sirih merah dengan peringkat dosis berturut-turut, yaitu 1,38 ; 2,07 ; 3,105 gkgBB tikus.
10. Prosedur pelaksanaan toksisitas subkronis
Sediaan uji berupa infusa daun sirih merah diberikan pada hewan uji sesuai dosis pemberian dengan kekerapan pemberian satu kali sehari selama 28
hari pada tikus jantan dan betina dengan tetap diberi makan dan minum. Pada awal masa uji yaitu pada hari pertama, darah semua tikus diambil melalui sinus
orbitalis mata. Pengambilan darah dilakukan dengan menusukkan pipa kapiler
langsung ke sinus orbitalis mata. Sampel darah yang diambil kemudian ditampung pada eppendorf yang telah diberi kode kemudian dikirim ke Parahita Medical Lab
untuk dilakukan pengukuran kadar kreatinin darah tikus. Pemberian infusa daun sirih merah dilakukan selama 28 hari pada setiap kelompok perlakuan sesuai
dengan peringkat dosis. Pada hari ke-29 darah semua tikus diambil melalui vena orbitalis mata ditampung pada eppendorf untuk diambil serum darah kemudian
dilakukan kembali pengukuran kadar kreatinin tikus. Pada hari ke-29 juga dilakukan pembedahan setengah dari hewan uji baik jantan maupun betina untuk
dilakukan pemeriksaan histopatologi ginjal. Kemudian pada hari ke-42 14 hari setelah hari ke-28 pembedahan hewan uji yang tersisa untuk melihat
reversibilitas wujud toksik ginjal. 11.
Pemeriksaan histopatologis
Untuk pemeriksaan histopatologis, sebelumnya tikus dikorbankan dengan cara diskolasi leher yaitu cara mematikan hewan uji dengan cara menarik leher
dan ekor secara bersamaan sehingga tulang leher patah. Kemudian dilakukan
pembedahan terhadap tikus. Tikus diletakkan secara terlentang diatas papan pembedahan gabussteroform dan dibedah dengan membuat irisan digaris tengah
ventral tubuh mulai dari area bukaan genitalia hingga ke leher. Rongga perut dan rongga dada dibuka. Setelah pembedahan, organ ginjal diambil untuk dilakukan
pemeriksaan histopatologis. Organ kemudian dicuci bersih dengan akuades kemudian difiksasi, diletakkan didalam pot yang berisi formalin 10.
12. Histopatologi ginjal
Organ ginjal yang telah diambil selanjutnya dibuat preparat agar mudah diamati dibawah mikroskop. Pembuatan preparat histopatologi tersebut secara
berurutan difiksasi di dalam larutan buffer netral formalin, trimming, dehidrasi, infiltrasi dengan parafin, diiris dengan mikrotom dan diwarnai dengan
hematosilin-eosin HE. Pewarnaan dilakukan dengan cara menginkubasi preparat otot dengan larutan Mayer’s hematoxilyn selama 5 menit, kemudian diinkubasi
dalam larutan Eosin 0,5 yang sudah ditambah asam asetat 100 : 1.
13. Pengamatan dan pengumpulan data
a. Pengamatan berat badan hewan uji
Pengamatan berat badan terhadap hewan uji dilakukan dengan cara menimbang hewan uji dengan timbangan. Penimbangan berat badan hewan uji
dilakukan setiap hari. Perhitungan purata berat badan tikus dilakukan dengan cara menambahkan berat badan tikus kemudian dibagi dengan jumlah tikus di tiap
kelompok dilakukan pada hari 0, 7, 14, 21, 28. Kemudian data yang diperoleh dianalisis secara statistik.
Kategori