29
3.9 Sterilisasi Alat
Alat-alat yang digunakan dalam uji aktivitas antibakteri ini, disterilkan terlebih dahulu sebelum dipakai. Alat-alat gelas disterilkan didalam oven pada
suhu 170°C selama 1 jam. Media disterilkan di autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit. Jarum ose dan pinset disterilkan dengan lampu bunsen Lay, 1994.
3.10 Pembuatan Media 3.10.1 Pembuatan media nutrient agar NA
Komposisi: Lab-Lemco powder 1,0 g
Yeast exstract 2,0 g
Peptone 5,0 g
Sodium chloride 5,0 g
Agar 15,0 g
Cara pembuatan : Sebanyak 28 g nutrient agar dilarutkan dalam air suling steril ad 1000 mL
kemudian dipanaskan hingga semua larut, dalam keadaan panas larutan tersebut kemudian dimasukkan dalam erlenmeyer. Lalu disterilkan di autoklaf pada suhu
121°C selama 15 menit Oxoid, 1982.
3.10.2 Pembuatan media nutrient broth NB
Komposisi: Lab-Lamco powder 1,0
g Yeast extract
2,0 g
Peptone 5,0
g Sodium chloride
5,0 g
Universitas Sumatera Utara
30 Cara pembuatan :
Sebanyak 13 g nutrient broth dilarutkan dalam air suling steril ad 1000 mL kemudian dipanaskan hingga semua larut, dalam keadaan panas larutan tersebut
kemudian dimasukkan dalam erlenmeyer. Lalu disterilkan di autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit Oxoid, 1982.
3.10.3 Pembuatan media mueller hinton agar
Komposisi: Meat Infusion
6,0 g
Casein Hydrolysate 17,5 g
Starch 1,5
g Agar No. 1
10,0 g
Cara pembuatan : Sebanyak 35 g mueller hinton agar dilarutkan dalam air suling steril ad
1000 mL kemudian dipanaskan hingga semua larut, dalam keadaan panas larutan tersebut kemudian dimasukkan dalam erlenmeyer. Lalu disterilkan di autoklaf
pada suhu 121°C selama 15 menit Oxoid, 1982.
3.11 Pembuatan Media Agar Miring
Sebanyak 3 mL media nutrient agar cair, dimasukkan ke dalam tabung reaksi, diletakkan pada sudut kemiringan 30
o
- 45
o
dan dibiarkan memadat, kemudian disimpan di lemari pendingin Lay, 1994.
3.12 Pembuatan Larutan Uji Dengan Berbagai Konsentrasi
Sebanyak 1 g ekstrak etanol daun mindi ditimbang seksama dengan neraca analitik, dilarutkan dengan pelarut DMSO sebanyak 2 mL dan diperoleh
konsentrasi ekstrak 500 mgmL. Dibuat pengenceran sampai diperoleh ekstrak
Universitas Sumatera Utara
31 dengan konsentrasi 400 mgmL, 300 mgmL, 200 mgmL, 100 mgmL, 75
mgmL, 50 mgmL, 25 mgmL. Dilakukan prosedur yang sama dengan fraksi n- heksana dan fraksi etilasetat.
3.13 Pembiakan Bakteri 3.13.1 Pembuatan stok kultur bakteri
Kategori