- Inkubator Exterior CB 150 dimension 680
- Hot plate -
- Biological Safety Cabinet -
3.2. Bahan
- Amylum Maydis - Lactose Broth
- Media TSA Tripple Sitrat Agar - NaCl 0,9
- Media EMBA Eosin Methylen Blue Agar - Aquadem
3.3. Prosedur Percobaan
3.3.1. Pembuatan Media Lactose Broth LB
Prosedur
Ambil 13 garam lactose broth dalam 1 liter aquadem,dipanaskan aquadem terlebih dahulu,kemudian dilarutkan dengan aquadem yang
telah dipanaskan sambil diaduk hingga merata,kemudian dipanaskan diatas hot plate.
Universitas Sumatera Utara
3.3.2. Pembuatan Media Eosin Methylen Blue Agar EMBA
Prosedur
Ambil 10 gram Eosin Methylen Blue Agar dalam1 liter Aquadem, dilarutkan dengan aquadem mendidih sebanyak 1 liter,kemudian
sterilkan media dengan autoklaf pada suhu 121ºC selama 15 menit 1 atm,selanjutnya tuang media sebanyak 15 ml kedalam cawan petri,
diinkubasi selama 24 jam pada suhu 30-35ºC.
3.3.3. Pembuatan Uji Batas Mikroba
Prosedur
Timbang 10 gram Amylum Maydis dalam beaker glass steril, larutkan dengan Media Lactose Broth sebanyak 100 ml sedikit demi sedikit,
kemudian tuang kedalam cawan petri steril inkubasi selama 48 jam pada suhu 35
– 37ºC,lalu digores Media EMBA setelah 48 jam yang telah memadat,selanjutnya dibungkus dengan kertas partament
inkubasi petri dalam keadaan terbalik selama 48 jam pada suhu 35- 37ºC, kemudiaan diamati ada tidaknya bakteri Escherichia Coli
dengan melihat adanya perubahan warna biru hitam kilau logam yang khas.
Universitas Sumatera Utara
3.3.4. Pembuatan Media Lactose Broth LB
Prosedur
Ambil 13 gram Lactose Broth dalam 1 liter Aquadem, dipanaskan aquadem terlebih dahulu,kemudian dilarutkan dengan aquadem yang
telah dipanaskan sambil diaduk hingga merata, kemudian dipanaskan diatas hot plate.
3.3.5. Pembuatan Media Tripple Sitrat Agar TSA
Prosedur
Ambil 13 gram Media Tripple Sitrat Agar dalam 1 litern aquadem,panaskan aquadem terlebih dahulu, kemudiaan dilarutkan
dengan aquadem sebanyak 1 liter dan diaduk hingga merata, selanjutnya dipanaskan diatas hot plate.
3.3.6. PembuatanUji Angka Lempeng Total
Prosedur
Timbang 10 gram Amylum Maydis dalam Erlenmeyer steril, tambahkan media Lactose Broth Cair aduk hingga merata, kemudian
tuang kedalam petri steril dan tuang Media TSA sebanyak 15 ml, lalu masukkan kedalam inkubator pada suhu 35-37ºC, selanjutnya inkubasi
selam 3 hari untuk Uji ALT, kemudiaan dihitung jumlah koloni yang tumbuh dengan melihat adanya warna merah bata.
Universitas Sumatera Utara
BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1. Hasil
4.1.1. Tabel Hasil Identifikasi Bakteri Escherichia coli terhadap bahan baku
Amylum Maydis dapat dilihat pada table di bawah ini: NO Pemeriksaan
Persyaratan Hasil
1 Pemerian
1-9 Serbuk sangat halus, putih
atau putih kekuningan Serbuk sangat halus,
putih atau
putih kekuningan
2 Kelarutan
1-9 Praktis tidak larut dalam air
dingin dan dalam etanol Praktis tidak larut dalam
air dingin dan dalam etanol
3 Angka
Lempeng Total 1-9
Maks. 1000 cfug 40 cfug
4 Uji
Batas Mikroba
Tidak mengandung bakteri Escherichia Coli
Tidak mengandung
bakteri Escherichia Coli 5
Identifikasi Memenuhi Pengujian
Memenuhi Pengujian
Universitas Sumatera Utara
4.2. Pembahasan
4.2.1 Tabel Perhitungan Angka Lempeng Total Jumlah Koloni yang tumbuh
HariTanggal Sampel Jumlah Koloni
10‾¹ 10‾²
28 – 12 -
2015 Aylum
Maydis Tidak ada koloni yang
tumbuh Tidak ada koloniyang
tumbuh 1
– 1 – 2016 Amylum
Maydis 40
25 15
45 10
25 50
100 50
Rumus untuk perhitungan koloni Faktor Pengenceran = Pengenceran × Jumlah Koloni
1. 10‾¹ = 8
= 8 × 10 =80 : 2 = 40 2.
10‾¹ = 5 = 5 × 10 = 50 : 2 = 25
3. 10‾¹ = 3
= 3 × 10 = 30 ; 2 = 15 4.
10‾¹ = 9 = 9 × 10 = 90 : 2 = 45
Universitas Sumatera Utara
5. 10‾¹ = 2
= 2 × 10 = 20 : 2 = 10 6.
10‾¹ = 5 = 5 × 10 = 50 : 2 = 25
7. 10‾² = 1
= 1 × 100 = 100 : 2 = 50 8.
10‾² =2 = 2 × 100 = 200 : 2 = 100
9. 10‾² = 1
= 1 × 100 = 100 : 2 = 50 Jadi jumlah seluruh koloni yang tumbuh : jumlah perlakuan360 : 9 = 40 cfug.
Identifikasi bakteri Escherichia Coli terhadap bahan baku Amylum Maydis dilakukan dengan pemerian sebanyak 9 kali yang menghasilkan serbuk sangat
halus berwarna putih dan putih kekuningan,kelarutan tidak larut dalam air dingin dan etanol tetapi larut dalam air panas mendidih, ,selanjutnya dilakukan dengan
dua metode yaitu Uji Angka Lempeng Total dan Uji Batas Mikroba untuk melihat adanya jumlah koloni dan bakteri Escherichia Coli pada bahan baku
amylum maydis dan identifikasi telah memenuhi syarat dan standart Farmakope Edisi V.
Pada pengujian Angka Lempeng Total digunakan media Lactose Broth LB sebagai pengencer suspense dan menggunakan media Tripple Sitra Agar
TSA sebagai media padatnya, pengujian Angka Lempeng Total ini harus dilakukan secara steril dan aseptik, dipipet 1 ml sampel yang telah disuspensi
kedalam tabung reaksi steril yang telah berisi 9 ml NaCl 0,9 dan
Universitas Sumatera Utara
dihomogenkan selama 30 detik sehingga diperoleh suspense dengan pengenceran 10‾ ¹ , disiapkan 5 tabung masing – masing terdiri dari 9 ml NaCl 0,9.hasil dari
homogenisasi pada penyiapan sampe l yang merupakan pengenceran 10‾¹ dipipet
sebanyak 1 ml kedalam tabung reaksi pertama dikocok homogen hingga pengenceran 10
‾² dibuat pengenceran selanjutnya dari setiap pengenceran dipepit 1 ml kedalam cawan petri.dituangkan media Tripple Sitrat Agar TSA sebanyak
15 ml cawan petri digoyang dan diputar hingga suspense merata seluruhnya,setelah media memadat cawan diinkubasi pada suhu 35
– 37 ºC selama 24 jam dengan posisi terbalik, setelah itu jumlah koloni yang tumbuh
diamati dan dihitung. Besarnya jumlah koloni tercemar dalam sampel amylum maydis
tersebut dapat disebabkan akibat proses pembuatan sampel yang kurang memperhatikan unsur sanitas dan higenis, dapat pula diakibatkan oleh adanya
kontaminasi mikroba pada saat pengerjaan atau pemeriksaan.kurangnya kebersihan dari wadah sangat mempengaruhi besarnya jumlah kontaminan
mikroba pada sampel bahan baku amylum maydis . Kontaminasi dapat terjadi dari proses awal pembuatan sampel, yaitu
melalui proses penyiapan bahan yang tidak steril hingga proses distribusi dan penjualan pada konsumen, dimana faktor lingkungan terutama area pengujian
yang tidak steril memberikan peran cukup besar pada kontaminasi sampel oleh mikroba yang terdapat pada udara.berdasarkan ketentuan farmakope edisi V pada
uji angka lempeng total ini masih sesuai dengan standart dimana batas koloni sebanyak 10
– 150 cfug dan koloni yang diperoleh pada pengujian ini sebanyak 40 cfu g.
Universitas Sumatera Utara
Dalam proses ini prosedur Uji Batas Mikroba Sampel yang ditimbang adalah bahan baku amylum maydis sebanyak 10 gram ,kemudian dimasukkan
kedalam beaker glass steril lalu dilarutkan dengan media lactose broth sebanyak 100 ml dan dikocok hingga homogeny, kemudian media dituang kedalam cawan
petri steril,diinkubasi selama 48 jam pada suhu 35 – 37 ºC, setelah media
memadat digores dengan media EMBA ,lalu dibungkus dengan kertas partament, kemudiaan diinkubasi selama 48 jam dalam keadaan petri terbalik pada suhu 35-
37 ºC ,setelah itu diamati ada tidaknya bakteri Escherichia Coli dengan melihat adanya warna biru hitam kilau logam.Berdasarkan standart farmakope jilid V
untuk pemeriksaan bahan baku amylum maydis harus bebas dari bakteri Escherichia Coli karena bakteri ini dapat menyebabkan penyakit seperti:
1. infeksi saluran kemih
E coli adalah penyebab utama infeksi saluran kemih ISK dan diperkirakan sekitar 90 ISK pada wanita muda disebabkan oleh E Coli.
Gejala – gejala ISK antara lain adalah poliuria, dissuria, hematuria, dan piuria
serta serta nyeri panggul berhubungan dengan infeksi saluran kemih bagian atas. ISK dapat menyebabkan bakterimia dengan tanda klinis sepsis.terjadinya
gangguan ginjal berhubungan dengan E Coli.
2. diare
- E Coli yang menyebabkan diare diklasifikasikan berdasarkan karakteristik
sifat – sifat virulensannya dan setiap grup menyebabkan penyakit melalui
mekanisme yang berbeda.
Universitas Sumatera Utara
- E Coli enteropatogen EPEC merupakan penyebab diare terpenting pada
bayi, terutama dinegara yang sedang berkembang. -
E Coli enterotoksigenik ETEK merupakan penyebab diare pada pelancong traveller’s diarrhea .
- E Coli enterohemogarik EHEK dan jalur yang memproduksi verotoxin
VTEX di amerika serikat menyebabkan sejumlah kejadian luar biasa diare, colitis hemogarik dan HUS. Colitis hemogarik dan HUS merupakan
komplikasi dari diare ringan yang pertama kali pada anak- anak umur pra sekolah dan penderita dewasa.sumber infeksi dapat berasaldari daging dan
poduk hewan seperti susu dan humburger. -
E Coli enteronvasif EIEC menyebabkan penyakit yang sangat mirip dengan shigellosis. Penyakit ini paling banyak terjadi pada anak
– anak dinegara yang sedang berkembang dan pada para pelancong.
- E Coli enteroagregatif EAEC menyebabkan diare akut dan kronik pada
orang- orang dinegara yang sedang berkembang. 3.
Sepsis E Coli bisa masuk peredaran darah dan menyebabkan sepsis.Bayi
– bayi yang baru lahir sangat peka terhadap sepsis disebabkan E Coli karena mereka
tidak memiliki antibody IgM.Sepsis bisa terjadi sebagai efek sekunder dari ISK. 4.
Meningitis E Coli merupakan penyebab utama meningitis pada bayi, disamping
stereptokokus grup B. kurang lebih 75 E Coli dari kasus meningitis memiliki antigen KI, antigen ini bisa bereaksi silang dengan polisakarida kapseluler grup B
dari neisseria meningitis.
Universitas Sumatera Utara
Sehingga pada pengujian Identifikasi Bakteri Escherichia Coli Terhadap Bahan Baku Amylum Maydis didapat jumalah koloni sebanyak 40 cfug dengan
melihat adanya warna merah bata dan koloni ini masih sesuai dengan standart farmakope edisi V dimana dalam buku tersebut,koloniyang diperbolehkan itu
berjumlah sebanyak 10 – 150 cfugkoloni tersebut didapat karena terjadinya
kontaminasi udara maupun ruangan yang kurang steril dan bersih.Pada pengujian Batas Mikroba tidak diperoleh atau ditemukan bakteri Escherichia coli yang
menunjukkan adanya perubahan warna biru hitam kilau logam yang kahas, ini dikarenakan pengujian yang memenuhi standart sesuai dengan Farmakope Edisi V
dimana pada saat pengujian harus steril dan ruangan tidak terkontaminasi oleh bakteri lain dan pengujian Batas Mikroba ini dilakukan didalam ruang Unit Safety
Cabinet yaitu ruang Uji yang steril dan memasuki ruangan ini harus memakai berbagai macam alat dan pakaian yang steril.
Universitas Sumatera Utara
BAB 5
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1. Kesimpulan -
