasa. Dasar kandang dilapisi dengan sekam
padi setebal 0,5-1 cm dan diganti setiap empat hari. Cahaya ruangan diatur selama 12 jam terang pukul 06.00 sampai dengan pukul 18.00 dan 12 jam gelap pukul 18.00 sampai
dengan pukul 06.00, sedangkan suhu dan kelembaban ruangan dibiarkan berada pada kisaran alamiah. Pakan pellet komersial dan minum air leding PAM diberikan ad
libitum setiap hari.
3.7.2. Cara Pembuatan Suplemen Kalsium
Tablet kalsium sitrat yang digunakan adalah tablet kalsium sitrat merk Supracal yang dikelurkan oleh Natures only CA, USA. Tiap tablet kalsium sitrat mengandung 1000
mg kalsium sitrat, Vitamin D3 200IU, 100 mg, Mg 100 mg, dan Zinc 4 mg. Tablet kalsium sitrat 1 tablet digerus dalam cawan penggerus sampai dengan
halus, ditimbang dengan neraca analitik sebesar 39,9 mg untuk 1 kandang mencit, kemudian dimasukkan ke dalam botol kecil dan dilarutkan dalam 4,5 ml aquades. Aquades
diambil dengan menggunakan mikropipet, kemudian masukkan magnet kecil kedalam botol dan tutup botol dengan ketat. Bubuk kalsium dan aquades diaduk selama ± 15 menit
dengan menggunakan magnet stirer sampai menjadi larutan kalsium yang homogen. Setelah larutan kalsium homogen, magnet kecil dikeluarkan dan botol ditutup rapat
kembali.
Universitas Sumatera Utara
Pembuatan larutan kalsium dalam aquadest dilakukan setiap 2 hari di Laboratorium Terpadu FK USU. Bubuk kalsium yang telah digerus ditimbang 39,9 mg kemudian
dibungkus dengan kertas perkamen dan disimpan dalam wadah kering untuk kemudian siap digunakan pada pembuatan larutan kalsium dua hari berikutnya.
3.7.3. Perhitungan Dosis Suplemen Kalsium
Dosis pemberian suplemen kalsium sitrat sebesar 27 mg200g BB tikusharioral mengikuti penelitian Yuliati et al 2007. Penetapan dosis kalsium sitrat untuk satu mencit
berdasarkan konversi dosis dalam tabel konversi dosis Harmita, 2008. Angka konversi dari tikus dengan berat badan 200g ke mencit dengan berat badan 20g yaitu sebesar 0,14g.
Selengkapnya perhitungan dosis suplemen kalsium adalah : Pada tikus : 27 mg200 g BB = setiap 200gBB tikus memperoleh 27 mg kalsium.
Pada mencit : 27 mg × 0,14 = 3,78 mg 20g BB mencit = setiap 20g BB mencit harus mendapat 3,78 mg kalsium.
Tiap g BB mencit harus mendapat kalsium sebesar 3,78 : 20 = 0,19 mg. Pada penelitian ini rata-rata BB mencit pada P3 dan P4 adalah 35g, sehingga dosisinya:
0,19 mg× 35 g = 6,65 mgekor. Untuk satu kandang 6,65 mg × 6 ekor mencit = 39,9 mg.Cara pemberian kalsium sitrat,
dilarutkan dalam 0,5 ml aquades × 9 ekor = 4,5 ml aquades, hal ini berdasarkan volume maksimal larutan yang diberikan pada mencit dengan berat 25-35g per oral adalah
sebanyak 1ml Harmita, 2008.
Universitas Sumatera Utara
3.7.4. Perlakuan Hewan Percobaan
