Waktu dan Tempat Bahan dan Alat Isolasi Bakteri Endofit Dari Akar Tanaman Mentigi

BAB 3 BAHAN DAN METODE

3.1 Waktu dan Tempat

Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Januari sampai dengan Juli 2013 di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sumatera Utara Medan.

3.2 Bahan dan Alat

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah akar mentigi V. varingaefolium dari Gunung Sinabung. Fungi yang digunakan yaitu Rigidoporus microporus dari Balai Penelitian Karet Sei Putih dan Fusarium oxysporum, Ganoderma boninense, Saprolegnia sp., koleksi Laboratorium Mikrobiologi FMIPA USU, media nutrient agar NA, media potato dextrose agar PDA, yeast ekstrak YE, kloroks 1, alkohol 70, akuades, metanol, n-hexana, etilasetat, ketokonazole 200 mg, zat pewarna Gram, dimetil sulfoksida DMSO, zat-zat uji biokimia, beberapa pereaksi yang digunakan dalam metode skrining fitokimia dan lain-lain. Alat-alat yang digunakan antara lain adalah autoclave, vortex, pipet serologi, pipet mikro, pro pipet, cawan Petri, blank disc oxoid, inkubator, hot plate, corkborer dan perlengkapan laboratorium lainnya.

3.3 Isolasi Bakteri Endofit Dari Akar Tanaman Mentigi

Isolasi bakteri endofit dari akar dan daun dilakukan dengan metode sterilisasi permukaan menurut metode Radu Kqueen 2002. Sampel yang diambil dari lokasi dimasukkan ke dalam plastik diletakkan di dalam termos yang berisi es batu, kemudian sampel dibawa ke laboratorium mikrobiologi untuk isolasi bakteri endofit. Tahap awal yang dilakukan adalah mencuci akar dengan air mengalir selama 20 menit. Sterilisasi bagian permukaan akar dilakukan dengan cara merendamnya di dalam larutan secara berturut-turut: etanol 75 selama 2 menit, larutan sodium Universitas Sumatera Utara hipoklorit 5,3 selama 5 menit dan etanol 75 selam 30 detik. Selanjutnya akar dibilas dengan akuades steril, setelah kering bagian ujung kiri dan kanan akar dipotong 1 cm, kemudian masing-masing akar dipotong membujur dan diletakkan di permukaan media NA yang telah dicampur dengan antibiotik ketokonazole 0,3 g100 ml dengan posisi bekas potongan ke arah media, kemudian diinkubasi pada suhu ruang selama 5 hari. Koloni yang muncul disubkultur ke media NA yang baru untuk dimurnikan.

3.4 Karakterisasi Bakteri Endofit Akar Tanaman Mentigi