Penetapan Kadar Bahan Baku Betametason Valerat Dengan Metode HPLC (High Performance Liquid Chromatography)
PENETAPAN KADAR BAHAN BAKU BETAMETASON
VALERAT PT. KIMIA FARMA (PERSERO) Tbk.
PLANT
MEDAN SECARA HPLC
(High Performance Liquid Chromatography)
TUGAS AKHIR
OLEH:
VANESIA ATELYA O. MANURUNG NIM 122410098
PROGRAM STUDI DIPLOMA III
ANALIS FARMASI DAN MAKANAN
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
(2)
(3)
KATA PENGANTAR
Segala puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Kuasa yang telah melimpahkan berkat dan kasihNya serta menganugerahkan pengetahuan dan kesempatan sehingga penulis dapat menyelesaikan tugas akhir yang berjudul ”Penetapan Kadar Bahan Baku Betametason Valerat Dengan Metode HPLC (High Performance Liquid Chromatography)”. Tugas akhir ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat dalam menyelesaikan Program Studi Diploma III Analis Farmasi dan Makanan di Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
Penulis menyadari bahwa tanpa bantuan dari berbagai pihak, penulis tidak akan dapat menyelesaikan tugas akhir ini sebagaimana mestinya. Untuk itu penulis juga mengucapkan terima kasih yang sebesar–besarnya kepada berbagai pihak antara lain:
1. Ibu Dra. Anayanti Arianto, M.Si., Apt., sebagai Dosen Pembimbing yang telah memberikan bimbingan dan pengarahan kepada penulis dalam penyusunan tugas akhir ini.
2. Bapak Yogi Sugianto, S.Farm., Apt., sebagai Pembimbing Lapangan yang telah membimbing dan memberikan saran serta petunjuk selama pelaksanaan PKL di PT. Kimia Farma (Persero) Tbk Plant Medan.
3. Bapak Drs. H. Zulfadli, Apt. selaku Assistant Manager Produksi PT. Kimia Farma (Persero) Tbk. Plant Medan yang telah mengarahkan mulai dari awal sampai selesainya Praktek Kerja Lapangan ini.
4. Bapak Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt., sebagai Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
(4)
5. Bapak Prof. Dr. Jansen Silalahi, M.App.Sc., Apt., sebagai Ketua Program Diploma III Analis Farmasi dan Makanan Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
6. Kepada seluruh staff laboratorium jaminan mutu (Quality Control) PT. Kimia Farma (Persero) Tbk Plant Medan.
7. Dra. Suwarti Aris M.si., Apt., sebagai Dosen Penasehat Akademis yang telah memberikan nasehat dan pengarahan dalam hal akademis setiap semester. 8. Sahabat–sahabat tersayang Try Iga Septiawandari, Anggi Nulvi Siregar,
Hilvina Anugrahwati, dan Sherina Elvira Nasution yang saling mendukung selama pengerjaan tugas akhir.
9. Serta pihak–pihak yang telah ikut membantu penulis namun tidak tercantum namanya.
Dengan segala ketulusan hati penulis ingin menyampaikan penghargaan yang sebesar-besarnya kepada kedua orangtua yaitu Alm P.Manurung dan A.Purba, dan ketiga saudara yaitu Alex Manurung, Immanuel Manurung dan Natasya Manurung.
Penulis menyadari bahwa penulisan tugas akhir ini masih belum sempurna. Oleh karena itu, penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun untuk kesempurnaan tugas akhir ini. Akhir kata penulis berharap tugas akhir ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang membaca.
Medan, Maret 2015 Penulis,
(5)
PENETAPAN KADAR BAHAN BAKU BETAMETASON
VALERAT SECARA HPLC
(High Performance Liquid Chromatography)
ABSTRAK
Betametason valerat adalah suatu kortikosteroid topikal yang mempunyai sifat anti inflamasi, anti pruritik, dan vasokonstriktif, dengan indikasi untuk meringankan inflamasi dari dermatosis yang responsif terhadap kortikosteroid.
Pengawasan terhadap bahan baku betametason valerat perlu untuk dilakukan karena akan mempengaruhi mutu suatu obat. Oleh karena itu, pemeriksaan terhadap bahan baku betametason harus dilakukan sebelum diformulasi menjadi obat.
Sampel dipilih sebanyak 5 dengan nomor batch yang sama dan disatukan sebagai bahan baku untuk diuji. Pengambilan sampel dengan metode acak dan berat masing-masing sampel yang diambil ± 25 gram. Metode yang digunakan dalam penetapan kadar bahan baku betametason valerat adalah metode HPLC (High Performance Liquid Chromatography). Metode ini menggunakan pelarut metanol : asam asetat glasial (1000:1) yang diukur pada panjang gelombang maksimum 254 nm.
Dari hasil pengukuran didapatkan kadar bahan baku betametason valerat 101,11, dan 101,01% dengan rata-rata kadar 101,06%. Menurut Farmakope Indonesia Edisi IV, rentang kadar bahan baku betametason valerat tidak kurang dari 97,00% dan tidak lebih dari 103,00%. Dengan demikian, bahan baku betametason valerat yang telah ditetapkan kadarnya tersebut memenuhi persyaratan kadar.
Kata Kunci: bahan baku, betametason valerat, HPLC (High Performance Liquid Chromatography)
(6)
DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL ... i
LEMBAR PENGESAHAN ... ii
KATA PENGANTAR ... iii
ABSTRAK ... v
DAFTAR ISI ... vi
DAFTAR LAMPIRAN ... ix
BAB I PENDAHULUAN ... 1
1.1 Latar Belakang ... 1
1.2 Tujuan dan Manfaat ... 2
1.2.1 Tujuan ... 2
1.2.2 Manfaat ... 3
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ... 4
2.1 Pengertian Obat ... 4
2.2 Bahan Baku ... 5
2.3 Syarat-Syarat Bahan Baku ... 5
2.4 Obat Kulit Topikal Kortikosteroid ... 7
2.5 Betametason Valerat ... 9
2.7 Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) ... 10
BAB III METODOLOGI PERCOBAAN ... 14
3.1 Tempat Pelaksanaan ... 14
(7)
3.3 Bahan-Bahan ... 14
3.4 Pengambilan Sempel Uji ... 14
3.5 Pembuatan Pereaksi... 15
3.5.1 Pembuatan Pelarut Metanol:As.Asetat Glasial(1000:1) . 15 3.5.2 Pembuatan Fase Gerak Asetonotril:Aquabidest (6:4) .... 15
3.6 Pembuatan Larutan ... 15
3.6.1 Larutan Standar ... 15
3.6.2 Larutan Sampel ... 16
3.7 Penetapan Kadar ... 16
3.7.1 Larutan Standar ... 16
3.7.2 Larutan Sampel ... 17
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 18
4.1 Hasil ... 18
4.2 Pembahasan ... 18
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 20
5.2 Kesimpulan ... 20
5.3 Saran ... 20
DAFTAR PUSTAKA ... 21
(8)
DAFTAR TABEL
Halaman Tabel 4.1. Data Hasil Standar ... 18 Tabel 4.2. Data Hasil Sampel ... 18
(9)
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman Lampiran 1. Perhitungan Kadar Bahan Baku Betametson Valerat ... 22 Lampiran 2. Hasil Kadar Bahan Baku Betametson Valerat ... 25 Lampiran 3. Gambar Alat-alat Yang Digunakan ... 26
(10)
PENETAPAN KADAR BAHAN BAKU BETAMETASON
VALERAT SECARA HPLC
(High Performance Liquid Chromatography)
ABSTRAK
Betametason valerat adalah suatu kortikosteroid topikal yang mempunyai sifat anti inflamasi, anti pruritik, dan vasokonstriktif, dengan indikasi untuk meringankan inflamasi dari dermatosis yang responsif terhadap kortikosteroid.
Pengawasan terhadap bahan baku betametason valerat perlu untuk dilakukan karena akan mempengaruhi mutu suatu obat. Oleh karena itu, pemeriksaan terhadap bahan baku betametason harus dilakukan sebelum diformulasi menjadi obat.
Sampel dipilih sebanyak 5 dengan nomor batch yang sama dan disatukan sebagai bahan baku untuk diuji. Pengambilan sampel dengan metode acak dan berat masing-masing sampel yang diambil ± 25 gram. Metode yang digunakan dalam penetapan kadar bahan baku betametason valerat adalah metode HPLC (High Performance Liquid Chromatography). Metode ini menggunakan pelarut metanol : asam asetat glasial (1000:1) yang diukur pada panjang gelombang maksimum 254 nm.
Dari hasil pengukuran didapatkan kadar bahan baku betametason valerat 101,11, dan 101,01% dengan rata-rata kadar 101,06%. Menurut Farmakope Indonesia Edisi IV, rentang kadar bahan baku betametason valerat tidak kurang dari 97,00% dan tidak lebih dari 103,00%. Dengan demikian, bahan baku betametason valerat yang telah ditetapkan kadarnya tersebut memenuhi persyaratan kadar.
Kata Kunci: bahan baku, betametason valerat, HPLC (High Performance Liquid Chromatography)
(11)
BAB I
PENDAHULUAN 1.1Latar Belakang
Obat memiliki cakupan makna yang sangat luas, bukan hanya terbatas pada zat-zat yang digunakan untuk menyembuhkan seseorang yang sedang sakit. Zat-zat yang berfungsi untuk mencegah, mengurangi, menghilangkan penyakit atau gejala penyakit, luka, atau kelainan, baik jasmani maupun rohani pada manusia dan hewan juga disebut dengan obat (Widodo, 2004).
Obat dapat bersifat sebagai obat dan juga dapat bersifat sebagai racun. Obat akan bersifat sebagai obat apabila tepat digunakan dalam pengobatan suatu penyakit dengan dosis dan waktu yang tepat. Jadi bila digunakan salah dalam pengobatan atau dengan kelewatan dosis akan menimbulkan keracunan. Bila dosisnya lebih kecil, maka tidak diperoleh efek penyembuhan (Anief, 2007).
Pada pembuatan suatu obat, mutu obat merupakan hal terpenting yang harus diperhatikan, sesuai dengan persyaratan mutu yang tertera pada Cara Pembuatan Obat yang Baik (CPOB). Mutu obat salah satunya ditentukan oleh bahan baku yang harus memenuhi persyaratan. Pada tahap awal harus terlebih dahulu memeriksa bahan baku secara kualitatif dan kuantitatif apakah memenuhi persyaratan yang telah ditetapkan untuk menjamin mutu suatu obat. Obat harus sesuai dengan prioritas kebutuhan kesehatan serta memenuhi standar mutu, keamanan dan khasiat obat yang dapat diterima. Oleh karena itu, bahan baku betametason valerat harus dilakukan pemeriksaan sebelum diformulasi menjadi bentuk sediaan krim (Siregar, 2010).
(12)
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi atau KCKT atau biasa juga disebut dengan HPLC (High Performance Liquid Chromatography) dikembangkan pada saat akhir tahun 1960-an dan awal tahun 190-an. Saat ini KCKT merupakan teknik pemisahan yang diterima secara luas untuk analisis dan pemurnian senyawa tertentu dalam suatu sampel pada sejumlah bidang, antara lain: farmasi, lingkungan, bioteknologi, polimer, dan industri-industri makanan. KCKT paling sering digunakan untuk menetapkan kadar senyawa-senyawa tertentu yaitu asam-asam amino, asam-asam-asam-asam nukleat, dan protein-protein dalam cairan fisiologis; menetukan kadar senyawa-senyawa aktif obat (Munson,1991).
Menurut Farmakope Indonesia Edisi IV kadar bahan baku betametason valerat tidak kurang dari 97,00% dan tidak lebih dari 103,00%, dan penetapan kadar bahan baku betametason valerat dilakukan dengan metode kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT). Oleh karena itu, dilakukan penetapan kadar bahan baku betametason valerat secara HPLC (High Performance Liquid Chromatography) di PT. Kimia Farma (Persero) Tbk. Plant Medan”.
1.2Tujuan dan Manfaat 1.2.1 Tujuan
Untuk menentukan kadar bahan baku Betametason Valerat PT. Kimia Farma (Persero) Tbk. Plant Medan Secara HPLC (High Performance Liquid Chromatography) dan membandingkan kadar yang diperoleh dengan persyaratan
(13)
1.2.2 Manfaat
Untuk mengetahui kadar bahan baku betametason valerat, serta menambah pengetahuan dan keterampilan, khususnya tentang penetapan kadar bahan baku betametason sebagai zat aktif dengan menggunakan metode HPLC (High Performance Liquid Chromatography).
(14)
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Pengertian Obat
Obat adalah tiap bahan atau campuran bahan yang dibuat, ditawarkan untuk dijual atau disajikan untuk digunakan dalam pengobatan, peredaan, pencegahan, atau diagnosis suatu penyakit, kelainan fisik, atau gejala-gejalanya pada manusia atau hewan; atau dalam pemulihan, perbaikkan, atau mengubah fungsi organik pada manusia dan hewan (Siregar,2010).
Meskipun obat dapat menyembuhkan tapi banyak kejadiaan yang mengakibatatkan seseorang menderita akibat keracunan obat. Oleh karena itu dapat dikatakan bahwa obat dapat bersifat sebagai obat dan juga dapat bersifat sebagai racun. Obat akan bersifat sebagai obat apabila tepat digunakan dalam pengobatan suatu penyakit dengan dosis dan waktu yang tepat. Jadi bila digunakan salah dalam pengobatan atau dengan kelewatan dosis akan menimbulkan keracunan. Bila dosisnya lebih kecil, maka tidak diperoleh efek penyembuhan (Anief, 2007).
Untuk menghasilkan efek farmakologi atau efek terapi, obat harus mencapai tempat aksinya dalam konsentrasi yang cukup untuk menimbulkan respon. Tercapainya konsentrasi obat tergantung pada keadaan dan kecepatan obat diabsorpsi dari tempat pemerian dan distribusinya oeh aliran darah kebagian yang lain dari badan (Anief, 1990).
Zat aktif obat tidak dapat digunakan begitu saja untuk pengobatan, tetapi harus dibuat suatu bentuk yang cocok serta dipilih rute penggunaan obat yang sesuai agar tujuan pengobatan dapat tecapai (Anief, 2007).
(15)
2.2 Bahan Baku
Bahan baku adalah semua bahan, baik yang berkhasiat maupun tidak berkhasiat, yang berubah maupun tidak berubah, yang digunakan dalam pengolahan obat walaupun tidak semua bahan tersebut masih terdapat di dalam produk ruahan (Siregar, 2010).
Menurut Dirjen POM (2006), bahan (zat) aktif adalah tiap bahan atau campuran bahan yang akan digunakan dalam pembuatan sediaan farmasi dan apabila digunakan dalam pembuatan obat menjadi zat aktif obat tersebut. Dalam arti lain, bahan (zat) aktif adalah bahan yang ditujukan untuk menciptakan khasiat farmakologi atau efek langsung lain dalam diagnosis, penyembuhan, peredaan, pengobatan atau pencegahan penyakit, atau untuk memengaruhi struktur dan fungsi tubuh.
Zat aktif senyawa kimia murni tunggal jarang diberikan langsung sebagai sediaan obat. Akan tetapi, sediaan obat yang diformulasikan hampir selalu diberikan. Sediaan obat ini dapat beragam dari larutan yang relatif sederhana sampai ke sistem penghantaran sediaan obat yang rumit, dengan menggunakan zat tambahan atau eksipien dalam formulasi untuk memberikan fungsi farmasetik yang berbeda–beda sesuai dengan tujuan yang dimaksud (Siregar, 2010).
Desain dan formulasi suatu bentuk sediaan yang tepat mensyaratkan pertimbangan karakteristik fisika, kimia, dan biologi semua zat aktif dan eksipien yang digunakan dalam pembuatan suatu produk (Siregar, 2010).
2.3 Syarat-Syarat Bahan Baku
Semua bahan baku yang digunakan harus memenuhi persyaratan resmi farmakope atau persyaratan lain yang disetujui oleh regulator atau oleh industri
(16)
farmasi yang bersangkutan. Selain itu, bahan–bahan yang dibeli harus sesuai dengan spesifikasi hasil uji praformulasi agar diperoleh mutu obat yang konsisten dan memenuhi persyaratan keamanan, khasiat, stabilitas, dan ketersediaan hayati (Siregar, 2010).
Beberapa rangkuman tentang ketentuan persyaratan bahan baku menurut Dirjen POM (2006), adalah sebagai berikut:
1. Pemasok bahan awal dan pengemas dievaluasi dan disetujui untuk memenuhi spesifikasi mutu yang telah ditentukan oleh perusahaan.
2. Tiap spesifikasi hendaklah disetujui dan disimpan oleh bagian Pengawasan Mutu kecuali untuk produk jadi yang harus disetujui oleh kepala bagian Manajemen Mutu (Pemastian Mutu).
3. Spesifikasi bahan awal hendaklah mencakup dimana diperlukan.
4. Revisi berkala dari tiap spesifikasi perlu dilakukan agar memenuhi Farmakope edisi terakhir atau kompendia resmi lain.
a. Deskripsi bahan, termasuk:
i. Nama yang ditentukan dan kode refren (kode produk) internal. ii. Rujukan monografi farmakope, bila ada.
iii. Pemasok yang disetujui dan bila mengkin produsen bahan. iv. Standar mikrobiologis, bila ada.
b. Petunjuk pengambilan sampel dan pengujian atau prosedur rujukan. c. Persyaratan kualitatif dan kuantitatif dengan batas penerimaan. d. Kondisi penyimpanan dan tindakan pengamanan.
(17)
5. Identitas suatu bets bahan awal biasanya hanya dapat dipastikan apabila sampel diambil dari tiap wadah dan dilakukan uji identitas terhadap tiap sampel.
6. Pengambilan sampel boleh dilakukan dari sebagian wadah bila telah dibuat prosedur tervalidasi untuk memastikan bahwa tidak satupun wadah bahan awal yang salah label identitasnya.
7. Mutu suatu bets bahan awal dapat dinilai dengan mengambil dan menguji sampel representatif. Sampel yang diambil untuk uji identitas dapat digunakan untuk tujuan tersebut.
8. Jumlah yang diambil untuk menyiapkan sampel representatif hendaklah ditentukan secara statistik dan dicantumkan dalam pola pengambilan sampel. 9. Jumlah sampel yang dapat dicampur menjadi satu sampel komposit hendaklah
ditetapkan dengan petimbangan sifat bahan, informasi tentang pemasok dan homogenitas sampel komposit itu.
2.4 Obat Kulit Topikal Kortikosteroid
Obat kortikosteroid mempunyai daya kerja antialergi dan antiradang. Penggunaan obat kortikosteroid dalam obat topika, kadang-kadang kurang jelas daya kerjanya. Tapi yang jelas, obat kulit topikal kortikosteroid sangat efektif terhadap penyakit eksem (Sartono,1996).
Obat kortikosteroid yang mengandung fluor seperti betametason, flucinolon, dan klobetasol mempunyai daya kerja yang lebih besar. Akan tetapi penggunaan obat kortikosteroid yang mengandung fluor dalam jangka waktu lama, dapat menyebabkan pelebaran kapiler dan pembuluh nadi halus yang bersifat permanen sampai terjadi atropi kulit (Sartono,1996).
(18)
Kortikosteroid mempengaruhi metabolisme karbohidrat, protein dan lemak ; dan mempengaruhi juga fungsi sistem kardiovaskular, ginjal, otot lurik, sistem syaraf dan organ lain. Karena fungsi kortikosteroid penting untuk kelangsungan hidup organisme, maka dikatakan bahwa korteks ardenal berfungsi homeostatik, artinya : penting bagi organisme untuk dapat mempertahankan diri dalam menghadapi perubahan lingkungan (Suharti,1995).
Kortikosteroid merupakan obat-obat manjur terkuat dalam pengebotan gangguan kulit dan digunakan secara luas. Berkat efek antiradang dan antimitosisnya (yang menghambat atau mencegah pembelahan sel) zat-zat ini dapat menyembuhkan dengan efektif bermacam-macam bentuk ekzem dan dermatitis, psoriasis (penyakit sisik), prurigo (bintil-binti gatal), berbagai rupa gatal-gatal, dan lain-lain. Akan tetapi tidak jarang gangguan (khususnya ekzem) segera kambuh lagi, terutama bila digunakan fluorkortikoida dengan khasiat kuat (Tan Hoan Tjay, 2002).
Menurut Anief, 1999 obat kortikosteroid tersedia dalam bentuk salep dan krim. Salep adalah sediaan setengah padat yang mudah dioleskan dan digunakan sebagai obat luar. Bahan obatnya larut atau terdispersi homogen dalam dasar salep yang cocok dan salep tidak boleh berbau tengik. Krim adalah suatu salep yang berupa emulsi kental, mengandung tidak kurang dari 60 % air, dimaksudkan untuk pemakaian luar.
Sedangkan menurut Farmakope Edisi IV, 1995 krim adalah bentuk sediaan setengah padat mengandung satu atau lebih bahan obat terlarut atau terdispersi dalam bahan dasar yang sesuai. Istilah ini secara tradisional telah digunakan untuk
(19)
sediaan setengah padat yang mempunyai konsistensi relatif cair diformulasi sebagai emulsi air dalam minyak atau minyak dalam air.
2.5 Betametason valerat Rumus Bangun:
Struktur Betametason Valerat Rumus Molekul : C22H37FO6
Berat Molekul : 476,58
Nama Kimia : 9-fluoro-11β,17,21-trihidroksi-16β-metilpregna-1,4-diena- 3,20-dion17-valerat[2152-44-5]
Pemerian : Serbuk, putih sampai praktis putih, tidak berbau, melebur pada suhu lebih kurang 190o disertai peruraian
Kelarutann : Praktis tidak larut dalam air, mudah larut di dalam aseton
dan dalam kloroform, larut dalam etanol, sukar larut dalam benzena dan dalam eter
Syarat Kadar : Betametason valerat mengandung tidak kurang dari 97,0% Dan tidak lebih dari 103,0% C27H37FO6, dihitung terhadap zat yang telah dikeringkan
Wadah Penyimpanan : Penyimpanannya dalam wadah tertutup rapat
Baku Pembanding : Betametason valerat BPFI; di lakukan pengeringan pada suhu 105o selama 3 jam sebelum digunakan
(20)
Susut Pengeringan : Tidak lebih dari 0,5%; di lakukan pengeringan pada suhu 105o selama 3 jam (Dirjen POM,1995).
2.6 Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)
Kemajuan dalam teknologi kolom, sistem pompa tekanan tinggi, dan detektor yang sensitif telah menyebabkan perubahan kromatografi kolom cair menjadi suatu sistem pemisahan dengan kecepatan dan efisiensi yang tinggi. Metode ini dikenal sebagai kromatografi cair kinerja tinggi atau disebut juga dengan HPLC (High Performance Liquid Chromatograpy). Dengan teknologi ini dalam banyak hal dapat menghasilkan pemisahan yang sangat cepat seperti pada kromatografi gas, dengan keunggulan zat-zat yang tidak menguap atau yang tidak tahan panas dapat dikromatorafi tanpa peruraian atau tanpa perlunya membuat derivat yang dapat menguap (Dirjen POM, 1995).
Pada kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) menggunakan pelarut atau fase gerak yang mempunyai sifat seperti:
-Murni, tanpa cemaran
-Tidak bereaksi dengan kemasan -Sesuai dengan detektor
-Dapat melarutkan cuplikan -Mempunyai viskositas rendah
-Memungkinkan memperoleh kembali cuplikan dengan mudah, jika diperlukan
-Harganya wajar (Johnson,1991).
Alat utama HPLC yaitu terdiri tandon pelarut, pipa, pompa, penyuntikan, kolom, detektor, perekam.
(21)
1. Tandon Pelarut
Tandon pelarut atau fase gerak mempunyai ciri yaitu bahan tendon harus lembab terhadap berbagai fase gerak berair dan tak berair. Sehingga baja anti karat jangan dipakai pada pelarut yang mengandung ion halida dan jika harus bertekanan, hindari menggunakan gelas. Daya tampung tendon harus lebih besar dari 500 ml, yang dapat digunakan selama 4 jam untuk kecepatan air yang umumnya 1-2 ml/menit (Munson,1991).
2. Pipa
Pipa merupakan penyambung seluruh bagian sistem. Garis tengah dalam pipa sebelum penyuntikan tidak berpengaruh, hanya saja harus lembam dan tahan tekanan serta mampu dilewati pelarut dengan volume yang memadai. Tetapi garis tengah dan panjang pipa setelah penyuntikan sangat menentukan (Munson,1991). 3. Pompa
Pompa harus dibuat dari bahan yang lembam terhadap semua bahan pelarut. Bahan yang umum digunakan adalah gelas, baja nirkarat, teflon dan batu nilam. Pompa harus mampu menghasilkan tekanan sampai 5000 psi pada kecepatan sampai 3 ml/menit. Aliran pelarut dari pompa harus tanpa denyut atau direndam untuk menghasilkan denyut, karena denyut alir pelarut dapat menyebabkan hasil yang lancung bagi beberapa detektor. Kecepatan alir yang dihasilkan pompa harus tetap, baik untuk keperluan jangka pendek maupun panjang (Munson,1991). 4. Sistem penyuntikan
Teknik penyuntikan harus dilakukan dengan cepat untuk mencapai ketelitian maksimum analisi kuantitatif. Yang terpenting sistem harus dapat mengatasi tekanan balik yang tinggi tanpa kehilangan cuplikan. Pada saat pengisian
(22)
cuplikan, cuplikan dialirkan melewati lingkar cuplikan dan kelebihannya
dikeluarkan ke pembuangan. Pada saat penyuntikan, katup diputar sehingga fase gerak mengalir melewati lingkar cuplikan ke kolom (Munson,1991).
5. Kolom
Kolom merupakan jantung kromatografi. Keberhasilan atau kegagalan analisis bergantung pada pilihan kolomdan kondisi kerja yang tepat. Kolom dapat dibedakan menjadi 2 kelompok:
a. Kolom analitik: garis tengah – dalam 2-6 mm. Panjang bergantung pada jenis kemasan, untuk kemasan partikel biasanya panjang gelombang 50-100 cm, untuk kemasan mikropartikel berpori biasanya 10-30 cm
b. Kolom preparatif: umumnya bergaris tengah 6 mm atau lebih besar dan panjang 25-100 cm (Johnson, 1991)
Dianjurkan untuk memasang penyaring 2 μm dijalur antara penyuntikan dan
kolom, untuk menahan partikel yang dibawa fase gerak atau teroken. Selama penggunaan penyaringan ini, sering tersumbat dan perlu diganti. Hal ini dapat memperpanjang umur kolom (Munson,1991).
6. Detektor
Detektor KCKT yang ideal hendaknya mempunyai beberapa sifat, dapat memberi tanggapan kepada terokan, kepekaan tinggi, hasilnya tinerulang, dan tanggapannya dapat diramalkan. Selain itu harus memberi tanggapan linier terhadap rentang jumlah terokan yang lebar serta harus tegar dan tidak terpengaruh oleh perubahan suhu atau komposisi fase gerak (Munson,1991).
Detektor yang merupakan tulang punggung kromatografi cair kinerja tinggi modern ialah detektor UV 254 nm. Detektor UV-tampak dengan panjang
(23)
gelombang yang berubah-ubah sekarang menjadi populer karena dapat dipakai untuk mendeteksi senyawa dala lingkup lebih luas (Johnson,1991).
7. Perekaman
Perekaman berfungsi untuk merekam atau menunjukkan hasil pemeriksaan suatu senyawa berupa peak (puncak). Dari daftra tersebut secara kualitatif kita dapat mengetahui senyawa apa yang diperiksa, dan secara kuantitatif dapat diketahui luas dan tinggi puncak yang berbanding lurus dengan konsentrasi (Johnson,1991).
KCKT mempunyai beberapa keuntungan bila dibandingkan dengan sistem pemisahan lain, diantaranya:
1. Proses cepat, untuk analisis yang tidak murni, dapat dicapai waktu analisis kurang dari 5 menit.
2. Daya pisahnya baik, kemampuan linarut berinteraksi secara selektif dengan fase diam dan fase gerak memberikan parameter tambahan untuk mencapai pemisahan yang dikehendaki
3. Detektornya peka dan unik, detektor yang digunakan UV 254 nm yang dapat mendeteksi berbagai jenis senyawa dalam jumlah nanogram.
4. Kolom dapat dipakai kembali, tetapi mutunya menurun. Laju penurunan mutu tergantung pada jenis cuplikan yang disuntikkan, kemurnian pelarut, dan jenis pelarut yang dipakai.
5. Ideal untuk molekul besar dan ion
6. Mudah memperoleh kembali cuplikan karena detektor tidak merusak cuplikan. Pelarut dapat dihilangkan dengan penguapan (Johnson,1991).
(24)
BAB III
METODOLOGI PERCOBAAN
3.1 Tempat Pelaksanaan
Penetapan kadar ini dilakukan di laboratorium yang terdapat di industri PT Kimia Farma (Persero) Tbk. Plant Medan yang beralamat di Jl. Tanjung Morawa Km.9 No. 59 Medan.
3.2 Alat-Alat
Alat-alat yang digunakan adalah alat-alat gelas Merk PYREX IWAKI, timbangan analitik digital Merk SARTORIUS-AG, type MSE 225P-100-DU Ultrasonic digital Merk ELMA type D-78224 dan seperangkat alat HPLC (High
Performance Liquid Chromatography) Merk WATERS DETECTOR.
3.3 Bahan-Bahan
Bahan-bahan yang digunakan adalah acetonitril, aquabidest, asam asetat glasial, metanol, betametason valerat Baku Pembanding Farmakope Indonesia (BPFI), dan betametason valerat baku.
3.4 Pengambilan Sampel Uji
Metode pengambilan sampel dilakukan berdasarkan permintaan yang diajukan oleh produksi dan dilakukan secara acak yang dapat mewakili semuanya dengan menggunakan rumus 1 + √�. Dari 16 kemasan sampel bahan baku yang ada, terpilih 5 sampel bahan baku yang akan diambil dan kemudian dijadikan sampel.
(25)
3.5Pembuatan Pereaksi
3.5.1 Pembuatan Pelarut Metanol : Asam Asetat Glasial (1000:1)
Diambil 1 ml asam asetat glasial kemudian dimasukkan kedalam beaker glass. Ditambahkan metanol sebanyak 1000 ml, kemudian diaduk sampai homogen.
3.5.2 Pembuatan Fase Gerak Asetonitril : Aquabidest (6:4)
Diambil 600 ml asetonitril kemudian dimasukkan kedalam beaker glass. Ditambahkan dengan aquabidest sebanyak 400 ml. Kemudian diaduk sampai homogen.
3.6 Pembuatan Larutan 3.6.1 Larutan Standar
Timbang seksama 25 mg betametason valerat BPFI, masukkan ke dalam labu tentukur 50 ml, tambahkan 20 ml pelarut metanol : asam asetat glasial (1000:1) , kocok dengan Ultrasonic Bath hingga larut, kemudian tambahkan pelarut sampai volume tepat 50 ml, kocok sampai homogen, pipet 1 ml larutan, masukkan kedalam labu tentukur 25 ml, lalu tambahkan pelarut sampai garis tanda, kocok sampai homogen, kemudian di saring larutan dan di masukkan ke dalam botol vial, larutan siap untuk dianalisis di HPLC (High Performance Liquid Chromatography).
(26)
3.6.2 Larutan Sampel
Timbang seksama 25 mg betametason valerat, masukkan ke dalam labu tentukur 50 ml, tambahkan 20 ml pelarut metanol : asam asetat glasial , kocok dengan Ultrasonic Bath hingga larut, kemudian tambahkan pelarut sampai volume tepat 50 ml, kocok sampai homogen, pipet 1ml larutan, masukkan kedalam labu tentukur 25 ml, lalu tambahkan pelarut sampai garis tanda, kocok sampai homogen, kemudian di saring larutan dan di masukkan ke dalam botol vial, larutan siap untuk dianalisis di HPLC (High Performance Liquid Chromatography).
3.7 Penetapan Kadar 3.7.1 Larutan Standar
Tahapan kerja penetapan kadar yang dilakukan adalah sebagai berikut: 1. Hidupkan seperangkat alat HPLC (High Performance Liquid
Chromatography) waters detector 2489, pump 1525.
2. Klik program HPLC (High Performance Liquid Chromatography) yang terdapat dikomputer dan diatur; fase gerak : setonitril : aquabidest (60:40), fase diam : Bondapack C18 (3,9 × 300 mm), panjang gelomban: 254 nm, volume injeksi : 20 µl, flow rate: 1,2 ml/menit.
3. Diinjeksikan larutan standar betametason valerat BPFI menggunakan spuit 1 ml sebanyak 1 ml, dilakukan sebanyak 6 kali pengulangan.
(27)
3.7.2 Larutan Sampel
Tahapan kerja penetapan kadar yang dilakukan adalah sebagai berikut:
1. Hidupkan seperangkat alat HPLC (High Performance Liquid Chromatography) waters detector 2489, pump 1525.
2. Klik program HPLC (High Performance Liquid Chromatography) yang terdapat dikomputer dan diatur; fase gerak: asetonitril : aquabidest (60:40), fase diam: Bondapack C18 (3,9 × 300 mm), panjang gelomban: 254 nm, volume injeksi: 20 µl, flow rate: 1,2 ml/menit.
3. Diinjeksikan larutan betametason valerat sampel menggunakan spuit 1 ml sebanyak 1 ml, dilakukan sebanyak 2 kali pengulangan (duplo). 4. Dilihat hasilnya di monitor berupa kromatogram dan kadar.
Perhitungan penetapan kadar bahan baku secara HPLC (High Performance Liquid Chromatography) dapat dilakukan dengan menggunakan
rumus sebagai berikut:
AUC sp
AUC st
× St BPFI %
Keterangan:
AUC sp : Luas Area Sampel AUC st : Luas Area Standar
(28)
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1Hasil
Penetapan kadar bahan baku betametason valerat secara HPLC (High Performance Liquid Chromatography) didapat hasil kadarnya sebesar 101,06 %.
Tabel 4.1. Data Hasil Standar No Name
Sampel Bobot
Kons. Standar [St] Luas Area Waktu Retensi Kadar (%) 1. Standar 1 25 mg 0,01 348611 5,447 100,92 2. Standar 2 25 mg 0,01 348752 5,460 100,92 3. Standar 3 25 mg 0,01 349940 5,457 100,92 4. Standar 4 25 mg 0,01 349690 5,462 100,92 5. Standar 5 25 mg 0,01 349585 5,467 100,92 6. Standar 6 25 mg 0,01 349510 5,463 100,92 Rata-rata 25 mg 0,01 349348 5,459 100,92 Standar Deviasi 538 0,007 0,000
%RSD 0,2 0,1 0,0
Tabel 4.2. Data Hasil Sampel No Name
Sampel Bobot
Kons. Standar [St] Luas Area Waktu Retensi Kadar (%) 1. Sampel 1 25 mg 0,01 350001 5,456 101,11 2. Sampel 2 25 mg 0,01 349665 5,450 101,01 Rata-rata 25 mg 0,01 349833 5,453 101,06 Standar Deviasi 237 0,005 0,069
%RSD 0,1 0,1 0,1
4.2Pembahasan
Menurut Farmakope Indonesia Edisi IV, rentang kadar bahan baku betametason valerat adalah tidak kurang dari 97,00% dan tidak lebih dari 103,00%. Dengan demikian, bahan baku betametason valerat yang telah ditetapkan kadarnya tersebut telah memenuhi persyaratan kadar.
(29)
Zat aktif obat merupakan bagian dari suatu formulasi dalam gabungan dengan satu atau lebih zat-zat nonaktif atau nonmedis yang mengandung fungsi farmasetik beragam yang dikehendaki dan khusus. Sebelum suatu zat aktif dapat diformulasikan dengan berhasil kedalam suatu bentuk sediaan, banyak faktor yang harus dipertimbangkan dan faktor ini dapat dikelompokkan secara luas dalam 3 kategori, yaitu:
• Pertimbangan biofarmasetik, termasuk berbagai faktor yang memengaruhi absorpsi zat aktif dari rute pemberian yang berbeda.
• Berbagai faktor obat, seperti sifat fisika dan kimia zat aktif.
• Pertimbangan terapeutik, termasuk pertimbangan penyakit yang akan diobati dan faktor pasien (Siregar,2010).
Kegunaan KCKT adalah untuk pemisahan sejumlah senyawa organik, anorganik, maupun senyawa biologis. KCKT merupakan metode yang tidak destruktif dan dapat digunakan baik untuk analisis kualitatif dan kuantitatif (Munson,1991).
Prinsip dari metode KCKT adalah bila sampel telah dimasukkan dengan suatu penyuntik KCKT, maka akan dibawa melalui kolom bersama suatu fase gerak akibat adanya tekanan dari pompa data yang dihasilkan ditunjukkan berupa puncak oleh suatu perekam (Munson, 1991).
(30)
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 Kesimpulan
Kadar bahan baku betametason valerat adalah 101,11 dan 101,01% dengan rata-rata kadar 101,06%. Penetapan kadar bahan baku betametason valerat yang nantinya akan digunakan menjadi bahan berkhasiat dalam formulasi pembuatan krim betametason 0,1% oleh PT. Kimia Farma (Persero) Tbk. Plant Medan, memenuhi persyaratan kadar bahan baku yang tertera pada Farmakope Indonesia edisi ke-IV yaitu tidak kurang dari 97,00% dan tidak lebih dari 103,00%.
5.2 Saran
Disarankan kepada industri PT. Kimia Farma (Persero) Plant Medan dapat tetap mempertahankan kualitas bahan bakunya.
(31)
DAFTAR PUSTAKA
Anief, M. (1990). Perjalan dan Nasib Obat Dalam Badan. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press. Hal. 1.
Anief, M. (1999). Ilmu Meracik Obat. Cetakan ke 7. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press. Hal. 28.
Anief, M. (2007). Apa Yang Perlu Diketahui Tentang Obat. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press. Hal. 3, 6.
Dirjen, POM. (1995). Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal. 142-143, 1009.
Dirjen, POM. (2006). Cara Pembuatan Obat Yang Baik. Jakarta: Badan POM. Hal. 5, 77, 98, 237.
Johnson, E. L. dan Stevenson, R. (1991). Dasar Kromatografi Cair kinerja Tinggi. Bandung: Penerbit ITB. Hal. 4-9.
Munson, J. W. (1991). Analisis Farmasi Metode Modern Parwa B. Surabaya: Airlangga University Press. Hal. 14, 26-32.
Sartono. (1996). Apa Yang Sebaiknya Anda Ketahui Tentang Obat Wajib Apoteker. Edisi kedua. Jakarta: PT. Gramedia Pustaka Utama. Hal. 88, 89, 94.
Siregar, J. P. (2010). Teknologi Farmasi Sediaan Tablet. Jakarta: EGC. Hal. 651. Suharti, k, S. (1995). Farmakologi dan Terapi. Edisi IV. Jakarta: Gaya Baru. Hal.
486.
Tan Hoan Tjay, R, K. (2002). Obat-obat Penting. Edisi V, Cetakan 2. Jakarta: Penerbit PT Elex Media Komputindo Kelompok Gramedia. Hal. 3, 686.
(32)
Lampiran 1
Perhitungan Kadar Bahan Baku Betametason Valerat
Kadar bahan baku betametason valerat dihitung dengan rumus sebagai berikut:
AUC sp
AUC st
× St BPFI %
Keterangan:
AUC sp : Luas Area Sampel AUC st : Luas Area Standar
St BPFI % : Standar Baku Pembanding Primer a. Data Luas Area Standar
No. Sample Name Betamethason 1. Std. Betamethason 1 348611 2. Std. Betamethason 2 348752 3. Std. Betamethason 3 349940 4. Std. Betamethason 4 349690 5. Std. Betamethason 5 349585 6. Std. Betamethason 6 349510
Mean 349348
Std. Dev. 532
%RSD 0,2
b. Data Luas Area Sampel
No. Sample Name Betamethason 1. BB 1 (a) 350001 2. BB 1 (b) 349665
Mean 349833
Std. Dev. 237
%RSD 0,1
• Kadar Bahan Baku Betametason valerat BB 1 (a)
= AUC sp
AUC st × St BPFI %
= 350001
(33)
= 101,106%
• Kadar Bahan Baku Betametason valerat BB 1 (b)
= AUC sp
AUC st × St BPFI %
= 349665
349348 × 100,917 % = 101,009%
Kadar rata−rata =101,106 % + 101,009 %
2 = 101,057%
Kadar bahan baku betametason valerat adalah sebesar 101,057%
c. Standar Deviasi Larutan Standar Betametason Valerat BPFI
No. � (� − �) (� − �)²
1. 348611 737 543169
2. 348752 596 355216
3. 349940 -592 350464
4. 349690 -342 116964
5. 349585 -237 56169
6. 349510 -162 26244
∑ 2096088 0 1448226
Rata-rata 349348 0 241371
SD = �Ʃ (� − �)² n−1 SD = �1448226
6−1 SD = �1448226
5 SD = �289645,2 SD = 538,1 SD = 538
(34)
• % RSD (Relative Standard Deviation)
% RSD = SD
� × 100%
% RSD = 538
349348 × 100% % RSD = 0,2%
d. Standar Deviasi Larutan Standar Betametason Valerat
No. � (� − �) (� − �)²
1. 350001 -168 28224
2. 349665 168 28224
∑ 699666 0 56448
Rata-rata 349833 0 28224
SD = �Ʃ (� − �)² n−1 SD = �56448
2−1 SD = �56448
1 SD = √56448 SD = 237
• % RSD (Relative Standard Deviation)
% RSD = SD
� × 100% % RSD = 237
349833× 100% % RSD = 0,1%
(35)
Lampiran 2
(36)
(37)
Lampiran 3
Gambar alat-alat yang digunakan:
a. Alat HPLC (High Performance Liquid Chromatography) Merk WATERS DETECTOR 2489, PUMP 1525.
b. Timbangan Analitik Digital (Digital Analitycal Balance) Merk SARTORIUS-AG Tipe MSE225P-100-DU
c. Ultrasonic Digital
(1)
Lampiran 1
Perhitungan Kadar Bahan Baku Betametason Valerat
Kadar bahan baku betametason valerat dihitung dengan rumus sebagai berikut:
AUC sp
AUC st
× St BPFI %
Keterangan:AUC sp : Luas Area Sampel AUC st : Luas Area Standar
St BPFI % : Standar Baku Pembanding Primer
a. Data Luas Area Standar
No. Sample Name Betamethason 1. Std. Betamethason 1 348611 2. Std. Betamethason 2 348752 3. Std. Betamethason 3 349940 4. Std. Betamethason 4 349690 5. Std. Betamethason 5 349585 6. Std. Betamethason 6 349510
Mean 349348
Std. Dev. 532
%RSD 0,2
b. Data Luas Area Sampel
No. Sample Name Betamethason
1. BB 1 (a) 350001
2. BB 1 (b) 349665
Mean 349833
Std. Dev. 237
%RSD 0,1
• Kadar Bahan Baku Betametason valerat BB 1 (a) = AUC sp
AUC st × St BPFI %
= 350001
(2)
= 101,106%
• Kadar Bahan Baku Betametason valerat BB 1 (b) = AUC sp
AUC st × St BPFI %
= 349665
349348 × 100,917 %
= 101,009%
Kadar rata−rata =101,106 % + 101,009 %
2 = 101,057%
Kadar bahan baku betametason valerat adalah sebesar 101,057%
c. Standar Deviasi Larutan Standar Betametason Valerat BPFI
No. � (� − �) (� − �)²
1. 348611 737 543169
2. 348752 596 355216
3. 349940 -592 350464
4. 349690 -342 116964
5. 349585 -237 56169
6. 349510 -162 26244
∑ 2096088 0 1448226
Rata-rata 349348 0 241371
SD = �Ʃ (� − �)²
n−1
SD = �1448226
6−1
SD = �1448226
5
SD = �289645,2
SD = 538,1 SD = 538
(3)
• % RSD (Relative Standard Deviation)
% RSD = SD
� × 100%
% RSD = 538
349348 × 100%
% RSD = 0,2%
d. Standar Deviasi Larutan Standar Betametason Valerat
No. � (� − �) (� − �)²
1. 350001 -168 28224
2. 349665 168 28224
∑ 699666 0 56448
Rata-rata 349833 0 28224
SD = �Ʃ (� − �)²
n−1
SD = �56448
2−1
SD = �56448
1 SD = √56448 SD = 237
• % RSD (Relative Standard Deviation)
% RSD = SD
� × 100%
% RSD = 237
349833× 100%
(4)
Lampiran 2
(5)
(6)
Lampiran 3
Gambar alat-alat yang digunakan:
a. Alat HPLC (High Performance Liquid Chromatography) Merk WATERS DETECTOR 2489, PUMP 1525.
b. Timbangan Analitik Digital (Digital Analitycal Balance) Merk SARTORIUS-AG Tipe MSE225P-100-DU
c. Ultrasonic Digital